鄰苯二甲酸單甲酯對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響及毒理研究

高旭，于霞，李信薇，池振興,3,*

1. 哈爾濱工業(yè)大學(xué)(威海)海洋科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，威海 264209 2. 威海環(huán)境再生能源有限公司，威海 264200 3. 浙江省污染暴露與健康干預(yù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310015

鄰苯二甲酸酯類(phthalate esters, PAEs)能夠增加塑料制品的可塑性[1]，其在工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中常作為增塑劑被應(yīng)用于醫(yī)療器械、洗滌護(hù)理產(chǎn)品、清潔劑、化妝品和食品包裝等各個(gè)領(lǐng)域[2]，與人們?nèi)粘Ｉ钕⑾⑾嚓P(guān)。相關(guān)產(chǎn)品在生產(chǎn)、使用和處置過(guò)程中，可不斷釋放PAEs到環(huán)境中[3]，污染土壤[4]、水體[5]和大氣[6]。環(huán)境中的PAEs能夠通過(guò)皮膚接觸、呼吸和進(jìn)食等多種途徑進(jìn)入人體[7-8]，危害機(jī)體健康。血液是人體極其重要的組織，具有攜氧、免疫、物質(zhì)運(yùn)輸、調(diào)節(jié)體溫及信息傳遞等多種功能。進(jìn)入人體的部分PAEs會(huì)被血液吸收，并在內(nèi)源性酯酶的作用下被水解代謝為相應(yīng)的鄰苯二甲酸單酯(mPAEs)[9]。此外，環(huán)境中的mPAEs也能以各種方式進(jìn)入生物體血液[10-12]。研究人員已經(jīng)在男性血液、母血和臍帶血中檢測(cè)到了mPAEs的存在[13-14]。存在于血液中的PAEs及其代謝產(chǎn)物隨血液循環(huán)被輸送到全身各處，損害體內(nèi)的組織和器官，引發(fā)疾病。

目前，關(guān)于PAEs及其代謝產(chǎn)物毒性的研究主要集中在生殖發(fā)育、神經(jīng)和遺傳等方面[15-21]，涉及血液毒性及其作用機(jī)制的研究鮮有報(bào)道，且研究對(duì)象主要針對(duì)分子量較大、毒性較強(qiáng)的鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸丁芐酯(BBP)及其代謝產(chǎn)物鄰苯二甲酸單(2-乙基己基)酯(MEHP)、鄰苯二甲酸單丁酯(MBP)、鄰苯二甲酸單芐酯(MBzP)。張弘等[22]的研究表明，DEHP(500 mg·kg-1)亞慢性染毒90 d會(huì)使大鼠白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量及血紅蛋白含量顯著下降。另有研究表明，MEHP也與血液中血紅蛋白含量的下降有關(guān)[23-24]。Sicińska[25]通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DBP、BBP(25 μg·mL-1)及其代謝產(chǎn)物MBP、MBzP(250 μg·mL-1)會(huì)使紅細(xì)胞出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。此外，DBP、BBP、MBP和MBzP還會(huì)增加離體紅細(xì)胞中活性氧(ROS)含量，改變其抗氧化酶(超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT))活性，使胞內(nèi)高鐵血紅蛋白(MetHb)含量升高[26]。

鄰苯二甲酸二甲酯(dimethyl phthalate, DMP)作為一種分子量較低的PAEs已經(jīng)被列入我國(guó)優(yōu)先污染物黑名單[27]，其一級(jí)代謝產(chǎn)物鄰苯二甲酸單甲酯(monomethyl phthalate, MMP)具有急性毒性、致畸和致癌活性[28-29]。目前，DMP和MMP在人體的各種體液中均已被檢測(cè)到[30-32]。Babu-Rajendran等[33]采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定了人體尿液中的PAEs，發(fā)現(xiàn)尿液中DMP的濃度范圍為nd～141 ng·mL-1。陳甘訥等[34]的研究表明，MMP在孕婦分娩后母血和臍血中的濃度分別為1.89～2.07 μg·L-1和2.41～2.67 μg·L-1。針對(duì)研究現(xiàn)狀的不足，本實(shí)驗(yàn)選取MMP(DMP的代謝產(chǎn)物)為研究對(duì)象，以Sprague Dawley(SD)大鼠為受試動(dòng)物，通過(guò)檢測(cè)血細(xì)胞(紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞)數(shù)量、血液生化指標(biāo)(總膽固醇、尿素氮、總蛋白和堿性磷酸酶)以及氧化應(yīng)激水平(抗氧化酶SOD、CAT和丙二醛(MDA))以探究MMP(50、250和500 mg·kg-1)對(duì)大鼠血液的毒性影響及作用機(jī)制，有助于完善PAEs類代謝物對(duì)血液毒性效應(yīng)的研究，為其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)和相關(guān)疾病預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 主要儀器設(shè)備與試劑耗材

主要儀器設(shè)備：動(dòng)物版血液分析儀(HF-3800，濟(jì)南漢方醫(yī)療器械有限公司，中國(guó))、紫外-可見分光光度計(jì)(島津UV-1700，Shimadzu，日本)、離心沉淀機(jī)(80-2，上海榮泰生化有限公司，中國(guó))、數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-S，常州翔天實(shí)驗(yàn)儀器廠，中國(guó))、旋渦混合器(XH-C，金壇市白塔新寶儀器廠，中國(guó))、電熱鼓風(fēng)干燥箱(101-00A，上海路韻儀器設(shè)備有限公司，中國(guó))。

主要試劑耗材：鄰苯二甲酸單甲酯(MMP；分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，中國(guó))、乙酸(冰醋酸；分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，中國(guó))、肝素鈉(heparin sodium salt；185 USP units·mg-1，上海麥克林生化科技有限公司，中國(guó))、長(zhǎng)壽花金胚玉米油(山東三星玉米產(chǎn)業(yè)科技有限公司，中國(guó))；總超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase, T-SOD)測(cè)試盒、過(guò)氧化氫酶(catalase, CAT)測(cè)試盒、丙二醛(malonicdialdehyde, MDA)測(cè)試盒、總膽固醇(total cholesterol, T-CHO)測(cè)試盒、尿素氮(BUN)測(cè)試盒、總蛋白(total protein, TP)定量試劑盒、酸性磷酸酶(acid phosphatase, ACP)試劑盒(南京建成生物工程研究所，中國(guó))。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本研究選用的SD大鼠購(gòu)自正規(guī)畜牧中心，所有大鼠均健康。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，大鼠被飼養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房中，溫度控制在18～25 ℃，相對(duì)濕度控制在(55±5)%，接受正常光照，可自由獲取標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物飼料和經(jīng)過(guò)濾的自來(lái)水。按照本地法規(guī)進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 SD大鼠染毒及采血

設(shè)置3個(gè)不同劑量的染毒組(低劑量50 mg·kg-1、中劑量250 mg·kg-1、高劑量500 mg·kg-1)和對(duì)照組，每組選用3只SD大鼠，按照體質(zhì)量計(jì)算出每只大鼠灌胃所需MMP質(zhì)量，用玉米油配成1.5 mL染毒液，對(duì)大鼠灌胃染毒。對(duì)照組灌胃等量的1.5 mL玉米油。

染毒結(jié)束后，用固定器將SD大鼠固定，在鼠尾中下部涂抹75%酒精消毒，用5.5號(hào)靜脈輸液針扎入靜脈采集所需血液。

1.3.2 血細(xì)胞檢測(cè)

將SD大鼠灌胃染毒3 h后，從尾部采集血液至EDTA-K2抗凝管中，使用HF-3800動(dòng)物版血液分析儀的全血模式檢測(cè)血液中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量，記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.3.3 血液生化指標(biāo)檢測(cè)

對(duì)SD大鼠灌胃染毒24 h(禁食12 h)和連續(xù)染毒7 d(每天同一時(shí)間灌胃染毒)后，從大鼠尾部取全血于離心管中，以3 000 r·min-1將血樣離心15 min，取上層血清用于檢測(cè)血液中總膽固醇、總蛋白的含量及酸性磷酸酶的活性。從大鼠尾部采取染毒24 h和連續(xù)染毒7 d后的全血于肝素抗凝離心管中，在3 000 r·min-1條件下離心15 min，取上層血漿用于檢測(cè)血液中的尿素氮含量。根據(jù)總膽固醇、尿素氮、總蛋白和酸性磷酸酶試劑盒說(shuō)明書上的操作步驟，使用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)。

1.3.4 血液氧化應(yīng)激水平檢測(cè)

對(duì)SD大鼠灌胃染毒3 h后，從尾部取全血于離心管中。將血樣以3 000 r·min-1離心15 min，取上層血清用于檢測(cè)血液中SOD、CAT活性和MDA含量。根據(jù)SOD、CAT和MDA試劑盒說(shuō)明書上的操作步驟，使用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用Origin 2018和SPSS 25.0軟件計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，對(duì)各組紅細(xì)胞、白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等血細(xì)胞數(shù)量，總膽固醇、尿素氮、總蛋白的含量和酸性磷酸酶活性等血液生化指標(biāo)，以及SOD、CAT的活性和MDA含量等氧化應(yīng)激指標(biāo)之間的差異性進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)，方差齊性采用LSD檢驗(yàn)，并繪制柱狀圖。

2 結(jié)果(Results)

2.1 MMP對(duì)SD大鼠血液中血細(xì)胞數(shù)量的影響

染毒3 h后，MMP對(duì)大鼠血液中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的毒性影響如表1所示。統(tǒng)計(jì)分析表明，隨著MMP劑量的增加，SD大鼠血液中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量總體上均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。低、中、高劑量染毒組紅細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比分別下降1.11%、4.7%和9.13%，但均無(wú)顯著差異(P>0.05)。淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)低劑量興奮效應(yīng)[35]，高劑量組白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比分別下降43.57%、30.7%和26.44%，均有顯著性差異(P<0.05)。這表明，MMP會(huì)導(dǎo)致大鼠血液中的血細(xì)胞數(shù)量出現(xiàn)不同程度的降低。

表1 不同劑量鄰苯二甲酸單甲酯(MMP)染毒3 h后對(duì)SD大鼠血液中血細(xì)胞數(shù)量的影響Table 1 The number of blood cells of SD rats after monomethyl phthalate (MMP) exposure for 3 h

2.2 MMP對(duì)SD大鼠血液生化指標(biāo)的影響

染毒24 h和連續(xù)染毒7 d后，MMP對(duì)大鼠血液總膽固醇、尿素氮、總蛋白含量和酸性磷酸酶活性的影響如圖1所示。

圖1 不同染毒時(shí)間下MMP對(duì)SD大鼠血液生化指標(biāo)的影響注：T-CHO表示總膽固醇，BUN表示尿素氮，TP表示總蛋白，ACP表示酸性磷酸酶；*表示染毒組與對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05)。Fig. 1 Blood biochemical indexes of SD rats after MMP exposure for different timeNote: T-CHO stands for total cholesterol, BUN stands for blood urea nitrogen, TP stands for total protein, and ACP stands for acid phosphatase; * indicates significant difference from the control (P<0.05).

隨著MMP劑量增大，大鼠血液中總膽固醇含量均呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)，且連續(xù)染毒7 d后下降得更快(圖1(a))。染毒24 h后，低、中、高劑量組總膽固醇含量分別下降17.47%、31%和36.67%，與對(duì)照組相比均差異顯著(P<0.05)。連續(xù)染毒7 d后，與對(duì)照組相比，低、中、高劑量組總膽固醇含量分別下降22.97%、37.4%和43.97%，均有顯著差異(P<0.05)。連續(xù)染毒7 d后，各劑量組總膽固醇含量均比染毒24 h后低，且500 mg·kg-1劑量下總膽固醇含量為最低。這表明，攝入MMP的時(shí)間越久、劑量越大總膽固醇含量降低越快，對(duì)血液損害越大。

MMP均會(huì)導(dǎo)致血液中尿素氮含量減少，且總體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)(圖1(b))。其中，染毒24 h后，低、中、高劑量組尿素氮含量和對(duì)照組相比差異均顯著(P<0.05)，分別下降15.97%、26.43%和34.33%。連續(xù)染毒7 d后，尿素氮含量呈現(xiàn)低劑量興奮效應(yīng)，中、高劑量MMP使尿素氮含量較對(duì)照組分別下降22.13%和28%，差異顯著(P<0.05)。這表明，短時(shí)間攝入不同劑量MMP均會(huì)使大鼠血液尿素氮含量減少；而長(zhǎng)時(shí)間攝入低劑量MMP時(shí)，大鼠血液尿素氮含量會(huì)升高；MMP劑量增大后，血液中尿素氮含量會(huì)減少。

血液中總蛋白含量均隨著MMP劑量增加而減少，呈下降趨勢(shì)，但連續(xù)染毒7 d后下降趨勢(shì)較慢(圖1(c))。其中，高劑量MMP染毒24 h和連續(xù)染毒7 d后，總蛋白含量分別減少18.25%和26.35%，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)；連續(xù)染毒7 d后高劑量組的總蛋白含量最低。這表明，長(zhǎng)時(shí)間高劑量攝入MMP會(huì)使大鼠血液總蛋白含量大幅降低。

MMP能使大鼠血液中酸性磷酸酶活性下降(圖1(d))。其中，染毒24 h后，血液中酸性磷酸酶活性隨著MMP染毒劑量的增加而下降，低、中、高劑量組較對(duì)照組分別顯著下降10.63%、19.93%和41.37%(P<0.05)。連續(xù)染毒7 d后，低劑量組酸性磷酸酶活性與對(duì)照組相比顯著上升27.4%(P<0.05)，呈現(xiàn)低劑量興奮效應(yīng)；中、高劑量MMP分別使酸性磷酸酶活性顯著下降21.87%和31.43%(P<0.05)。這表明，無(wú)論短時(shí)間還是長(zhǎng)時(shí)間，攝入MMP劑量越大，大鼠血液中酸性磷酸酶活性越低。

2.3 MMP染毒后SD大鼠血液氧化應(yīng)激水平

不同劑量MMP染毒3 h后，大鼠血液中SOD、CAT相對(duì)活性及MDA相對(duì)含量如圖2所示。

隨著MMP劑量增加，SOD活性呈下降趨勢(shì)(圖2(a))。與對(duì)照組相比，低、中、高劑量MMP使SOD活性分別下降3.6%、11.7%和17.5%(P>0.05)。這表明，MMP能夠抑制SOD活性，但影響較小。

各劑量MMP對(duì)大鼠染毒3 h后，血液中CAT活性均低于對(duì)照組，且隨著MMP劑量的增加呈現(xiàn)下降趨勢(shì)(圖2(b))。低、中、高劑量染毒組CAT活性與對(duì)照組相比分別下降19.57%、24.13%和57.68%(P<0.05)。這表明，MMP會(huì)使CAT活性下降，損害血液的抗氧化防御體系。

圖2 不同劑量MMP染毒3 h后大鼠血液氧化應(yīng)激水平注：SOD表示超氧化物歧化酶，CAT表示過(guò)氧化氫酶，MDA表示丙二醛；*表示染毒組與對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05)。Fig. 2 Oxidative stress level in the blood of SD rats after MMP exposure for 3 h Note: SOD stands for superoxide dismutase, CAT stands for catalase, and MDA stands for malonic dialdehyde; *indicates significant difference from the control (P<0.05).

不同劑量染毒組MDA含量均高于對(duì)照組，且均有顯著差異(P<0.05) (圖2(c))。與對(duì)照組相比，低、中、高劑量組MDA含量分別升高70.43%、59%和34.8%。這表明，MMP進(jìn)入機(jī)體后能夠誘導(dǎo)血液發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，引起血液MDA含量升高。

3 討論(Discussion)

3.1 MMP對(duì)SD大鼠血液功能的影響

血液是機(jī)體重要的組織，由血細(xì)胞和血漿組成，具有攜氧、免疫等功能。血細(xì)胞包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。大量研究證實(shí)，紅細(xì)胞的主要功能是運(yùn)輸氧氣和二氧化碳[36-37]，同時(shí)還具有免疫功能，參與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)[38-39]。白細(xì)胞是血液中執(zhí)行免疫功能最主要的細(xì)胞[40]，其能夠通過(guò)吞噬細(xì)菌等途徑來(lái)抵御和殺死入侵的病原體[41]，對(duì)機(jī)體防御系統(tǒng)的建立有重要意義。淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均屬于白細(xì)胞，分別在機(jī)體特異性和非特異性免疫功能方面發(fā)揮重要作用[41-43]。

已有研究表明，PAEs會(huì)造成血細(xì)胞數(shù)目下降，影響機(jī)體的免疫功能[44]，但對(duì)其代謝物的影響仍不明確。本研究結(jié)果顯示，MMP(DMP的代謝產(chǎn)物)會(huì)對(duì)血液中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞造成不同程度的損傷，使其數(shù)目下降；且隨著MMP劑量的增大，細(xì)胞數(shù)目下降愈發(fā)明顯(表1)。這表明，作為PAEs類代謝物MMP也會(huì)使血液中的血細(xì)胞數(shù)量減少，進(jìn)而造成血液的攜氧和免疫等功能下降。

臨床上，紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞也常作為診斷病理變化的重要依據(jù)。紅細(xì)胞數(shù)量下降意味著機(jī)體可能出現(xiàn)貧血、白血病等疾??；白細(xì)胞數(shù)目減少代表機(jī)體的造血功能出現(xiàn)障礙；淋巴細(xì)胞數(shù)目偏低會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫缺陷；中性粒細(xì)胞數(shù)量減少表明機(jī)體受到化學(xué)損傷，出現(xiàn)骨髓造血異常等疾病。由此推測(cè)，MMP會(huì)影響血液的攜氧和免疫等功能，進(jìn)而可能會(huì)引發(fā)機(jī)體出現(xiàn)貧血、免疫缺陷及骨髓造血功能障礙等疾病。

3.2 MMP對(duì)SD大鼠血脂代謝、腎、肝功能的影響

總膽固醇是反映機(jī)體內(nèi)脂肪代謝水平的一項(xiàng)重要指標(biāo)[45]，其含量過(guò)多過(guò)少都會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生危害。Zhu等[46]研究發(fā)現(xiàn)PAEs類代謝物會(huì)使膽固醇含量下降。本研究也得到了相似的結(jié)果，無(wú)論短時(shí)間還是長(zhǎng)時(shí)間攝入MMP，機(jī)體血液總膽固醇含量均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)(圖1(a))。這表明，MMP會(huì)影響血液中脂質(zhì)的新陳代謝水平。

尿素氮是蛋白質(zhì)代謝的終末產(chǎn)物，其常作為機(jī)體腎功能評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)[47]。在正常情況下，尿素氮會(huì)被腎小球?yàn)V過(guò)排出體外，若其含量偏低則代表著腎功能失調(diào)，含量偏高則意味著過(guò)濾功能可能失效，造成器質(zhì)性腎功能損害。本研究中，機(jī)體攝入MMP后，血液中尿素氮含量下降(圖1(b))。這表明，MMP會(huì)影響機(jī)體腎功能，導(dǎo)致其功能失調(diào)。

總蛋白含量能夠反映肝臟的合成功能以及儲(chǔ)備能力[48]。酸性磷酸酶也是描述機(jī)體肝功能的一個(gè)重要指標(biāo)[49]。本研究發(fā)現(xiàn)，MMP會(huì)使血液中總蛋白含量以及酸性磷酸酶活性下降(圖1(c)、圖1(d))?？偟鞍缀肯陆悼赡苁且?yàn)闄C(jī)體攝入MMP后使肝細(xì)胞受損，肝臟合成功能出現(xiàn)障礙，最終導(dǎo)致其合成蛋白質(zhì)減少。由于PAEs類代謝物具有親脂性容易滲入膜脂質(zhì)[50]，因此推測(cè)酸性磷酸酶活性下降可能是因?yàn)镸MP與溶酶體膜相互作用，抑制了酸性磷酸酶的釋放，也可能因?yàn)镸MP妨礙了溶酶體和質(zhì)膜的融合，阻止酸性磷酸酶分泌到胞外而導(dǎo)致其活性下降[51]?？偟鞍缀亢退嵝粤姿崦富钚韵陆稻从吵鯩MP對(duì)肝功能有一定影響。由于肝臟是膽固醇和尿素氮合成的主要場(chǎng)所，因此推測(cè)兩者含量的下降也可能是肝功能受損造成的[52-53]。

綜上所述，機(jī)體攝入MMP后，會(huì)導(dǎo)致血脂代謝能力以及腎、肝功能受損。臨床上，總膽固醇含量偏低意味著機(jī)體可能出現(xiàn)肝硬化、貧血等疾病。尿素氮含量減少表明機(jī)體腎功能出現(xiàn)障礙且可能有嚴(yán)重的肝臟疾病。總蛋白含量偏低代表機(jī)體可能患有腎炎、肝炎和肝硬化等疾病。酸性磷酸酶活性下降代表機(jī)體可能患有貧血、腎炎等疾病。本研究中，4個(gè)指標(biāo)相互印證，且與3.1推測(cè)相吻合，因此MMP可能會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體出現(xiàn)貧血、腎炎、腎功能障礙、肝炎和肝硬化等疾病。

3.3 MMP對(duì)SD大鼠血液抗氧化能力的影響

氧化應(yīng)激(oxidative stress, OS)是指機(jī)體氧化與抗氧化平衡被破壞，生成過(guò)多的氧自由基而無(wú)法被清除，從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的一種負(fù)面作用[54]。由于氧自由基可以直接或間接氧化DNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，誘發(fā)基因突變、脂質(zhì)過(guò)氧化以及蛋白質(zhì)變性，因此氧化應(yīng)激通常被認(rèn)為是污染物對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性的作用機(jī)制之一[55]。已有研究表明，苯、四氯化碳及重金屬鉛、鑭、鈦等污染物能夠通過(guò)氧化應(yīng)激引起機(jī)體造血、腎、肝功能受損，進(jìn)而誘發(fā)貧血、造血功能障礙、腎炎、腎功能失調(diào)以及肝炎、肝硬化等疾病[56-60]。因此，筆者從氧化應(yīng)激的角度探究MMP對(duì)大鼠血液、腎、肝損傷的可能作用機(jī)制。

SOD和CAT作為機(jī)體抗氧化酶系極其重要的組成部分，其存在可以減輕氧化應(yīng)激產(chǎn)生的損傷[61]。其中，SOD能夠催化超氧陰離子進(jìn)行歧化反應(yīng)[62]，清除有害的超氧化物自由基；CAT能夠催化過(guò)氧化氫將其迅速轉(zhuǎn)化為無(wú)害或毒性較小的物質(zhì)[63]，防止過(guò)氧化氫過(guò)多積累對(duì)機(jī)體造成損傷。本研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體攝入MMP后會(huì)使血液中SOD和CAT活性下降，且隨著MMP劑量的增加，SOD和CAT活性呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)(圖2(a)、圖2(b))。這表明，MMP能夠抑制血液中抗氧化酶SOD和CAT的活性，進(jìn)而損害血液的抗氧化系統(tǒng)。

MDA作為脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)物，其含量的多少可以反映出機(jī)體氧化損傷的程度[64]。本研究發(fā)現(xiàn)，各劑量MMP染毒組的MDA含量均高于對(duì)照組(圖2(c))。這表明，機(jī)體攝入MMP后導(dǎo)致血液抗氧化防御體系受損，清除自由基的能力下降，引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)血液造成損傷。Holland等[65]研究發(fā)現(xiàn)婦女妊娠期尿液中的某些PAEs類代謝物會(huì)引起8-異丙醇烷(脂質(zhì)過(guò)氧化的生物標(biāo)志物)水平升高，使機(jī)體發(fā)生抗氧化損傷及氧化應(yīng)激反應(yīng)。本研究結(jié)果與之相符。

綜上所述，MMP作為PAEs類代謝物的一種，會(huì)使血液的抗氧化能力下降，誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而對(duì)血液中血細(xì)胞以及血液生化指標(biāo)產(chǎn)生影響，損害血液的攜氧、免疫等功能；血脂的代謝能力以及機(jī)體的腎、肝功能，推測(cè)MMP進(jìn)而可能引發(fā)機(jī)體發(fā)生貧血、造血功能障礙、腎功能失調(diào)以及肝硬化等相關(guān)疾病。本研究有助于明確鄰苯二甲酸酯類代謝物對(duì)血液的毒性效應(yīng)，并為其潛在的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和相關(guān)疾病的預(yù)防提供一定的理論指導(dǎo)。