茄子種子攜帶真菌的檢測(cè)

高 葦，楊利娟，劉亞全，王 勇，馬建芳

（1.天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，天津 300384；2.天津市西青區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，天津 300381）

茄子（Solanum melongena L.）起源于亞洲南部熱帶地區(qū)，是一種以漿果為產(chǎn)品的1年或多年生草本植物。茄子是世界上第4大蔬菜作物，而我國(guó)是世界上最大的茄子生產(chǎn)國(guó)，全國(guó)各地均有種植，占世界總種植面積的42.14%。近年來，隨著我國(guó)設(shè)施農(nóng)業(yè)栽培面積的不斷擴(kuò)大，茄子已成為北方設(shè)施栽培的主要蔬菜種類之一。隨著設(shè)施茄子種植面積的逐年擴(kuò)大，其病害發(fā)生也日益嚴(yán)重。目前已報(bào)道的茄子上真菌性病原有33屬56種，其中黃萎病、枯萎病、綿腐病、輪紋病等是茄子生產(chǎn)中的主要真菌病害，對(duì)我國(guó)茄子的產(chǎn)量和品種造成巨大的影響。

由于茄子生產(chǎn)中連作和果實(shí)容易腐爛等因素的影響，茄子制種中種子帶菌現(xiàn)象非常嚴(yán)重。茄子枯萎病、黃萎病病原均可被種子攜帶，其在病害傳播過程中擔(dān)當(dāng)了重要傳播媒介。真菌可以吸附于種子表面或侵入種子組織內(nèi)部，從而對(duì)種子萌發(fā)、幼苗生長(zhǎng)、成株健康方面造成巨大的負(fù)面影響。目前，我國(guó)對(duì)于茄子種子攜帶真菌的研究屬于空白階段，鑒于近年來茄子種植中真菌病害，尤其是茄子枯萎病、黃萎病在我國(guó)逐年加重，對(duì)20個(gè)商品化茄子種子開展了種子帶菌檢測(cè)，以明確茄子種子攜帶病原真菌的情況，為茄子種植生產(chǎn)過程中的種子處理提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)在天津市植物保護(hù)研究所種苗病害研究室進(jìn)行。供試商品化茄子種子有20個(gè)品種（表1），分別來自陜西、山東、河北等繁種基地，均在通風(fēng)干燥的條件下保存。

1.2 種子帶菌檢測(cè)

1.2.1 種子外部帶菌檢測(cè)

采用吸水紙法，將無菌濾紙置于培養(yǎng)皿底部，加入無菌水浸潤(rùn)濾紙保濕。在供試20個(gè)品種中，每品種隨機(jī)挑選90粒種子進(jìn)行種子外部帶菌檢測(cè)，每個(gè)培養(yǎng)皿中鋪10粒種子，每個(gè)品種設(shè)3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3皿。25 ℃黑暗培養(yǎng)24 h后，－20 ℃凍存24 h（抑制種子萌發(fā)），凍存后取出繼續(xù)25 ℃黑暗培養(yǎng)7 d，每天觀察各處理種子帶菌情況，5 d后發(fā)現(xiàn)霉層并直接挑取于PDA平板中純化培養(yǎng)，并在體視顯微鏡和光學(xué)顯微鏡下鏡檢，再根據(jù)形態(tài)進(jìn)行種屬分類。統(tǒng)計(jì)不同品種茄子種子的帶菌數(shù)量，并計(jì)算其帶菌率，種子帶菌率＝（帶菌種子數(shù)/檢測(cè)種子總數(shù)）×100%。

1.2.2 種子內(nèi)部帶菌檢測(cè)

將種子外部消毒處理后，置于PDA培養(yǎng)皿中分離培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)皿放入16粒種子（挑選籽粒不飽滿的種子，因?yàn)槠鋷Ь矢撸?，每個(gè)品種3個(gè)培養(yǎng)皿。當(dāng)種子周圍長(zhǎng)出菌絲或表面有霉層時(shí)，移入PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)性狀和顯微形態(tài)特征進(jìn)行分類鑒定。每個(gè)供試品種3次重復(fù)。計(jì)算種子的帶菌率和分離頻率，特定菌分離頻率＝（帶某類菌種子數(shù)/帶菌種子總數(shù)）×100%。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用SAS軟件對(duì)茄子種子外部帶菌率進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 茄子種子表皮攜帶真菌檢測(cè)

由表1可知：從不同茄子種子表皮上分離到7個(gè)種子常見屬的真菌，其中曲霉菌、青霉菌、木霉菌、毛殼菌、根霉菌為腐生真菌，鐮刀菌和鏈格孢菌為茄子疑似病原真菌。種子表皮鐮刀菌、鏈格孢菌、毛殼菌的分離頻率較低，木霉菌、根霉菌、曲霉菌和青霉菌分離頻率較高，且不同來源茄子種子優(yōu)勢(shì)腐生菌也存在差異。不同茄子品種表皮攜帶真菌的帶菌率具有差異，其中墨玉長(zhǎng)茄和二苠茄的種子表皮帶菌率顯著高于其他商品種，黑龍長(zhǎng)茄的帶菌率最低；另外，在分離過程中還發(fā)現(xiàn)文獻(xiàn)中未報(bào)道的其他病原真菌，但需經(jīng)過進(jìn)一步的分子試驗(yàn)鑒定。

表1 茄子種子外部攜帶真菌種類及分離頻率 %

2.2 茄子種子內(nèi)部攜帶真菌檢測(cè)

由表2可知：從供試的20個(gè)茄子種子的內(nèi)部分離到7類真菌，其中包括鐮刀菌、鏈格孢菌2種病原真菌和青霉菌、木霉菌、毛殼菌、曲霉菌、根霉菌5種腐生真菌。種子內(nèi)部攜帶真菌數(shù)量較少，腐生真菌的分離可能與試驗(yàn)操作污染有關(guān)，僅在天賜黑油亮長(zhǎng)茄品種上分離到鏈格孢菌，其分離頻率為40.00%；墨玉長(zhǎng)茄上分離到鐮刀菌，其分離頻率為11.11%，而曾報(bào)道的茄子種子可能攜帶的黃萎病菌和綿疫病菌均未分離到。

表2 茄子種子內(nèi)部攜帶真菌種類和分離頻率 %

3 結(jié)論與討論

種子帶菌可導(dǎo)致病害的逐年發(fā)生和遠(yuǎn)距離傳播。植物病原真菌寄藏于種子表面或內(nèi)部后均可隨種子萌發(fā)而侵染。種子表面帶菌量顯著高于種子內(nèi)部帶菌量，種子表面攜帶根霉、曲霉等腐生菌較多，不同來源的種子其腐生菌種類具有差異，內(nèi)部帶菌量較少，分離到的腐生菌很可能與試驗(yàn)操作中污染相關(guān)。耿立華等、劉韜等、盧志軍等分別對(duì)西瓜、水稻和快菜不同品種進(jìn)行種子帶菌檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同種子外部帶菌差異較大，而內(nèi)部帶菌差異不大，主要攜帶鏈格孢菌和鐮刀菌2種疑似病原菌。

通過對(duì)供試的20個(gè)茄子品種的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其中13個(gè)茄子表皮攜帶鐮刀菌，16個(gè)茄子品種表皮攜帶鏈格孢菌，且這2種疑似病原菌的帶菌率較低，均在1.52%～13.64%。大多數(shù)情況下，鐮刀菌和鏈格孢菌為腐生菌。目前已報(bào)道的可侵染茄子的鏈格孢菌有12種，其中有5種在中國(guó)發(fā)現(xiàn)，分別為Aspergillus alternantherae、A.alternata、A.longipes、A.melongenae和A.solani，其中以鏈格孢菌（A.solani）和茄鏈格孢菌（A.melongenae）為主。我國(guó)報(bào)道的可侵染茄子的鐮刀菌有8種，分別為Fusarium anguioides、F.culmorum、F.graminearum、F.moniliforme、F.oxysporum、F.semitectum、F.solani和F.vasinfectum，其中以尖孢鐮刀菌（F.oxysporum）為主，并且其致病力最強(qiáng)，腐皮鐮刀菌（F.solani）多侵染嫁接茄子。本研究對(duì)茄子種子攜帶真菌進(jìn)行的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：茄子種子帶菌主要以腐生菌為主，未分離到報(bào)道的可通過種子傳播的黃萎病菌和綿疫病菌，種子表面分離到可引起茄子枯萎病和葉斑病的鐮刀菌和鏈格孢菌，但由于這2種病原菌不同菌株間存在顯著的致病力差異，需要進(jìn)一步試驗(yàn)判斷其是否具有致病力。