桑黃擴(kuò)大培養(yǎng)活性成分變化規(guī)律*

劉 進(jìn)，許 謙**，賈世杰，李秉恩，丁紅振，孫宜秀，張慧敏，張 鑫，王瑩菲

（1.菏澤學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院，山東菏澤，274015；2.青島大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東青島，266071）

桑黃菌（Phellinus igniarius） 自古以來(lái)就被用作藥用真菌[1]。桑黃菌在生長(zhǎng)初期表現(xiàn)為茶色，隨后顏色漸漸變深；在生長(zhǎng)中期逐漸變成馬蹄形，往木質(zhì)發(fā)展，越來(lái)越堅(jiān)硬；到了生長(zhǎng)末期，桑黃菌表面的皮質(zhì)硬殼就會(huì)從自身脫落，顏色與菌體本身的色彩相同，堅(jiān)硬，木質(zhì)，上端逐漸變尖[2]。桑黃的應(yīng)用歷史十分悠久，“桑黃”一詞最早出現(xiàn)在隋唐時(shí)期甄權(quán)的《藥性論》中[3]，藥理作用最初記載在秦漢時(shí)期的《神農(nóng)本草經(jīng)》中，從古至今被廣泛記錄，具有止血、排毒、活血的功效[4]，現(xiàn)代經(jīng)過(guò)大量科研工作者的努力，研究出桑黃有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤等生物醫(yī)學(xué)方面的作用[5-8]。桑黃的活性成分有很多，其中最主要的活性成分是多糖、黃酮和三萜類(lèi)物質(zhì)。多糖具有抗腫瘤、抗氧化等功效；黃酮具有降血脂血糖、抗衰老等功效；三萜具有抗菌、抗腫瘤等功效[2]。

桑黃在我國(guó)集中分布在黑龍江東部、西北地區(qū)陜西與甘肅交界的“子午嶺”自然保護(hù)區(qū)、東北的長(zhǎng)白山林區(qū)等地，國(guó)外主要分布在日本、韓國(guó)、朝鮮、俄羅斯等地[9]。桑黃的野生資源十分匱乏，產(chǎn)量有限，不足以滿足龐大的市場(chǎng)需求，其最有效的解決方法是進(jìn)行人工栽培和菌絲體發(fā)酵。但桑黃人工栽培的難度較大[10-11]，且價(jià)格昂貴。然而菌絲體液體發(fā)酵技術(shù)卻具有技術(shù)要求低、周期短、污染少等優(yōu)點(diǎn)[12]，采用液體發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)桑黃具有較好的應(yīng)用前景。目前桑黃相關(guān)研究大多集中在培養(yǎng)以及其活性物質(zhì)的提取和作用功效方面，對(duì)桑黃擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中活性成分變化規(guī)律的研究較少，因此通過(guò)對(duì)桑黃擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中活性成分變化規(guī)律進(jìn)行研究，希望對(duì)桑黃的擴(kuò)大培養(yǎng)以及活性成分的規(guī)?；a(chǎn)提供幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

試驗(yàn)的供試菌株為桑黃菌種SH-001，由菏澤學(xué)院E208實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

主要試劑的信息見(jiàn)表1。

表1 主要試劑Tab.1 The main reagents

多糖的測(cè)定[12-13]：葡萄糖，蒽酮-硫酸試劑（200 mg蒽酮迅速溶于100 mL 98%濃硫酸中，當(dāng)天使用）。

黃酮的測(cè)定[14]：95%乙醇，98%蘆丁，無(wú)水AlCl3。

三萜的測(cè)定[15-16]：齊墩果酸對(duì)照品，香草醛溶液（在10 mL冰醋酸中加入0.5 g香草醛使其溶解，當(dāng)天使用），乙酸乙酯，高氯酸。

其余試劑為瓊脂粉、玉米粉、KH2PO4、MgSO4、馬鈴薯提取液、豆面。

1.1.3 試驗(yàn)儀器

XY-YT液體菌種培養(yǎng)器，濟(jì)南蕈源農(nóng)業(yè)機(jī)械有限公司；UV-6100可見(jiàn)光分光光度計(jì)，上海元析儀器有限公司；MLS-3780高壓蒸汽滅菌鍋，三洋電機(jī)株式會(huì)社；ZQZY-C8震蕩培養(yǎng)箱，上海知楚儀器有限公司；HR/T20M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，湖南赫西儀器裝備有限公司；GL224I-1SCN電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京） 有限公司；YJVS-2雙人垂直超凈工作臺(tái)，無(wú)錫一凈凈化設(shè)備有限公司；BCD-268STCV冰箱，青島海爾股份有限公司；HH-W-420數(shù)顯恒溫水箱，金壇市江南儀器廠；電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海博訊醫(yī)療生物儀器有限公司；MJ-250-1霉菌培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 桑黃菌種活化

1）PDA培養(yǎng)基的制備[17]：馬鈴薯去皮切塊，稱(chēng)取200 g，煮沸30 min，8層紗布過(guò)濾取濾液，加入20 g瓊脂，攪拌至完全溶解，加入20 g葡萄糖混勻，溫水定容至1 000 mL，pH自然，趁熱分裝至錐形瓶，121℃滅菌30 min，倒平板。

2）菌種活化：把桑黃菌種轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)，每2天觀察記錄其生長(zhǎng)形態(tài)。

1.2.2 液體培養(yǎng)

1） 液體培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基配方：玉米粉20 g·L-1、豆面10 g·L-1、KH2PO42.5 g·L-1、MgSO41 g·L-1，pH 自然。

液體培養(yǎng)基配制方法：玉米粉和豆面加適量蒸餾水煮沸30 min，加入KH2PO4和MgSO4，溶解后定容，pH自然。

2） 錐形瓶培養(yǎng)

處理1：250 mL錐形瓶中倒入150 mL液體培養(yǎng)基，8層紗布2層報(bào)紙封口，共25瓶，121℃滅菌30 min，冷卻備用。從活化桑黃菌種的固體培養(yǎng)基上，用打孔器取直徑1 cm圓形菌塊接種到液體培養(yǎng)基，每瓶接種2個(gè)菌塊，28℃、180 r·min-1搖床培養(yǎng)。

處理2：500 mL錐形瓶倒入300 mL液體培養(yǎng)基，8層紗布2層報(bào)紙封口，共45瓶，121℃滅菌30 min，冷卻備用。從活化桑黃菌種的固體培養(yǎng)基上，用打孔器取直徑1 cm圓形菌塊接種到液體培養(yǎng)基，每瓶接種4個(gè)菌塊，28℃、180 r·min-1搖床培養(yǎng)。

2個(gè)處理均每3天取樣觀察，測(cè)定并記錄其3種活性物質(zhì)的含量。

3） 發(fā)酵罐培養(yǎng)

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基：玉米粉20 g·L-1、豆面10 g·L-1，pH自然，接種量10%。

60 L發(fā)酵罐加35.8 L液體培養(yǎng)基，閉罐118℃高溫滅菌1 h后冷卻水循環(huán)冷卻，取500 mL錐形瓶培養(yǎng)14 d的桑黃菌絲體14瓶，在無(wú)菌操作下倒入發(fā)酵罐中，溫度設(shè)定為23℃，罐內(nèi)氣壓為0.03 MPa～0.05 MPa，培養(yǎng)7 d，觀察記錄。

1.2.3 分離菌絲體

培養(yǎng)桑黃菌絲體的250 mL和500 mL錐形瓶各取3瓶，發(fā)酵罐取菌絲體時(shí)要嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行無(wú)菌操作。各取20 mL培養(yǎng)液通過(guò)8層紗布過(guò)濾得到菌絲體和發(fā)酵液。發(fā)酵液放冰箱冷藏，用作胞外活性物質(zhì)的測(cè)量，菌絲體用蒸餾水清洗3次，在60℃干燥箱中干燥至恒重，備用。

1.2.4 多糖含量測(cè)定

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制[13]：根據(jù)參考文獻(xiàn)[13]的方法測(cè)定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

胞外多糖測(cè)定：取5 mL菌液10 000 r·min-1離心10 min，取1 mL上清液，加入3倍95%乙醇，振蕩，4℃過(guò)夜，3 500 r·min-1離心15 min，收集沉淀，得到桑黃粗多糖。取桑黃粗多糖溶于10 mL熱水，稀釋10倍，取0.5 mL于試管中，加入蒽酮-硫酸試劑2 mL，立即搖勻，100℃水浴中顯色10 min，取出，冰浴至室溫，于波長(zhǎng)620 nm處測(cè)定其吸光度值。

胞內(nèi)多糖測(cè)定：取0.2 g桑黃干粉加水，料液比為 1 ∶45，100℃浸提 3.5 h，3 500 r·min-1離心 10 min，取上清液，加3倍95%乙醇，后續(xù)步驟與胞外多糖的測(cè)定方法相同。

1.2.5 黃酮含量測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、胞外和胞內(nèi)黃酮含量的測(cè)量均按照參考文獻(xiàn)[15]進(jìn)行操作。

1.2.6 三萜含量測(cè)定

齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、胞內(nèi)三萜含量的測(cè)量均按照參考文獻(xiàn)[16]進(jìn)行操作。

胞外三萜的測(cè)定：取1 mL桑黃培養(yǎng)液過(guò)濾液，加入95%乙醇3 mL，靜置24 h，去沉淀，取上清液1 mL，100℃蒸餾去除乙醇，加入0.4 mL香草醛，1.6 mL高氯酸，70℃水浴15 min，加入4 mL乙酸乙酯搖勻，靜置15 min，于波長(zhǎng)551 nm處測(cè)定吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑黃菌絲體液體發(fā)酵

2.1.1 固體培養(yǎng)基菌種活化

PDA固體培養(yǎng)基上桑黃菌種活化過(guò)程中的菌絲體形態(tài)變化見(jiàn)圖1。

圖1 固體培養(yǎng)基上桑黃形態(tài)的變化Fig.1 Morphological changes of Phellinus igniarius on solid medium

在PDA固體培養(yǎng)基上桑黃菌種活化過(guò)程的生長(zhǎng)情況詳見(jiàn)表2。

表2 桑黃菌種活化過(guò)程生長(zhǎng)情況記錄Tab.2 Growth record of Phellinus igniarius during activation

2.1.2 錐形瓶液體培養(yǎng)

在300 mL液體培養(yǎng)基（處理2） 中桑黃的生長(zhǎng)形態(tài)變化見(jiàn)圖2。

圖2 錐形瓶液體培養(yǎng)基中桑黃形態(tài)的變化Fig.2 Morphological changes of Phellinus igniarius in liquid medium of conical flask

桑黃在錐形瓶液體培養(yǎng)過(guò)程中，取20 mL培養(yǎng)液測(cè)定菌絲干重，其測(cè)定結(jié)果及生長(zhǎng)情況記錄詳見(jiàn)表3。

表3 桑黃菌種錐形瓶液體培養(yǎng)過(guò)程生長(zhǎng)情況記錄Tab.3 Growth record of Phellinus igniarius strain in liquid medium of conical flask

由表3可知，處理1與處理2培養(yǎng)的桑黃菌絲體干重基本相同，第6天～第9天菌絲體干重翻倍增加，之后穩(wěn)步增加。但2個(gè)處理中菌絲體生長(zhǎng)情況稍有不同，第12天時(shí)處理1的桑黃菌絲體呈球狀，處理2的桑黃菌絲體呈放射狀。

2.1.3 發(fā)酵罐液體培養(yǎng)

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)桑黃的形態(tài)變化詳見(jiàn)圖3。

圖3 發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基中桑黃形態(tài)的變化Fig.3 Morphological changes of Phellinus igniarius in liquid medium of fermenter

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)桑黃過(guò)程中取20 mL培養(yǎng)液測(cè)定菌絲干重，其測(cè)定結(jié)果及生長(zhǎng)情況記錄詳見(jiàn)表4。

表4 桑黃菌種發(fā)酵罐液體培養(yǎng)過(guò)程生長(zhǎng)情況記錄表Tab.4 Growth record of Phellinus igniarius in liquid medium of fermenter

由表4可知，60 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃菌絲體干重在第4天達(dá)到最大，第6天不變，第7天時(shí)減少0.01 g。證明在60 L發(fā)酵罐培養(yǎng)時(shí)，菌絲體最好的收獲時(shí)間為4 d～6 d。

2.2 桑黃液體培養(yǎng)過(guò)程中的活性成分

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

1）多糖測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線

在波長(zhǎng)620 nm處測(cè)定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖4。

圖4 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Standard curve of glucose

如圖4所示，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為：

該回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2為0.999 8。

2）黃酮測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線

通過(guò)AlCl3比色法在波長(zhǎng)410 nm處測(cè)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖5。

圖5 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard curve of rutin

如圖5所示，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為：

該回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2為0.999 8。

3）三萜測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線

在波長(zhǎng)551 nm處測(cè)定齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖6。

圖6 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.6 Standard curve of oleanolic acid

如圖6所示，齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為：

該回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2為0.999 7。

2.2.2 桑黃活性成分變化趨勢(shì)

1） 多糖變化趨勢(shì)

錐形瓶液體培養(yǎng)桑黃的胞外多糖含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖7。

圖7 錐形瓶培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外多糖Fig.7 The extracellular polysaccharide from mycelium of Phellinus igniarius in conical flask

由圖7可知，錐形瓶培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞外多糖含量的變化趨勢(shì)總體下降，2個(gè)培養(yǎng)規(guī)格均在第6天時(shí)菌絲體胞外多糖的含量最高，在第12天后快速降低。

錐形瓶液體培養(yǎng)桑黃的胞內(nèi)多糖含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖8。

圖8 錐形瓶培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)多糖Fig.8 The Intracellular polysaccharide from mycelium of Phellinus igniarius in conical flask

由圖8可知，胞內(nèi)多糖含量變化呈波浪形。處理1的桑黃菌絲體胞內(nèi)多糖在第9天時(shí)含量最高，處理2的桑黃菌絲體胞內(nèi)多糖在第6天含量最高，處理1比處理2的胞內(nèi)多糖含量峰值延遲3 d出現(xiàn)。二者相比，處理2的培養(yǎng)條件更利于胞內(nèi)多糖迅速產(chǎn)生。

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外多糖含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖9。

圖9 發(fā)酵罐培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外多糖Fig.9 The extracellular polysaccharide from mycelium of Phellinus igniarius in fermenter

由圖9可知，發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞外多糖含量先減少后增加，在第7天時(shí)最高。

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外多糖含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖10。

圖10 發(fā)酵罐培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)多糖Fig.10 The Intracellular polysaccharide from mycelium of Phellinus igniarius in fermenter

由圖10可知，發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞內(nèi)多糖波動(dòng)變化，含量先增加后減少再增加，在第7天達(dá)到峰值。

2） 黃酮變化趨勢(shì)

錐形瓶液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外黃酮含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖11。

圖11 錐形瓶培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外黃酮Fig.11 The extracellular flavonoids from mycelium of Phellinus igniarius in conical flask

由圖11可知，相同培養(yǎng)時(shí)間下，處理1培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞外黃酮含量均高于處理2，且都呈先高后低的趨勢(shì)。處理1胞外黃酮含量在第12天時(shí)最高，處理2第9天含量最高，處理1峰值出現(xiàn)時(shí)間比處理2延遲3 d。

錐形瓶液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)黃酮含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖12。

圖12 錐形瓶培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)黃酮Fig.12 The Intracellular flavonoids from mycelium of Phellinus igniarius in conical flask

由圖12可知，除第9天以外，其他相同的培養(yǎng)時(shí)間下，處理1培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞內(nèi)黃酮含量都高于處理2，且都呈先高后低的趨勢(shì)，并均于第12天達(dá)到峰值。

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外黃酮含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖13。

圖13 發(fā)酵罐培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外黃酮Fig.13 The extracellular flavonoids from mycelium of Phellinus igniarius in fermenter

由圖13可知，60 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞外黃酮含量先增加后減少再增加，第7天胞外黃酮的含量最高。

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)黃酮含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖14。

圖14 發(fā)酵罐培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)黃酮Fig.14 The Intracellular flavonoids from mycelium of Phellinus igniarius in fermenter

由圖14可知，60 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞內(nèi)黃酮的含量先增加后降低，第6天胞內(nèi)黃酮含量最高。

3） 三萜變化趨勢(shì)

錐形瓶液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外三萜含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖15。

圖15 錐形瓶培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外三萜Fig.15 The extracellular triterpenes from mycelium of Phellinus igniarius in conical flask

由圖15可知，相同的培養(yǎng)時(shí)間下，處理2的桑黃菌絲體胞外三萜含量均大于處理1。處理1中胞外三萜含量先減少后增加又減少，第15天含量最高；處理2中胞外三萜含量先減少后增加，第18天含量最高。

錐形瓶液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)三萜含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖16。

圖16 錐形瓶培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)三萜Fig.16 The Intracellular triterpenes from mycelium of Phellinus igniarius in conical flask

由圖16可知，相同的培養(yǎng)時(shí)間下，處理2的桑黃菌絲體胞內(nèi)三萜含量基本大于處理1。處理1中胞內(nèi)三萜的含量先增加后減少再增加又減少，第15天含量最高；處理2中胞內(nèi)三萜含量先增加后減少再增加，第9天含量最高。

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外三萜含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖17。

圖17 發(fā)酵罐培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞外三萜Fig.17 The extracellular triterpenes from mycelium of Phellinus igniarius in fermenter

由圖17可知，60 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞外三萜含量先減少后增加，在第7天含量最高。

發(fā)酵罐液體培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)三萜含量變化趨勢(shì)見(jiàn)圖18。

圖18 發(fā)酵罐培養(yǎng)桑黃菌絲體的胞內(nèi)三萜Fig.18 The intracellular triterpenes from mycelium of Phellinus igniarius in fermenter

由圖18可知，60 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞內(nèi)三萜含量持續(xù)減少，在第2天含量最高。

3 討論與結(jié)論

桑黃菌絲體在2種規(guī)格錐形瓶液體培養(yǎng)基和發(fā)酵罐的擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中，3種活性物質(zhì)的含量分別表現(xiàn)出不同的變化趨勢(shì)。

在150 mL和300 mL液體培養(yǎng)基中胞外多糖都呈下降趨勢(shì)；150 mL液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞內(nèi)多糖峰值出現(xiàn)時(shí)間比300 mL液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的延遲3 d，說(shuō)明300 mL液體培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下更利于胞內(nèi)多糖的迅速產(chǎn)生。60 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃胞外多糖呈上升趨勢(shì)，而單位胞外胞內(nèi)多糖的峰值產(chǎn)量低于錐形瓶培養(yǎng)胞內(nèi)胞外多糖的峰值產(chǎn)量。

在150 mL和300 mL液體培養(yǎng)基中桑黃菌絲體胞外、胞內(nèi)黃酮都呈先高后低的趨勢(shì)。150 mL液體培養(yǎng)基中單位黃酮產(chǎn)量高于300 mL液體培養(yǎng)基中單位黃酮產(chǎn)量，二者相比，150 mL液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件更利于胞外、胞內(nèi)黃酮的高產(chǎn)。60 L發(fā)酵罐培養(yǎng)的桑黃菌絲體胞外、胞內(nèi)黃酮都呈現(xiàn)先增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，胞外黃酮第7天達(dá)到峰值，胞內(nèi)黃酮第6天達(dá)到峰值。發(fā)酵罐培養(yǎng)中單位胞外、胞內(nèi)黃酮的峰值產(chǎn)量均低于錐形瓶培養(yǎng)中的峰值產(chǎn)量。

在150 mL和300 mL液體培養(yǎng)基中桑黃菌絲體胞外、胞內(nèi)三萜都有相似的變化規(guī)律。其中，150 mL液體培養(yǎng)基中胞內(nèi)、胞外三萜含量都在第15天達(dá)到峰值。300 mL液體培養(yǎng)基中單位三萜產(chǎn)量高于150 mL液體培養(yǎng)基，二者相比，300 mL液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件更利于胞外、胞內(nèi)三萜的生產(chǎn)。60 L發(fā)酵罐中單位胞外三萜的峰值產(chǎn)量高于錐形瓶胞外三萜的峰值產(chǎn)量，單位胞內(nèi)三萜的峰值產(chǎn)量接近錐形瓶胞內(nèi)三萜的峰值產(chǎn)量，說(shuō)明胞外三萜更適合在大容量培養(yǎng)條件下獲得。

通過(guò)比較2種規(guī)格錐形瓶桑黃菌絲體生長(zhǎng)的情況，可以捕捉桑黃在擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中菌絲球的變化特征及活性物質(zhì)的變化規(guī)律，為規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)提供參考依據(jù)。同時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，如果進(jìn)行桑黃菌絲體多糖及黃酮的規(guī)模化生產(chǎn)，培養(yǎng)條件還需要進(jìn)一步優(yōu)化。如果進(jìn)行桑黃三萜的規(guī)?；囵B(yǎng)，目前培養(yǎng)條件基本能夠達(dá)到量化生產(chǎn)需求。這為確定桑黃規(guī)?；囵B(yǎng)條件、適時(shí)收獲桑黃菌絲體及其多糖、黃酮、三萜等活性物質(zhì)具有重要的指導(dǎo)意義。