白芍的軟化工藝研究

任霞 管鳳雅 陳穎 褚靜 劉耀武＊ 王其豐 高貫彪

（1、亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，產(chǎn)品 質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，安徽 亳州 236800 2、亳州市滬譙藥業(yè)有限公司，安徽 亳州 236800）

白芍來源于毛茛科植物芍藥（Paeonia Lactiflora Pall.）的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品[1]，通過調(diào)研發(fā)現(xiàn)，人們根據(jù)藥材的性狀，將藥材分為一等、二等和三等3 個(gè)等級(jí)進(jìn)行生產(chǎn)和銷售。亳州藥材大市場(chǎng)和滬譙中藥飲片廠均以一等品直徑為2.0-2.5 cm，二等品直徑為1.5-2.0 cm，三等品直徑為1.0-1.5 cm[2]。但本實(shí)驗(yàn)僅僅研究二等品白芍軟化工藝。白芍氣香，味苦、酸，性微寒。具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛等作用，用于血虛萎黃，月經(jīng)不調(diào)，自汗等功效[3]。白芍中含有芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥花苷、芍藥酯苷和苯甲酰芍藥苷等，統(tǒng)稱為白芍總苷，其中白芍的主要有效成分是芍藥苷占總成分的90 %以上[4]。現(xiàn)代藥理研究表明，芍藥苷具有養(yǎng)血、抗氧化、抗抑郁等作用[5-6]。白芍主產(chǎn)于安徽、浙江等地，多以生長(zhǎng)在較高海拔或溫帶耐寒類為佳[7-10]。

切制是根類藥材必須經(jīng)過的炮制過程，而軟化工藝對(duì)切制工序影響極大，軟化藥材素有“七分潤(rùn)，三分泡”的說法[11-12]。2020 年版《中國(guó)藥典》記載白芍的軟化未詳細(xì)注明[13]。故本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)白芍的浸潤(rùn)溫度、浸潤(rùn)時(shí)間和悶潤(rùn)時(shí)間進(jìn)行詳細(xì)的考察。本實(shí)驗(yàn)采用UPLC 法，測(cè)定芍藥苷、芍藥內(nèi)脂苷、沒食子酸和苯甲酰芍藥苷成分作為定量指標(biāo)，并結(jié)合水溶性浸出物，運(yùn)用綜合加權(quán)評(píng)分法，為白芍軟化規(guī)范化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)[14]。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

電熱鼓風(fēng)干燥箱(型號(hào)：DHG-9101 OA 型，廠家：上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司)；水分測(cè)定儀（型號(hào)：MB27，廠家：奧豪斯儀器有限公司）；電子天平（型號(hào)：千分之一，上海佑科儀器儀表有限公司）；直線往復(fù)式多功能切藥機(jī)（型號(hào)：QYJ300，金赫達(dá)機(jī)械制造有限公司）；超高效液相色譜儀（型號(hào)：UPLC- CLASS PLUS，waters 公司）；華晨高速多功能粉碎機(jī)（型號(hào)：DFY-600C，浙江省永康市金穗機(jī)械制造廠）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（型號(hào)：HH-4 型，常州國(guó)字儀器制造有限公司）。

1.2 試劑試藥

白芍藥材來源于亳州市滬譙藥業(yè)有限公司，經(jīng)亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院劉耀武教授鑒定確定為雙子葉植物毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，二等品白芍直徑為1.5-2.0cm。 所用材料如下： 芍藥苷（批號(hào)110736-202044，廠家：中國(guó)食品藥品檢定研究院）；沒食子酸（批號(hào)110831-200303，廠家：中國(guó)食品藥品檢定研究院）；苯甲酰芍藥苷（批號(hào)：17042302，廠家：成都普菲德生物技術(shù)有限公司）；芍藥內(nèi)酯苷（批號(hào)：39011900，廠家：成都普斯生物科技股份有限公司）；無水乙醇（級(jí)別：分析純，廠家：江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司）；磷酸（級(jí)別：分析純，廠家：西隴科學(xué)股份有限公司）；乙腈（級(jí)別：分析純，廠家：天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 水分測(cè)定

取切制后白芍薄片，粉碎過篩，按照水分測(cè)定法（《中國(guó)藥典》2020 年版四部通則0832 第二法）進(jìn)行測(cè)定，平行測(cè)定三份，計(jì)算水分，取平均值?！吨袊?guó)藥典》2020 年版收載質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，干燥后白芍水分不得超過14%。結(jié)果表明，白芍水分均符合要求。

2.2 浸出物測(cè)定

取白芍粉末，按照水溶性浸出物測(cè)定法（《中國(guó)藥典》2020 年版四部通則2201 熱浸法），平行三次，取平均值，得最終結(jié)果。

2.3 色譜條件

色譜柱為（2.1×100 nm，1.7 μm）; 流動(dòng)相乙腈（A）-0.05% 的磷酸溶液（B），按下列程序進(jìn)行梯度洗脫。洗脫梯度：0～0.5 min，7%～14% A；0.5～3 min，14% A；3～5.5 min，14%～18% A；5.5～6 min，18%～20% A；6～9 min，20%～22% A；9～9.5 min，22%～40% A；9.5～11 min，40%～50%A；11 ～11.5 min，50%～100% A；11.5 ～12 min，100% A；12～12.5 min，100%～7% A；12.5～14 min，7% A；流速為：0.400 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃進(jìn)樣量：10 μl。對(duì)照品及供試品的色譜圖見圖1。

圖1 UPLC 色譜圖：A 白芍樣品色譜圖B 混合對(duì)照品色譜圖

2.4 溶液制備

2.4.1 對(duì)照品溶液的制備[15]

精密稱取對(duì)照品芍藥苷5.140 mg 、芍藥內(nèi)脂苷15.190 mg、苯甲酰芍藥苷6.15 mg、沒食子酸7.02 mg 分別置于容量瓶中，加50% 乙醇溶解定容得對(duì)照品母液：芍藥苷1063.3 μg/mL、芍藥內(nèi)脂苷308.4 μg/mL、苯甲酰芍藥苷14.32 μg/mL、沒食子酸10.03 μg/mL。

2.4.2 混合對(duì)照品溶液制備

精密量取對(duì)照品母液芍藥苷0.7ml、芍藥內(nèi)脂苷l.2ml、苯甲酰芍藥苷0.4ml、沒食子酸0.2ml，置于2 mL 量瓶中，加50 %乙醇定溶至刻度線，搖勻，獲得混合對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液的濃度分別為1063.30 μg/mL、308.40 μg/mL、308.40 μg/mL 和10.03 μg/mL。

2.4.3 供試品溶液的制備

取白芍粉末，過四號(hào)篩，精密稱定白芍粉末各0.100 g，置于5 mL 錐形瓶中，加50 % 的乙醇溶液于錐形瓶中，密塞，超聲處理30 min（功率250 W ，頻率50 HZ），取出冷卻，加50% 的乙醇定溶至刻度線，搖勻，過0.22 μm 微孔濾膜，即得。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察

精密量取混合對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、12 和16 μl，每個(gè)樣品進(jìn)樣2 針，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄各峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸，并繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，各標(biāo)準(zhǔn)曲線在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。芍藥苷在0.36～14.32μg范圍內(nèi)、芍藥內(nèi)酯苷在7.71～308.04μg 范圍內(nèi)、苯甲酰芍藥苷在26.58～1063.30μg 范圍內(nèi)、沒食子酸在0.25～10.03μg范圍內(nèi)，r 均大于0.999，表明，四成分在其范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對(duì)照品溶液2 μl，并重復(fù)進(jìn)樣6 次，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算得芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷、沒食子酸峰面積的RSD 分別為0.03% 、0.08% 、0.78%、0.08% 其值均小于1.5%，表明該儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取白芍粉末0.100 g，精密稱定，平行操作6 次，以“2.4.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μl，照“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，白芍中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷和沒食子酸四成分結(jié)果的RSD 值為0.72%、1.20%、1.90%和0.76%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.5.3”項(xiàng)下任意一樣品溶液，分別在0、2、4、8、12 和24 h 進(jìn)樣10 μl，按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，計(jì)算峰面積的RSD 值。結(jié)果芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷、沒食子酸的RSD 值分別0.49%、0.62%、1.41%、1.60%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 軟化工藝單因素考察

總加權(quán)評(píng)分，利用綜合評(píng)分值對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析，綜合性評(píng)分=芍藥苷×20+芍藥內(nèi)酯苷× 20 +苯甲酰芍藥苷×20 +沒食子酸× 10 +水溶性浸出物含量× 30[16-17]。

2.6.1 浸潤(rùn)時(shí)間

取白芍不同條件下各約150g，照表格操作，取出放涼，晾干后進(jìn)行切薄片，70℃干燥3 h，取出，照“2.4.3”操作，照“2.3”項(xiàng)下色譜方法測(cè)定結(jié)果，對(duì)不同浸潤(rùn)時(shí)間各指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，見表1。

表1 白芍的不同浸潤(rùn)時(shí)間單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.6.2 浸潤(rùn)溫度

取不同條件下白芍各約150g，照表格操作，取出放涼，晾干后進(jìn)行切薄片，70℃干燥3 h，取出，照“2.4.3”操作，照“2.3”項(xiàng)下色譜方法測(cè)定結(jié)果，見表2。

表2 白芍的不同浸潤(rùn)溫度單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.6.3 悶潤(rùn)時(shí)間

取不同條件下白芍各約150g，照表格操作，取出放涼，晾干后進(jìn)行切薄片，70℃干燥3 h，取出，照“2.4.3”操作，照“2.3”項(xiàng)下色譜方法測(cè)定結(jié)果，見表3。

表3 白芍的不同悶潤(rùn)時(shí)間單因素試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)果與討論

3.1 結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)選取了浸潤(rùn)時(shí)間、浸潤(rùn)溫度、悶潤(rùn)時(shí)間和浸出物四種因素來考察白芍三個(gè)規(guī)格的軟化工藝。由以上結(jié)果表明，最適宜的軟化工藝為：二等品浸潤(rùn)溫度為35℃，浸潤(rùn)時(shí)間為14h，悶潤(rùn)時(shí)間為36h。

3.2 討論

在浸潤(rùn)時(shí)間考察中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)浸潤(rùn)時(shí)間超過36 h 時(shí)，水中有泡沫，檢索文獻(xiàn)得知泡沫是三萜類化合物產(chǎn)生，且不因加熱而消失，故浸潤(rùn)時(shí)間不能超過此時(shí)間。在浸潤(rùn)溫度考察中，當(dāng)浸潤(rùn)溫度大于等于35℃時(shí)，水將會(huì)變成深褐色，經(jīng)檢索得知是溫度過高導(dǎo)致芍藥中萜類化合物會(huì)發(fā)生氧化和重排，因此浸潤(rùn)溫度要小于35℃。在悶潤(rùn)時(shí)間考察中，當(dāng)悶潤(rùn)時(shí)間不能超過48 h 時(shí)，否則會(huì)引起霉變或生蟲。