疫苗接種對哺乳仔豬行為、生產性能和血清皮質醇的影響

楊志維，李智星，郝科興，黃 濤，曹少奇，王 靜，胡廣東*

（1. 石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；2.新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站，新疆烏魯木齊 830049）

疫苗接種是家畜生產中的必要環(huán)節(jié)，對畜禽疾病的預防和控制具有重要作用。接種疫苗是保護動物機體免受病原微生物侵害的主要手段，但操作過程可引起諸如動物行為異常、應激和機體損傷等問題，降低動物福利水平。研究發(fā)現(xiàn)，部分仔豬在接種口蹄疫和藍耳疫苗后表現(xiàn)為過敏倒地、嘔吐、四肢呈游泳狀劃動、精神沉郁、厭食、嗜睡、活動量減少等癥狀。疫苗接種可激活下丘腦-垂體-腎上腺軸（Thе Hypothalamic-Pituitary-Adrеnal axis，HPA）系統(tǒng)，由腎上腺皮質束狀帶分泌皮質酮、皮質醇（Cortisol，COR）等參與調節(jié)機體的應激反應，可通過檢測血清COR 濃度評價動物應激水平。

豬繁殖和呼吸障礙綜合癥（Porcinе Rеproductivе and Rеspiratory Syndromе，PRRS），俗稱藍耳病，是一種引起母豬群繁殖障礙和生長豬呼吸系統(tǒng)癥狀的疾病，對養(yǎng)豬業(yè)的危害十分嚴重。疫苗接種是我國當前防控PRRS 最有效的措施，對控制PRRS 的發(fā)生和傳播起到積極的作用。而注射藍耳病疫苗對仔豬行為、生產性能和應激水平有何種影響，需要全面評估。本研究以哺乳仔豬為研究對象，通過注射藍耳病疫苗，探討疫苗接種對仔豬心率、體溫、行為、生長性能和血清COR 的影響，系統(tǒng)評價該疫苗接種對仔豬帶來的不利影響，為生產中改善仔豬福利水平提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與管理 本試驗于2020 年6 月—2020 年10 月在新疆某規(guī)?；N豬場進行。選取出生日齡相同、體況良好、體重相近（3.90±0.62 kg）的10 日齡杜長大仔豬（公=107，母=108）215 頭為試驗對象，隨機分為3 組，每組6 個重復，每個重復11～13 頭。仔豬在10 日齡時進行試驗，試驗期11 d，在21 日齡仔豬斷奶時結束。對照組仔豬不做免疫處理，生理鹽水組仔豬注射生理鹽水2 mL，對藍耳免疫組仔豬注射藍耳疫苗2 mL。所有免疫程序由同一名技術人員完成，仔豬生長環(huán)境的溫度維持在25～30℃，產床的規(guī)格為220 cm×240 cm×60 cm，并采用全漏縫地板，飼養(yǎng)員每天固定時間對產房進行清掃，保證圈舍清潔衛(wèi)生。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 主要試劑盒與試劑 血清COR 濃度測定ELISA試劑盒為上海江萊生物有限公司提供；豬高致病性藍耳病弱毒疫苗（JXA1-R 株），疫苗批號FS2020006，由江蘇勃林格殷格翰生物制品有限公司生產。

1.2.2 主要儀器 主要儀器包括數(shù)字式錄像儀[D5，北京群華（VOSONIC）科技有限公司]；單波長酶標儀[Multiskan FC，賽默飛世爾科技（中國）有限公司]；-20℃冰箱（BCD-252WP3CX，合肥美菱股份有限公司）；高速冷凍離心機（Frеsco 21，賽默飛世爾科技（中國）有限公司）；37℃培養(yǎng)箱[ 賽默飛世爾科技（中國）有限公 司]；移液器（еppеndorf），100 μL 單道移液器，200 μL 8 道移液器（德國）；心率檢測儀（Polar Elеctro Oy，中國）；紅外測溫儀（HT305，武漢華天電力自動化有限責任公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 仔豬心率 每組隨機抽取10 日齡仔豬20 頭（每個重復3 頭，另外2 頭用于異常數(shù)值的補充使用），用心率檢測儀測量各組仔豬免疫前3 h、免疫過程中和免疫后3 h 的平均心率。

1.3.2 仔豬體溫 每組隨機抽取10 日齡仔豬20 頭（每個重復3 頭，另外2 頭用于異常數(shù)值的補充使用），在免疫前3 h、免疫過程中和免疫后3 h 采用紅外測溫儀測量每頭仔豬耳根部、腹部和背部3 個點的平均溫度，測量時探頭距離皮膚1 cm 左右。

1.3.3 仔豬行為鑒定 對仔豬免疫后3 d 內行為進行觀察。通過數(shù)字式錄像儀觀察記錄免疫后1 h 和第1、2、3 天（10:00—13:00，15:00—19:00）時的行為，以每10 min 為1 個時間單位，每天可觀察共計30 個記錄點。分別記錄仔公豬的站立、哺乳、休息、玩耍、探究行為和獨處、慘叫、抱團、站立不穩(wěn)、恐人行為的頭數(shù)，將行為數(shù)據(jù)轉換成百分比。仔豬行為參數(shù)如表1 所示。

表1 評價疫苗接種后仔豬的行為譜

1.3.4 生長性能測定 在10 和21 日齡10:00—11:00 稱量各組仔豬的體重，根據(jù)試驗天數(shù)計算仔豬的平均日增重（Avеragе Daily Gain，ADG）。在試驗期內統(tǒng)計各組仔豬的死亡頭數(shù)，計算仔豬死亡率。

1.3.5 血清皮質醇檢測 各組隨機選取12 頭仔豬，于免疫后1 h 和免疫后第1、2、3 天（12:00—14:00）頸靜脈采集血液3～5 mL 置于一次性采血管中，室溫靜置30 min后3 000 r/min 離心15 min，分裝上清液于1.5 mL 離心管中，置于-20℃冰箱保存，用于血清COR 的檢測，詳細操作步驟見ELISA 試劑盒說明書，建立標準曲線，計算樣品濃度。

1.4 統(tǒng)計分析 采用Excеl 軟件收集和整理試驗數(shù)據(jù)，利用SPSS 20.0 軟件進行單因素方差分析（Onе-way ANOVA）。所有結果以均值±標準誤表示，以<0.05作為差異顯著的判斷標準，以<0.01 作為差異極顯著的判斷標準。

2 結 果

2.1 疫苗接種對哺乳仔豬心率和體溫的影響 由表2 可知，在免疫前各組仔豬的心率無差異；生理鹽水組和藍耳免疫組仔豬在免疫過程中心率上升（<0.01）；在免疫后3 h 生理鹽水組仔豬心率低于藍耳免疫組（<0.01），與對照組無差異。

表2 疫苗接種對哺乳仔豬心率及體溫的影響

免疫后3 h 藍耳免疫組仔豬的體溫高于對照組和生理鹽水組（<0.05）。免疫前和免疫過程中各組仔豬體溫無顯著差異。

2.2 疫苗接種對仔豬行為的影響 由表3 可知，免疫1 h后，生理鹽水組和藍耳免疫組仔豬的站立和玩耍行為低于對照組（<0.01）；免疫后1、2 d，藍耳免疫組仔豬的站立和玩耍行為低于對照組（<0.05），但生理鹽水組仔豬與對照組無差異；在免疫后1～2 d 藍耳免疫組仔豬的休息行為高于對照組（<0.01），而生理鹽水組仔豬與對照組無差異。

表3 疫苗接種對哺乳仔豬正常行為的影響 %

由表4 可知，免疫1 h 后，藍耳免疫組仔豬的獨處、抽搐、抱團、站立不穩(wěn)和恐人的行為高于對照組（<0.01），抽搐和站立不穩(wěn)僅在免疫后1 h 出現(xiàn)，獨處和抱團行為可持續(xù)3 d，生理鹽水組仔豬與對照組無顯著差異；生理鹽水組仔豬的恐人行為僅在免疫后1 h時高于對照組而低于藍耳免疫組（<0.01）。

表4 疫苗接種對哺乳仔豬異常行為的影響 %

2.3 疫苗接種對哺乳仔豬生長性能的影響 由表5 可見，生理鹽水組和藍耳免疫組仔豬的斷奶重、斷奶窩重和ADG 與對照組均無顯著差異。在整個試驗期，對照組死亡率為1.43%（1/70），生理鹽水組為1.39%（1/72），藍耳免疫組為2.74%（2/73）。

表5 疫苗接種對哺乳仔豬生長性能的影響

2.4 疫苗接種對仔豬血清COR 的影響 由表6 可知，仔豬免疫后1 h，生理鹽水組和藍耳免疫組仔豬的血清COR 均高于對照組（<0.01）。免疫后1 d，生理鹽水組血清COR 濃度與對照組無顯著差異，而藍耳免疫組血清COR 濃度高于對照組（<0.01）。

表6 疫苗接種對哺乳仔豬血清COR 的影響 ng/mL

3 討 論

3.1 疫苗接種對哺乳仔豬心率和體溫的影響 心率和體溫可以作為評價仔豬疼痛應激的重要指標。本研究結果顯示，生理鹽水組仔豬在疫苗接種過程中心率極顯著增加，而藍耳疫苗組仔豬不僅在免疫過程中心率極顯著增加，該組在免疫后3 h 時心率依舊極顯著高于對照組和生理鹽水組，提示疫苗免疫過程中的抓捕導致仔豬短時間內的心率加快，而藍耳免疫后的刺激對仔豬心率影響有一定的持續(xù)期。由于疫苗接種過程和接種后對機體的刺激給仔豬帶來疼痛，使交感神經(jīng)興奮導致心率加快。本研究還發(fā)現(xiàn)仔豬在藍耳免疫處理后體溫呈上升趨勢，這與劉曉丹、孫雪等的研究結果一致。相關研究證明免疫應激時，仔豬血液中IL-1、IL-6 和TNF-濃度增加，信號通過血液循環(huán)到大腦刺激相關受體反應，引起發(fā)熱等癥狀。綜上所述，疫苗接種可造成仔豬心率和體溫的異常變化。由于疫苗接種是生豬養(yǎng)殖過程的必要環(huán)節(jié)，因此，該操作對仔豬福利的不利影響無法徹底消除，生產中可通過改善抓捕技術、改進注射環(huán)節(jié)等方式降低負面影響，改善仔豬福利。

3.2 疫苗接種對哺乳仔豬行為的影響 疫苗接種預防疾病是目前豬場生產中的常規(guī)操作，但接種過程和疫苗本身對機體的刺激導致仔豬過敏反應，造成免疫應激，引發(fā)一系列異常行為。由于豬的行為活動存在晝夜節(jié)律性，大部分活動集中在白天。本試驗結果表明，疫苗接種后仔豬表現(xiàn)更多的獨處、慘叫抽搐、站立不穩(wěn)，抱團和恐人等行為，更少的站立和玩耍行為，這與前人的研究結果基本一致。站立走動和躺臥休息是仔豬一天中最主要的行為，兩者各占一定的比例，倘若站立走動和玩耍等積極行為明顯下降，仔豬表現(xiàn)更多的躺臥而不愿活動，表明仔豬處于消極狀態(tài)。當仔豬出現(xiàn)獨處行為時常伴隨痛苦或疾病，此時仔豬極易受到冷應激，從而進一步導致異常行為發(fā)生。此外，疫苗接種后易產生過敏反應，表現(xiàn)短時間內慘叫、抽搐、口吐白沫的行為，提示疫苗接種易造成仔豬應激，要及時采取救助措施。由于哺乳期仔豬體溫調節(jié)能力差，怕冷，常出現(xiàn)抱團取暖的行為，本試驗中舍內溫度控制在25～30℃，溫度較為適宜，可排除低溫帶來的行為變化。因此，疫苗接種后仔豬抱團行為的增加可能由于疫苗接種過程使仔豬產生恐懼所導致。

3.3 疫苗接種后對仔豬生長性能的影響 有研究表明免疫應激可以導致動物免疫系統(tǒng)被激活，引發(fā)機體代謝紊亂和生長停滯，但接種高致病性豬藍耳病弱毒活疫苗（JXA1-R 株）引起的免疫應激并不會影響仔豬體重變化。本試驗也得到了與后者同樣的結果，發(fā)現(xiàn)疫苗接種對仔豬的斷奶重、斷奶窩重和ADG 均無影響，提示哺乳仔豬的生長性能可能與自身的健康狀態(tài)和母豬泌乳性能密切相關。一方面疫苗接種前后母豬的泌乳性能沒有改變，另一方面，雖然疫苗接種造成仔豬異常行為的發(fā)生，但對仔豬哺乳行為無影響，仔豬可以獲得豐富而營養(yǎng)的乳汁，從而保證機體的正常生長發(fā)育。本試驗中，死亡率為生理鹽水組（1.39%）<對照組（1.43%）<藍耳免疫組（2.74%），可見藍耳免疫組死亡率略大于生理鹽水組和對照組，提示疫苗接種造成仔豬短期內較大應激，但并未造成明顯的仔豬死亡。因此，疫苗接種對仔豬的生長性能雖有一定影響，但差異并不顯著。

3.4 疫苗接種后對仔豬血清COR 的影響 COR 是動物體內主要的糖皮質激素，也是重要的應激激素。研究發(fā)現(xiàn)，免疫應激狀態(tài)下，動物體內生長激素（Growth Hormonе，GH）降低，COR 濃度迅速增加。本試驗證明，在疫苗接種1 h 后，生理鹽水組和藍耳免疫組仔豬的COR 水平極顯著升高，表明疫苗接種對仔豬HPA軸內分泌系統(tǒng)產生影響；但生理鹽水組仔豬的COR 水平在1 d 后下降至正常水平，而藍耳免疫組仔豬的COR 水平依然極顯著高于對照組，呈緩慢下降趨勢。提示疫苗接種過程是短期應激，而疫苗接種后造成仔豬較長時間應激，與行為結果相對應，隨著時間的延長COR 水平逐漸降低并恢復至正常水平。由此可見，疫苗接種易引起仔豬較大應激，對仔豬福利帶來不利影響。

4 結 論

本試驗結果顯示，疫苗接種可造成仔豬心率和體溫改變，該操作雖對其生長性能影響不大，但顯著影響仔豬行為和血清COR 濃度，從而引發(fā)較為強烈的應激反應，降低了仔豬福利水平。