兩種大鼠下腔靜脈移植模型建立方法的比較分析

任章勇,呂少誠(chéng),王芳菲,趙昕,郎韌,賀強(qiáng)

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院肝膽外科,北京 100020)

隨著外科手術(shù)器械的改良以及手術(shù)技術(shù)的提高,血管重建技術(shù)在外科手術(shù)中的應(yīng)用越來越廣泛[1-4]。目前在血管重建中應(yīng)用的血管移植物有自體靜脈、自體壁層腹膜/鐮狀韌帶、人工血管及同種異體血管等[5]。迄今為止,自體血管仍然被認(rèn)為是血管重建中最佳的血管移植物,但其來源有限,且在較大的血管重建中難以獲得合適的自體血管。人工血管來源廣泛,但術(shù)后需長(zhǎng)期應(yīng)用抗凝藥,增加患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)及出血風(fēng)險(xiǎn),長(zhǎng)期通暢率仍有待提高。同種異體血管具有來源豐富、管徑易匹配、組織相容性好、近遠(yuǎn)期通暢率高等優(yōu)點(diǎn),是臨床工作中較常選用的靜脈移植物[6-8]。但同種異體血管作為異源性血管移植物,術(shù)后可能會(huì)在特異和非特異炎癥反應(yīng)的共同作用下導(dǎo)致附壁血栓形成、內(nèi)膜增生及瘢痕形成[5]。因此,研究同種異體血管置換術(shù)后具體病理改變及相應(yīng)機(jī)制具有重大意義。由于臨床中同種異體血管置換術(shù)后病理標(biāo)本獲取困難,大鼠下腔靜脈置換模型的建立能為同種異體血管置換后相關(guān)病理改變的研究提供模型基礎(chǔ)。目前關(guān)于靜脈移植的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型報(bào)道相對(duì)較少,有文章報(bào)道[9]可通過雙袖套技術(shù)構(gòu)建大鼠靜脈置換模型,但其術(shù)后會(huì)將聚乙烯套管遺留受體鼠體內(nèi),其引發(fā)機(jī)體非特異性炎癥是否會(huì)對(duì)靜脈移植后相關(guān)病理改變的研究造成干擾尚不明確,本文通過評(píng)估“套管法”和“吻合法”兩種大鼠下腔靜脈移植模型各自優(yōu)劣勢(shì),尋找安全有效的大鼠下腔靜脈移植模型的建立方法,為后續(xù)靜脈置換術(shù)后相關(guān)病理改變的研究提供模型基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

72只6周齡SPF級(jí)雄性Brown-Norway(BN)大鼠,體重為180 ~ 200 g,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司【SCXK(京)2021-0006】。飼養(yǎng)環(huán)境:在恒定溫度、濕度和光暗循環(huán)(20 ~ 25℃,55% ± 10%,7:00 ~ 19:00光照循環(huán))下自由飲水和攝食,飼養(yǎng)于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心【SYXK(京)2020-0005】。所有操作符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理原則,并獲得首都醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利委員會(huì)的批準(zhǔn)(AEEI-2021-147)。

1.1.2 主要試劑與儀器

動(dòng)物用異氟烷(深圳市瑞沃德生命科技有限公司,中國(guó)),Anti-CD4 antibody (Abcam, ab237722,英國(guó)),RNA提取液(Servicebio,G3013,中國(guó)),SweScriptRTI First Strand cDNA Synthesis Kit(Servicebio,G3330,中國(guó)),2 × SYBR Green qPCR Master Mix(None ROX)(Servicebio,G3320,中國(guó))。

雙目外科顯微鏡(OLYMPUS,SZX16,日本),動(dòng)物手術(shù)LED光纖燈(OLYMPUS,LG-PS2,日本),小動(dòng)物麻醉機(jī)(SURGIVET,CDS 9000,美國(guó)),外科手術(shù)器械包(深圳市瑞沃德生命科技有限公司,SP0011-B MCAO,中國(guó)),正置光學(xué)顯微鏡(尼康,Nikon Eclipse E100,日本),小動(dòng)物超聲儀(VisualSonics,Vevo 2100,加拿大),熒光定量PCR儀(Bio-Rad,CFX Connect,美國(guó)),超微量分光光度計(jì)(Thermo,NanoDrop 2000,美國(guó))。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組

隨機(jī)分為2組,每組18只。套管組:采用套管法構(gòu)建下腔靜脈置換模型;吻合組:采用縫合法直接吻合供受體靜脈斷端,構(gòu)建下腔靜脈置換模型。

1.2.2 供體靜脈的獲取

選取36只BN大鼠作為供體大鼠,采用1%異氟烷吸入麻醉后固定于大鼠手術(shù)臺(tái),胸腹部備皮、碘伏消毒,鋪無菌洞巾。于劍突下作2 cm長(zhǎng)的切口入腹,剪斷肝上下腔靜脈放血處死大鼠。左右兩側(cè)距前正中線1.5 cm剪開肋骨,將前胸壁上翻,暴露胸內(nèi)下腔靜脈,去除靜脈周圍的脂肪組織,于右心房與膈肌間剪下約6 ~ 7 mm長(zhǎng)的靜脈段,以肝素生理鹽水沖去周圍血漬后置于4℃的肝素生理鹽水中(如圖1A),可直接作為吻合組的供體血管;將取下的靜脈段從一長(zhǎng)5 ~ 6 mm的薄壁塑料管中穿出,兩端反折套與塑料管上,形成靜脈套管(如圖1B),作為套管組的供體血管。

圖1 供體靜脈Note. A. Donor vein segments for “anastomosis method”. B. Donor vein cannula for “cannula method”.Figure 1 Donor vein

1.2.3 “吻合法”構(gòu)建大鼠下腔靜脈置換模型

18只BN大鼠作為受體大鼠,隨機(jī)種子數(shù)法分為1周組、2周組和4周組,每組各6只。所有大鼠腹部備皮,碘伏消毒后鋪無菌孔巾;取劍突下1 cm至尿道上方1 cm處縱行切口入腹,用腹腔牽拉器向兩側(cè)拉開腹腔充分暴露術(shù)野,鹽水紗布包裹腸管并將其推向腹腔左側(cè),使用棉簽鈍性分離后腹膜顯露腹主動(dòng)脈及下腔靜脈;游離腎靜脈下方的下腔靜脈至左、右側(cè)腰靜脈之間的下腔靜脈,結(jié)扎離斷其周圍的屬支;于游離段下腔靜脈兩端以顯微血管夾阻斷后剪斷,以肝素生理鹽水沖去周圍血漬,根據(jù)供體靜脈段長(zhǎng)度修剪過長(zhǎng)的受體靜脈斷端;于受體靜脈和供體靜脈3點(diǎn)鐘和9點(diǎn)鐘方位各縫合一針作為牽引固定線;采用連續(xù)縫合法吻合靜脈前壁;翻轉(zhuǎn)動(dòng)脈夾和牽引線,使靜脈前后壁翻轉(zhuǎn),采用間斷縫合法縫合靜脈后壁;同法吻合第2個(gè)吻合口,最后幾針時(shí)向靜脈管腔內(nèi)注射肝素生理鹽水排出靜脈腔內(nèi)空氣,預(yù)防氣體栓塞;先開放靜脈近心端血管夾,檢查有無漏血,止血確切后再開放遠(yuǎn)心端血管夾,無活動(dòng)性出血、血管通暢性良好后,以溫生理鹽水沖洗腹腔,逐層關(guān)腹,手術(shù)過程見圖2A,2B,2C。

1.2.4 “套管法”構(gòu)建大鼠下腔靜脈置換模型

選取18只BN大鼠作為受體大鼠,隨機(jī)種子數(shù)法分為1周組、2周組和4周組,每組6只。受體大鼠的準(zhǔn)備及下腔靜脈的游離等步驟同吻合法。由于血管夾具有較大的空間占位而不利于靜脈套管的植入,可用絲線系活結(jié)替代血管夾用于阻斷血流。依次阻斷左、右側(cè)腰靜脈、遠(yuǎn)端下腔靜脈(左右腰靜脈以下)、近端下腔靜脈;于游離段靜脈中間橫向剪開約2/3周徑的切口,以肝素生理鹽水沖去周圍血漬;用無損傷鑷子提起靜脈切緣,將供體靜脈套管一端塞進(jìn)受體下腔靜脈;提起受體靜脈另一端切緣,再將靜脈套管另一端放進(jìn)受體靜脈內(nèi),完全放入前以肝素生理鹽水排出靜脈套管及受體靜脈腔內(nèi)空氣,調(diào)節(jié)供體靜脈套至合適位置后以6-0絲線環(huán)扎固定;將未剪斷的1/3受體靜脈壁完全離斷,修剪贅余的受體靜脈壁,松開各活結(jié)開放靜脈;檢查無活動(dòng)性出血、血管通暢性良好后,以溫生理鹽水沖洗腹腔,逐層關(guān)腹,手術(shù)過程見圖2D,2E,2F。

圖2 血管置換手術(shù)過程N(yùn)ote. A. The donor vein segment is trimmed according to the tension at both ends of the recipient vein (shown by the black arrow in the figure). B. The upper and lower anastomoses are sutured successively by the continuous anterior wall and interrupted posterior wall method. C. The blood flow is opened after the suture is completed and there is no blood leakage. D. Freeze the recipient infrarenal inferior vena cava and block the left and right lumbar veins, distal inferior vena cava and proximal inferior vena cava in turn with a silk thread tie. E. Transversely cut the venous wall at 2/3 circumference in the middle of the recipient vein and insert one end of the donor venous cannula into the recipient vein from the incision. F. Completely insert the donor venous cannula and open the blood flow after checking that there is no blood leakage.Figure 2 Procedure of vascular replacement

1.2.5 術(shù)后觀察

手術(shù)完成后置于38.5℃復(fù)溫臺(tái)上復(fù)溫至蘇醒,移至單籠飼養(yǎng)。術(shù)后24 h內(nèi)以濃度為5%的葡萄糖溶液喂食,24 h后恢復(fù)正常喂食。術(shù)后48 h存活、無后肢癱瘓等并發(fā)癥發(fā)生時(shí)定義為建模成功。

1.2.6 術(shù)后置換段血管通暢性評(píng)估

術(shù)后大鼠每隔1周做1次腹部血管超聲。大鼠腹部剃毛,用1%異氟烷吸入麻醉后將大鼠固定于操作臺(tái)。使用小動(dòng)物超聲影像系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行成像,脈沖重復(fù)頻率設(shè)置為2.2 ~ 3.3 kHz,以腎下下腔靜脈作為標(biāo)記找到置換段靜脈,以16 ~ 30 Hz的幀頻獲得二維和彩色多普勒?qǐng)D像及流速變化情況。

1.2.7 組織學(xué)檢測(cè)

各組大鼠術(shù)后到達(dá)觀察時(shí)間后,經(jīng)麻醉后開腹探查獲取置換段組織,下腔靜脈放血處死。測(cè)量置換段血管管徑后將其分為兩段,一段置于10%福爾馬林中固定48 h,脫水后浸蠟包埋組織標(biāo)本塊,4 μm切片,并行HE染色、CD4免疫組化染色。另一塊標(biāo)本立即轉(zhuǎn)移至液氮保存,并進(jìn)行TGF-β1的RT-PCR相對(duì)定量檢測(cè)。

引物信息:TGF-β1 primer:F:5’-ATAGCAACAA TTCCTGGCGTTACCTT-3’;R:5’-CCTGTATTCCGT CTCCTTGGTTCAG-3’。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總后采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料符合正態(tài)分布采用平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)示,非正態(tài)分布采用中位數(shù)(四分位間距)表示;計(jì)數(shù)資料采用百分率表示。兩組計(jì)量資料之間比較,符合正態(tài)分布采用t檢驗(yàn),非正態(tài)分布采用秩和檢驗(yàn);兩組計(jì)數(shù)資料之間的比較χ2檢驗(yàn)。P< 0.05為差異具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 模型成功率、手術(shù)時(shí)間及血流阻斷時(shí)間

套管法和吻合法各建立靜脈模型18只,套管法術(shù)后48 h內(nèi)成功率為100.0%(18/18),吻合法術(shù)后死亡1只,死亡原因?yàn)樾g(shù)中失血過多,術(shù)后48 h內(nèi)成功率為94.4%(17/18),兩組存活率差異無顯著性(P= 0.310)。如圖3所示,套管組手術(shù)時(shí)間及血流阻斷時(shí)間均較吻合組短[(35.8 ± 3.6) min vs (56.8 ± 4.9) min;(35.8 ± 3.6) min vs (56.8 ± 4.9) min],差異均具有顯著性。

圖3 兩種模型建立方法的手術(shù)時(shí)間和血流阻斷時(shí)間Note. Group comparison, *P < 0.05. (The same in the following figures)Figure 3 Operation time and blood flow blocking time of the two model establishment methods

2.2 術(shù)后不同時(shí)間各組移植段血管通暢情況

如圖4所示,兩組術(shù)后4周內(nèi)置換段血管均通暢,未見血管閉塞及血栓形成。由圖5可見,術(shù)后1周時(shí),套管法及吻合法的移植段血管血流速度均有所增高,套管法增加更為明顯。隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),套管法模型中移植段血管流速逐漸減低,而吻合法模型中移植段血管先于2周時(shí)降低,4周時(shí)逐漸升高。

圖4 腹部血管彩色多普勒Figure 4 Color Doppler of abdominal blood vessels

圖5 術(shù)后兩組置換段血管血流速度比較Figure 5 Comparison of blood flow velocity of replacement segment between the two groups after operation

2.3 術(shù)后不同時(shí)間各組移植段血管直徑變化

如圖6所示,套管組1周后,移植段血管周圍輕度粘連,可見周圍組織充血等改變,未見明顯靜脈側(cè)枝形成,移植段血管通暢,未見明顯血栓形成,管壁外可見纖維性滲出。套管組4周后,移植段血管可見明顯靜脈側(cè)枝形成,移植段血管管壁外形成纖維包殼,移植段血管管壁變厚,管徑變細(xì),但血管腔通暢。吻合法1周后,移植段血管周圍未見明顯粘連及靜脈側(cè)枝,移植段血管通暢,未見血栓形成,管壁正常。吻合法4周后,精索靜脈可有增粗改變,但未見其他明顯側(cè)枝形成,移植段血管通暢,未見明顯血栓,管壁較強(qiáng)有所增厚,管徑較前變細(xì)。如圖7所示,隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),套管組和吻合法模型的移植段血管管徑均逐漸變細(xì),套管組尤為明顯,各個(gè)時(shí)期內(nèi),套管組模型的管徑均較吻合法小,差異具有顯著性。

圖6 術(shù)后置換段血管周圍側(cè)枝形成情況及供體靜脈通暢情況Figure 6 Formation of collateral branches around the blood vessels of the replacement segment and the patency of the donor vein after operation

圖7 術(shù)后兩組置換段血管直徑比較Figure 7 Comparison of the diameter of the replacement segment between the two groups after operation

2.4 移植段血管病理情況

由圖8所示,靜脈移植術(shù)后1周后,套管組和吻合法模型中均可見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),淋巴細(xì)胞主要聚集與外膜層,管壁結(jié)構(gòu)均無明顯改變;移植術(shù)后2周時(shí),套管組模型中可見肌層增生變厚,管腔較1周時(shí)明顯變窄,管壁外可見纖維素沉積形成包殼,管壁全層均可見淋巴細(xì)胞,吻合法模型中管壁全層可見明顯淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),管壁各層均未見明顯增生,管腔無明顯狹窄表現(xiàn);移植術(shù)后4周時(shí),套管組模型組靜脈中的內(nèi)膜層可見增生,肌層增生較前更為明顯,管腔較前進(jìn)一步縮窄,管壁外可見明顯纖維包殼形成,吻合法模型中亦可見內(nèi)膜層及肌層增生,淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較2周時(shí)有所減少。

圖8 移植段血管HE染色(×50)Figure 8 HE staining of grafted blood vessels(×50)

如圖9、10所示,靜脈移植術(shù)后各階段均可見CD4+淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),1周時(shí)套管組和吻合法浸潤(rùn)程度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),套管組模型中CD4+淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)逐漸減少,而吻合法模型中逐漸增多,術(shù)后2周后,吻合法模型中CD4+淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較套管組嚴(yán)重,其MOD值的差異具有顯著性。

圖9 移植段血管CD4免疫組化染色(×200)Figure 9 CD4 immunohistochemical staining of grafted blood vessels(× 200)

2.5 置換段血管中TGF-β1的PCR相對(duì)定量檢測(cè)

套管組和吻合組在不同時(shí)間點(diǎn)置換段血管組織中TGF-β1的PCR相對(duì)定量結(jié)果如圖11所示。隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),兩組模型中置換段靜脈組織內(nèi)TGF-β1的表達(dá)量均逐漸升高,2周內(nèi)2組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,4周時(shí),套管組中表達(dá)量高于吻合組,差異具有顯著性。

圖11 術(shù)后兩組置換段血管組織TGF-β1相對(duì)表達(dá)量Figure 11 TGF-β1 in vascular tissue of replacement segment in two groups after operation relative expression

圖10 移植段血管CD4免疫組化MOD值比較Figure 10 Comparison of CD4 immunohistochemical MOD values of transplanted blood vessels

3 討論

當(dāng)體內(nèi)重要組織、臟器的血管因意外損傷,或是因疾病侵犯、波及而無法恢復(fù)時(shí),通過切除病變血管,用血管移植物重建局部血流是最佳的治療方案[10-11]。目前血管重建中常用到的血管置換物有自體血管、人造血管及異體血管。自體血管來源有限,增加患者創(chuàng)傷,并受管徑大小、取材長(zhǎng)短,以及患者自身血管條件的限制,臨床應(yīng)用前景有限[12]。目前應(yīng)用于臨床的人造血管有滌綸、聚四氟乙烯、聚氨酯等,其優(yōu)點(diǎn)是來源豐富、能批量生產(chǎn),可根據(jù)臨床需要制備特殊口徑和形狀,但其缺點(diǎn)是生物相容性差,血栓形成率高,達(dá)不到小血管置換的要求。同種異體血管首先由Debakey等[13]于20世紀(jì)50年代應(yīng)用于臨床血管重建,具有來源豐富、管徑易匹配、組織相容性好等優(yōu)點(diǎn)。起初,同種異體血管主要應(yīng)用于血管嚴(yán)重感染性疾病中受感染血管的置換[14-15]。隨著血管獲取及儲(chǔ)存技術(shù)的不斷改進(jìn),同種異體血管在臨床中的應(yīng)用逐漸普及。

作為一種異體來源的組織,同種異體血管移植后是否會(huì)像其他器官移植一樣發(fā)生移植排斥反應(yīng)目前尚無明確結(jié)論。有報(bào)道血管置換后置換段血管內(nèi)膜增生、管腔狹窄及閉塞使手術(shù)的遠(yuǎn)期失效率高達(dá)30% ~ 60%[16-17]。由于臨床上術(shù)后取材困難,通過建立大鼠腹部血管置換模型,觀察其術(shù)后置換段血管的病理改變及免疫狀態(tài)的改變,可為后續(xù)關(guān)于同種異體血管置換后的病理改變機(jī)制及干預(yù)措施的研究奠定基礎(chǔ)。目前已經(jīng)開發(fā)出了多種血管置換模型,Koulack等[18]報(bào)道了用于研究移植物血管病變的主動(dòng)脈置換模型,其中動(dòng)脈置換模型的研究相對(duì)較多[19-20],Zhang等[21]將供體小鼠的腔靜脈移植到受體小鼠的頸動(dòng)脈循環(huán)中,以研究靜脈移植后新生內(nèi)膜的病理改變,然而,動(dòng)脈與靜脈結(jié)構(gòu)層次并非完全一致,管徑亦很難匹配,當(dāng)靜脈置換到動(dòng)脈循環(huán)后,管腔在動(dòng)脈壓的作用下逐漸擴(kuò)張,隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),靜脈壁逐漸重塑變厚以適應(yīng)動(dòng)脈循環(huán)的高壓力,有時(shí)血液在連接處形成渦流,纖維蛋白沉著在靜脈皺褶上,最終導(dǎo)致閉塞性血栓形成。因此,“靜脈到動(dòng)脈”的置換模型并不能真實(shí)地反應(yīng)靜脈置換后的相關(guān)病理改變。由于靜脈壁薄,縫合較為困難,Yan等[9]通過“雙袖帶技術(shù)”成功建立了小鼠門靜脈置換模型。但采用“雙袖帶技術(shù)”構(gòu)建的靜脈置換模型會(huì)將聚乙烯套管遺留與受體體內(nèi),該套管是否會(huì)形成異物反應(yīng)對(duì)靜脈置換后相關(guān)病理改變的研究造成干擾尚不明確。本實(shí)驗(yàn)采用“套管組”和“吻合法”兩種靜脈重建方式構(gòu)建大鼠靜脈置換模型,通過觀察兩組模型術(shù)后的相關(guān)病理改變,評(píng)估其各自的優(yōu)劣勢(shì),為后續(xù)靜脈置換后相關(guān)病理改變機(jī)制的研究提供安全、穩(wěn)定的模型基礎(chǔ)。

從手術(shù)時(shí)間來看,吻合法的總手術(shù)時(shí)間及血流阻斷時(shí)間均較套管組長(zhǎng),差異具有顯著性,但模型成功率方面無明顯差異。兩組模型大鼠術(shù)后4周均能長(zhǎng)期存活,置換段血管均未見閉塞,未出現(xiàn)后肢癱瘓等嚴(yán)重并發(fā)癥。術(shù)后腹部血管超聲結(jié)果與管徑變化趨勢(shì)一致,術(shù)后1周時(shí)兩組流速較前稍有增大,考慮與術(shù)后吻合口水腫等因素有關(guān),隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),套管組流速逐漸降低,與吻合組相比差異具有顯著性,術(shù)后4周時(shí),吻合組流速較前稍增大,考慮與置換段血管管壁重塑、管腔變窄有關(guān)。從術(shù)后大體標(biāo)本來看,隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),兩組模型置換段靜脈直徑均逐漸縮小,套管組變化更為明顯。4周內(nèi)吻合組未見明顯靜脈側(cè)枝形成,置換段靜脈管壁逐漸增厚,但管腔通暢性良好,而套管組可見置換段靜脈周圍出現(xiàn)靜脈側(cè)枝,置換段靜脈管腔縮小,管壁外層可見纖維包殼形成。

從術(shù)后置換段靜脈組織HE染色來看,套管組術(shù)后管壁出現(xiàn)皺縮,肌層增生,外層可見纖維素沉積形成包殼,內(nèi)層可見內(nèi)膜增生,進(jìn)而導(dǎo)致管壁增厚,管腔狹窄,而吻合組靜脈管壁各層次尚清晰,管壁亦隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增厚,4周時(shí)可見肌層及內(nèi)膜增生,管腔較前縮小。兩組模型術(shù)后均可見單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn),吻合組較套管組更為明顯,可能是聚乙烯套管產(chǎn)生的非特異炎癥或纖維素樣物質(zhì)抑制單個(gè)核細(xì)胞的浸潤(rùn)有關(guān),具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究明確。從CD4免疫組化染色結(jié)果來看,兩組模型術(shù)后均可見靜脈壁肌層及外模型中CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),套管組中CD4+T淋巴細(xì)胞逐漸減少,而吻合組中逐漸增多。

TGF-β1是目前研究已知與機(jī)體的瘢痕形成及組織重塑關(guān)系最密切的細(xì)胞因子,可以由多種細(xì)胞分泌產(chǎn)生,可以通過旁分泌、自分泌等多種生物學(xué)途徑作用于成纖維細(xì)胞參與創(chuàng)傷修復(fù)過程[22-23]:一方面能直接刺激成纖維細(xì)胞,促進(jìn)其增殖,進(jìn)而轉(zhuǎn)換為肌成纖維細(xì)胞形成瘢痕;另一方面可以使原本處于靜止期的成纖維細(xì)胞活化,促進(jìn)膠原基質(zhì)的形成;還可以抑制膠原基質(zhì)的分解,導(dǎo)致瘢痕不斷積累增加。TGF-β1在組織器官的炎癥、損傷、瘢痕以及組織重塑之間起著重要的鏈接作用[24-25]。本研究當(dāng)中,兩個(gè)置換模型組中均可見TGF-β1表達(dá)量逐漸升高,4周時(shí)套管組表達(dá)量高于吻合組,差異具有顯著性。

總之,靜脈置換術(shù)后,靜脈壁中可見單個(gè)核細(xì)胞及CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),組織中TGF-β1表達(dá)量隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高,靜脈壁重塑主要表現(xiàn)為肌層及內(nèi)膜增生,最終導(dǎo)致管腔狹窄。套管組和吻合法均能安全有效地建立靜脈置換模型,套管組總的手術(shù)時(shí)間及下腔靜脈阻斷時(shí)間較吻合法短,但術(shù)后模型成功率方面無明顯差異。隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng),套管組管腔狹窄更為明顯。因此吻合法構(gòu)建的靜脈置換模型更適用于靜脈置換術(shù)后相關(guān)病理改變的研究。