蜂膠提取物的抗氧化活性及其在牙膏中的應(yīng)用研究

盧 靜 張 環(huán) 陳 欣

(重慶登康口腔護(hù)理用品股份有限公司,重慶 400025)

牙周炎是一種由牙菌斑引起的慢性感染性疾病，其病程的結(jié)果將會導(dǎo)致牙根表面牙周附著喪失和鄰近牙槽骨吸收，最終導(dǎo)致牙齒的喪失[1]。目前大多數(shù)研究均認(rèn)為，牙周炎的大多數(shù)組織損害，是由于機(jī)體對菌斑刺激的防御過度所致，大量證據(jù)提示牙周組織中活性氧引起的氧化應(yīng)激在牙周炎發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用[2,3]。因此，減少牙周局部組織，體內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species, ROS)的產(chǎn)生，促進(jìn)氧化-抗氧化防御系統(tǒng)的平衡，可能對于牙周炎具有潛在的預(yù)防及治療作用[4]。抗氧化劑可減少牙周組織ROS的產(chǎn)生，對牙周炎具有一定作用。研究發(fā)現(xiàn)，配合局部抗氧化的基礎(chǔ)治療效果明顯優(yōu)于單純牙周基礎(chǔ)治療[5]，提示了抗氧化劑在牙周炎治療中的應(yīng)用前景。近些年來，大量學(xué)者研究了抗氧化劑與牙周炎之間的關(guān)系，結(jié)果表明其對牙周炎具有一定的影響作用。

蜂膠是蜜蜂從植物的樹芽、樹皮等部位采集的樹脂，再混以蜜蜂的舌腺、蠟腺等腺體分泌物，經(jīng)蜜蜂加工轉(zhuǎn)化而成的一種膠狀物質(zhì)，在國外，蜂膠被譽為“紫色黃金”。經(jīng)科學(xué)研究證明，蜂膠所含有的豐富而獨特的生物活性物質(zhì)，使其具有抗菌、消炎、止癢、抗氧化、增強(qiáng)免疫、降血糖、降血脂、抗腫瘤等多種功能，對人體有著廣泛的醫(yī)療、保健作用，現(xiàn)已成為各國科學(xué)研究的熱點，并成為新興的保健品倍受推崇。

目前蜂膠按提取工藝主要分為兩種：蜂膠乙醇提取物和蜂膠超臨界提取物。蜂膠乙醇提取物是取蜂膠粉碎，用乙醇浸泡溶解，過濾，濾液回收乙醇，晾干。該工藝處理的蜂膠特點是工藝處理比較簡單，但存在高溫干燥過程中有效成分損失較大、產(chǎn)品顏色過深、重金屬容易超標(biāo)、造假摻假問題嚴(yán)重等問題。蜂膠超臨界提取物是利用超臨界二氧化碳萃取分離技術(shù)，有選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分依次萃取出來，然后借助調(diào)整溫度和壓力的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質(zhì)則完全或基本析出，從而達(dá)到分離提純的目的。用這種方法得到的蜂膠超臨界提取物無毒、無殘留、安全，萃取條件室溫、無氧，避免有效成分高溫分解和氧化，抗菌成分最大程度保留。此外，重金屬含量在萃取過程中也大幅度降低。

作為一種穩(wěn)定的自由基，DPPH能在有機(jī)溶劑中穩(wěn)定存在，其醇溶液呈紫色，具有單一電子，故能接受一個電子或氫離子，在波長為517nm下具有最大吸收。有自由基清除劑存在時，DPPH的單電子被捕捉而使其顏色變淺，在最大光吸收波長處的吸光值下降，且下降程度呈線性關(guān)系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，從而以評價試驗樣品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率來表示，抑制率越大，抗氧化性越強(qiáng)。

本研究采用DPPH自由基評價兩種蜂膠的抗氧化效果差異，同時還研究了兩種蜂膠添加到牙膏中的應(yīng)用情況，初步研究了蜂膠牙膏開發(fā)的可行性和相關(guān)影響因素。

1 材料和儀器

儀器：UV(北京譜析T9CS)；分析天平(梅特勒-托利多)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司)。

試劑：蜂膠超臨界提取物(東莞波頓香料有限公司)；DPPH(CNW)。

2 方法與結(jié)果

2.1 蜂膠提取物的抗氧化活性研究

精確稱取DPPH 0.0199g于50ml容量瓶中，用甲醇配成1mmol/L的DPPH溶液，取1mmol/L該溶液5ml用甲醇稀釋到50ml即得0.1mmol/L的DPPH溶液，避光備用。將蜂膠提取物用甲醇配置成濃度分別為0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.1mg/ml的樣品溶液。不同濃度的待測液各取2ml分別與2ml 0.1mmol/L的DPPH溶液混合均勻，避光反應(yīng)30min(反應(yīng)平衡)。2ml 0.1mmol/L的DPPH溶液中加入2ml甲醇作為模型，以甲醇(模型空白)為參比在其最大吸收波長516nm處測定其吸光度Ac。將反應(yīng)完成的樣品在DPPH的最大吸收波長處測定其各自的吸光度Ai，以不同濃度的2ml樣品溶液加2ml甲醇為各自的參比Aj(試樣空白)。本實驗用EC50(該值定義為溶液中DPPH自由基濃度下降為原始濃度的50%時加入的抗氧化劑的量)來衡量蜂膠超臨界提取物、醇提蜂膠的自由基清除活性。

DPPH自由基清除率=[1-(Ai-Aj)/Ac]*100%

經(jīng)過對數(shù)擬合得到方程：

Y=0.2745ln(x) + 1.417

R2=0.9564

根據(jù)計算蜂膠超臨界提取物清除50% DPPH自由基的濃度為35.41μg/mL，即

IC50 =0.0354mg/mL

圖1表明，隨著蜂膠超臨界提取物濃度的增加DPPH自由基清除率也增加，之后隨其濃度的增加DPPH 清除率趨于平緩，0.1 mg/ml其清除率可達(dá)83.42%。

圖1 蜂膠超臨界提取物DPPH 自由基清除率

經(jīng)過對數(shù)擬合得到方程：

Y=27.038ln(x)+136.17

R2=0.9629

根據(jù)計算醇提蜂膠清除50% DPPH自由基的濃度為41.30μg/mL，即

IC50 =0.0413mg/mL

圖2表明，隨著醇提蜂膠濃度的增加DPPH自由基清除率也增加，之后隨其濃度的增加DPPH清除率趨于平緩，0.1mg/ml其清除率可達(dá)77.23%。

圖2 蜂膠乙醇提取物DPPH 自由基清除率

從以上實驗結(jié)果可以看出，超臨界提取蜂膠的IC50值低于醇提蜂膠，說明超臨界提取蜂膠有更好的抗氧化活性。

2.2 蜂膠牙膏的穩(wěn)定性研究

為了驗證蜂膠提取物加入到牙膏中對膏體穩(wěn)定性的影響，我們選擇一個比較有代表性的基礎(chǔ)配方(見表1)進(jìn)行研究，并添加不同量的蜂膠提取物，分別儲存于室溫和高溫(45℃)進(jìn)行跟蹤測試，觀察樣品的理化指標(biāo)、顏色變化、穩(wěn)定性等，結(jié)果詳見表2。配方1、2添加的是超臨界提取蜂膠，配方3、4添加的是醇提蜂膠。

表1 牙膏配方表

表2 牙膏穩(wěn)定性觀察表

通過對牙膏的穩(wěn)定性觀察結(jié)果顯示，添加了超臨界提取蜂膠的牙膏配方1、2，三個月后均正常，添加了醇提蜂膠的牙膏配方對牙膏本身的影響較大，僅添加0.1%～0.3%就使膏體外觀變成黑色，影響膏體的美觀效果，不利于觀察顏色變化情況。

3 討論

牙周炎的進(jìn)展與牙周組織氧化應(yīng)激水平增加存在密切的關(guān)系，可降低氧化應(yīng)激的抗氧化劑在牙周炎治療中具有一定的應(yīng)用前景。蜂膠是天然珍品，可以長期食用，無毒副作用。蜂膠被譽為天然小“藥庫”，它能預(yù)防和治療疾病，同時無毒無副作用，沒有抗藥性，溫和緩慢，安全可靠，它對人體各臟器都有一個全面調(diào)節(jié)和修復(fù)的作用。早在50年代，國外就應(yīng)用蜂膠軟膏成功地治療了復(fù)發(fā)性口瘡、口腔糜爛、潰瘍等口腔疾病。蜂膠在食品、保健品領(lǐng)域用得比較廣泛，但在口腔護(hù)理用品領(lǐng)域還未得到很好地推廣。本研究初步探討了蜂膠的抗氧化性能以及在牙膏中的應(yīng)用，對如何選擇蜂膠作為抗氧化劑治療牙周炎有一定的指導(dǎo)意義，但牙膏的抗氧化效果還有待進(jìn)一步研究。