豬瘟病毒的研究進(jìn)展

王瑞平/河南省鶴壁市淇縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所 456750

豬瘟是家豬和野豬最重要的病毒性傳染病之一。對動物健康及養(yǎng)豬業(yè)有極大影響，因此發(fā)生豬瘟病毒時(shí)，須向世界動物衛(wèi)生組織報(bào)告。在實(shí)施嚴(yán)格的控制措施之后，一些國家成功地根除了豬瘟病毒。然而，在世界上豬產(chǎn)量很高的大多數(shù)地區(qū)，豬瘟病毒是零星存在的。在南美洲和中美洲的幾個(gè)國家、東歐的部分地區(qū)和鄰國以及包括印度在內(nèi)的亞洲國家，都存在有豬瘟疫情。

1 臨床癥狀及病理形態(tài)學(xué)改變

典型的豬瘟可分為以下幾種疾?。杭毙裕院统掷m(xù)性過程，通常在懷孕期間感染。一般來說，在家豬和野豬身上都可以看到同樣的臨床癥狀，并且在感染后4～7d(很少是10d)的潛伏期后出現(xiàn)。這種進(jìn)展取決于菌株的毒力、宿主反應(yīng)和繼發(fā)感染，而且可能有很大的差異。感染豬瘟病毒的幼豬可作為急性疾病病程的一個(gè)例子：在感染后的前2周，急性期的特點(diǎn)是非特異性(通常稱為“非典型”)臨床癥狀，如高燒、厭食癥、胃腸道癥狀、全身虛弱和結(jié)膜炎。感染后約2～4 周可出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，包括不協(xié)調(diào)、癱瘓、癱瘓和抽搐。同時(shí)，皮膚出血或發(fā)紺可出現(xiàn)在不同的部位，如耳朵，四肢，腹部。這些晚期癥狀是教科書上的案例，因此被稱為“典型的”豬瘟體征。

在急性致死過程中，死亡通常發(fā)生在感染后2～4 周.根據(jù)動物的年齡和病毒株的毒力，死亡率可在10～30d內(nèi)達(dá)到100%。由于豬瘟感染的免疫抑制特性，引起呼吸道和胃腸道繼發(fā)感染可使病程復(fù)雜化。這對于臨床診斷尤為重要。如“瑪格麗塔”或“Koslov”等高致病性豬瘟病毒株(通常用于疫苗測試)的感染顯示出較少的年齡依賴性臨床過程，并可能在7～10d 內(nèi)造成所有年齡動物的100%死亡率和嚴(yán)重的神經(jīng)癥狀。

當(dāng)被感染的豬無法產(chǎn)生足夠的免疫反應(yīng)時(shí)，就會發(fā)生慢性過程。一般來說，受感染的動物只有非特異性的臨床癥狀，如發(fā)熱、精神沉郁、消瘦和彌漫性皮炎。所有慢性感染的動物最終都會死亡。它們可以活一個(gè)月，在這個(gè)月里，病豬會不斷地排出大量的病毒。

當(dāng)感染發(fā)生在懷孕期間，病毒也可以感染仔豬，通過胎盤屏障，可能導(dǎo)致持續(xù)感染的仔豬。母豬通常只表現(xiàn)出輕微的臨床癥狀，而感染則會導(dǎo)致胎兒吸收或木乃伊化，導(dǎo)致流產(chǎn)或死產(chǎn)。當(dāng)懷孕50～70d 感染時(shí)，可誘發(fā)免疫耐受現(xiàn)象，并產(chǎn)生持續(xù)感染的后代。問題是，這些仔豬看起來很健康，存活了幾個(gè)月，但由于所謂的遲發(fā)性豬瘟死亡。在此期間，它們釋放的病毒載量很高，足以傳播。最近的研究討論，在出生后8h內(nèi)，甚至出生后48h內(nèi)感染新生仔豬，也會引起持續(xù)感染。事實(shí)證明，這會影響疫苗的效力，并可能使受影響的國家的控制復(fù)雜化。

病理表現(xiàn)取決于病毒感染的過程。在腦脊液急性發(fā)作過程中，病理常表現(xiàn)為淋巴結(jié)腫大、出血、黏膜斑、漿膜及黏膜表面不同部位，如肺、腎、腸、膀胱等。可觀察到扁桃體炎、腸壞死性潰瘍、淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)病變和非化膿性腦炎。脾梗死的發(fā)生，并被認(rèn)為是腦脊液的病理基礎(chǔ)。受感染的仔豬出現(xiàn)白細(xì)胞減少、血小板減少和免疫抑制，從而增加繼發(fā)感染的風(fēng)險(xiǎn)，從而增加胃腸道和呼吸系統(tǒng)疾病的風(fēng)險(xiǎn)。慢性病變包括胸腺萎縮、淋巴器官衰竭、小腸、結(jié)腸和回盲瓣壞死和潰爛。重要的是要考慮到這些臨床征象和病理病變應(yīng)該被認(rèn)為是鑒別一些豬的病原體。根據(jù)宿主因子和豬瘟病毒毒株的毒力，這些非特異性的臨床癥狀和病變在動物個(gè)體不同可能有所不同的臨床癥狀。通常情況下，年齡、品種和免疫狀況對疾病的結(jié)果起著一定的作用。

2 流行病學(xué)

豬瘟病毒可以水平傳播，也可以垂直傳播。水平傳播是通過感染豬和易感豬之間的直接或間接接觸發(fā)生的。重要的間接途徑包括喂食受病毒污染的垃圾或污水，以及通過接觸人類或農(nóng)業(yè)和獸醫(yī)設(shè)備進(jìn)行機(jī)械傳播。實(shí)驗(yàn)表明了豬瘟病毒可通過氣溶膠傳播，很可能在畜群傳播中起一定作用。

接觸時(shí)，感染通常通過口鼻途徑發(fā)生，或較少發(fā)生于結(jié)膜、黏膜、皮膚擦傷、人工授精和使用受污染的器械。被感染的豬表現(xiàn)出高滴度的病毒血癥和脫落病毒，至少從臨床疾病開始到死亡或特異性抗體已經(jīng)形成。主要排泄途徑有唾液、淚液、尿液、糞便和精液。長期感染的豬只會持續(xù)或間歇性地排出病毒，直至死亡。

中國擁有世界上最大的養(yǎng)豬業(yè)，占全球總產(chǎn)量的一半以上，還有近4000萬頭母豬和70 億頭肥育豬。根據(jù)“中國獸醫(yī)公報(bào)”，2010年、2011年、2012年、2013 年 和2014 年分別記錄了475、268、115、28 和28 起病例。2017 年只有21 起病例。結(jié)果表明，近年來我國豬瘟疫情呈下降趨勢。盡管這一數(shù)據(jù)令人鼓舞，但中國在根除豬瘟病毒方面仍面臨挑戰(zhàn)。隨著過去幾年的疫情大幅度地被零星暴發(fā)所取代，野生型豬瘟的毒力也有所下降，疾病的發(fā)展過程已從急性和亞急性向慢性型轉(zhuǎn)變。此外，有充分資料顯示，豬瘟病毒可能會由野豬直接或間接擴(kuò)散至家豬。

中國面臨的一個(gè)主要挑戰(zhàn)是防止中、小型豬場暴發(fā)豬瘟。大型豬場的免疫率很高，因?yàn)樗械呢i(公豬、母豬、仔豬和育肥豬)都接種了疫苗，但中小型養(yǎng)豬場沒有得到很好的支持，面臨免疫問題，包括：(1)免疫耐受的母豬在進(jìn)入種群前不被淘汰；(2)免疫程序不規(guī)范，不遵循母體抗體的曲線，因此，仔豬可能得不到足夠的免疫；(3)不每年監(jiān)測抗體滴度。在這種情況下，即使群體接受免疫接種，免疫效果也不理想。

3 混合感染

由豬瘟病毒和其他病原體共同感染使診斷、治療和預(yù)防方案復(fù)雜化；發(fā)病率和死亡率可能相當(dāng)高。在我國，常見的豬瘟混合感染病原有豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、偽狂犬病病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒2 型(PCV 2)、豬流感病毒(SIV)等。目前有一些病例報(bào)告說，PRRSV 和豬瘟病毒復(fù)合感染在中國豬群中很常見。

4 診斷

快速可靠的診斷對于及時(shí)實(shí)施對豬瘟病毒控制措施至關(guān)重要。在國際一級，“動物衛(wèi)生組織陸地動物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊”和相應(yīng)的“歐盟診斷手冊”(歐洲聯(lián)盟委員會第2002/106/EC號決定)載有實(shí)驗(yàn)室方法以及取樣和運(yùn)輸準(zhǔn)則。

對于豬瘟病毒，采用建立完善的實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)系統(tǒng)進(jìn)行初步檢測。除了RT-PCR 檢測方法外，還設(shè)計(jì)了一些替代方法，例如循環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)分析引物-探針能量轉(zhuǎn)移RT-qPCR 或最近絕緣的等溫RT-qPCR。還可以在豬腎細(xì)胞系PK 15 或SK6 等不同的細(xì)胞系上分離豬瘟病毒。用熒光抗體或免疫過氧化物酶檢測組織固定冷凍物上的抗原也是可能的。ELISA 僅推薦用于基于豬群的檢測血清學(xué)篩查可以使用不同的商業(yè)上可用的E2 抗體。

在使用DVA 疫苗時(shí)，需要可靠的DIVA(區(qū)分受感染動物和接種動物)的檢測?？膳cE2 亞單位疫苗和嵌合疫苗(如“CP7_E2alf”)一起進(jìn)行的商業(yè)試驗(yàn)，目的是檢測針對糖蛋白Erns 的抗體。最近，還開發(fā)了更多的診斷測試。一種是最近商業(yè)化的雙抗原ELISA 檢測。另一種是帶有篩選和確認(rèn)部分的ELISA 檢測方法。

由于診斷工具(尤其是RT-qPCR)敏感性的提高，疫苗病毒檢測在野豬口服疫苗接種和家豬疫苗接種項(xiàng)目中非常普遍。為此，已開發(fā)和測試了不同的RT-qPCR 系統(tǒng)，使疫苗和野毒之間的區(qū)別。

采樣可能是豬瘟診斷的問題，尤其是在野豬的情況下，而且在偏遠(yuǎn)地區(qū)也是如此。為此，已對豬瘟(通常與非洲豬瘟抽樣相結(jié)合)進(jìn)行了替代抽樣策略和樣本矩陣的測試，特別是在野生動物標(biāo)本和農(nóng)村條件下。然而，它們中的大多數(shù)尚未在日常使用中，需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

5 根除戰(zhàn)略

世界上有兩種控制豬瘟病毒的策略：預(yù)防性免疫和綜合撲殺。對于大多數(shù)沒有地方性豬瘟病毒的國家，如美國、加拿大、巴西、智利、南非和歐盟國家，都采用撲殺來控制。在我國，大規(guī)模撲殺是不可行的，因?yàn)槟壳邦A(yù)防接種是減輕豬瘟病負(fù)擔(dān)的最佳途徑。C 株疫苗在我國得到了廣泛的應(yīng)用，但除了不能區(qū)分自然感染豬和免疫豬外，C 株疫苗的使用還帶來了免疫優(yōu)化、免疫抑制、疫苗質(zhì)量以及疫苗的可獲得性和依從性等實(shí)際問題。例如，母豬的抗體水平可能在90%以上，但不同豬的抗體滴度不均勻。多年來，中國科學(xué)家一直在努力開發(fā)新的基因標(biāo)記疫苗和E2 亞單位疫苗，這些疫苗將成為根除豬瘟病毒的有力工具。新疆天康畜牧生物技術(shù)有限公司于2016 年研制了重組E2亞基疫苗RB-03 株。用該工程菌株接種后，對豬進(jìn)行了免疫試驗(yàn)。受接種的豬沒有出現(xiàn)豬瘟病毒的臨床癥狀，很快就清除了病毒。如果這樣的疫苗能產(chǎn)生可靠的臨床保護(hù)，中國的豬就不會再被豬瘟病毒毒株感染。亞單位疫苗的保護(hù)效果與C 株無明顯差異。

隨著中國政府對豬瘟病毒根除的重視，大型豬場的生物安全水平也在不斷提高。下文列出了要實(shí)現(xiàn)根除豬瘟的目標(biāo)，必須追求的一些具體條件。條件是：(1)協(xié)同防治。除了監(jiān)測和記錄豬瘟的感染率和抗體水平外，還應(yīng)密切監(jiān)測其他經(jīng)常與豬瘟合并感染的重要疾 病(如PRRS、PCAD、PR 等)；(2)技術(shù)支助。根除計(jì)劃需要熟練的獸醫(yī)，最新的診斷和監(jiān)測技術(shù)；(3)必須廣泛提供高質(zhì)量的疫苗；(4)在需要時(shí)維持或追求高質(zhì)量的生物安全。應(yīng)每年進(jìn)行兩次病原學(xué)調(diào)查，并在可能的情況下，應(yīng)剔除對病原體呈陽性反應(yīng)的豬。