益生菌對結(jié)直腸癌患者放化療期腸道菌群及腸屏障功能的影響

羅曉斌，黃定鵬

（1.廣州市黃埔區(qū)云埔社區(qū)醫(yī)院門診部，廣東廣州 510760；2.中國人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院消化科，廣東廣州 510030）

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2020年12月中國人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院收治的100例結(jié)直腸癌患者納入研究，按隨機數(shù)字表法將患者分為觀察組和對照組，各50例。觀察組患者中男性30例，女性20例；年齡46~77歲，平均年齡（67.16±8.11）歲；Dukes腫瘤分期：B期32例，C期18例。對照組患者中男性29例，女性21例；年齡47~78歲，平均年齡（67.23±8.04）歲；Dukes腫瘤分期：B期34例，C期16例。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)中國人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過，所有患者及家屬均對研究知情并簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）》[4]中結(jié)直腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)過病理學(xué)診斷證實；②治療前1個月內(nèi)未使用微生態(tài)活菌制劑。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在胃腸道手術(shù)史；②合并胃腸道炎癥或腸梗阻；③對益生菌過敏；④同時患有其他癌癥。

1.2 治療方法 兩組患者均行氟尿嘧啶注射液（華仁藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20030565，規(guī)格：100 mL：氟尿嘧啶0.25 g與氯化鈉0.9 g）+奧沙利鉑甘露醇注射液（辰欣藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20052531，規(guī)格：100 mL:奧沙利鉑50 mg與甘露醇5.1 g）化療方案治療，氟尿嘧啶注射液靜脈滴注350 mg/m2，連續(xù)靜脈滴注5 d，奧沙利鉑甘露醇注射液靜脈滴注130 mg/m2，靜脈滴注1 d，同時行常規(guī)盆腔放射治療，照射劑量50 Gy，5次/周，2 Gy/次，放療開始第1、5周均予以同步化療。兩組患者在放化療治療后5 d左右給予營養(yǎng)支持，以短肽型腸內(nèi)營養(yǎng)劑（Milupa GmbH，國藥準(zhǔn)字H20100287，規(guī)格：125 g/袋）為主要腸胃營養(yǎng)能源，前3 d按照125 g/d，以120 mL/h速度滴注，后2 d按照250 g/d，以120 mL/h速度滴注。放化療當(dāng)天對照組患者口服：奧美拉唑腸溶膠囊（海南普利制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20113282，規(guī)格：20 mg/粒），40 mg/d；頭孢呋辛酯片（蘇州中化藥品工業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H19990342，規(guī)格：0.25 g/片）4.5 g/d，進行治療。觀察組患者在對照組基礎(chǔ)上加用雙歧桿菌四聯(lián)活菌（杭州遠大生物制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字S20060010，規(guī)格：0.5 g/片），1.5 g/次，3次/d，連續(xù)服用7 d。

1.3 觀察指標(biāo) ①療效評價：按照WHO實體瘤療效評測標(biāo)準(zhǔn)[5]，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）、疾病進展（PD），疾病控制率=（CR+PR+SD）/總例數(shù)×100%。②腸道菌群檢測：放化療結(jié)束后第7天取患者5 g新鮮糞便，取0.5 g糞便加入5 mL生理鹽水稀釋10倍，連續(xù)稀釋法稀釋，并將其滴注于不同培養(yǎng)基上，選擇雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌進行培養(yǎng)與計數(shù)。③腸道屏障功能檢測：放化療前及放化療結(jié)束后第7天抽取患者5 mL靜脈血，3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心處理10 min，通過酶聯(lián)免疫吸附法利用二胺氧化酶/乳酸/細(xì)菌內(nèi)毒素聯(lián)檢試劑盒（北京中生金域診斷技術(shù)股份有限公司）測定D-乳酸（D-LAC）、二胺氧化酶（DAO）；尿乳果糖/甘露醇比值（L/M）測定：放化療前1晚禁食，放化療開始前清晨使患者排空膀胱并口服含乳果糖5 g、甘露醇2.5 g的測試液25 mL，2 h后正常飲食，服用6 h后收集尿液，取20 mL尿液并加入0.2 mg硫柳汞，-20 ℃冷藏，3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心處理10 min，利用高效液相色譜儀[沃特世科技（上海）有限公司，型號：E2695]測定L/M，放化療結(jié)束后第6天晚上禁食，放化療結(jié)束后第7天早晨服用測試液并收集尿液，3 000 r/min離心處理后測定L/M。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以（）表示，組間對比采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)對比采取配對樣本t檢驗；計數(shù)資料以[例(%)]表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床療效比較 兩組患者疾病控制率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者臨床療效比較 [例(%)]

2.2 兩組患者治療后腸道菌群比較 觀察組患者治療后腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)顯著高于對照組，大腸桿菌、糞腸球菌數(shù)顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者治療后腸道菌群比較 [log(CFU/g)， ]

表2 兩組患者治療后腸道菌群比較 [log(CFU/g)， ]

組別 例數(shù) 雙歧桿菌 乳酸桿菌 大腸桿菌 糞腸球菌觀察組 50 9.55±0.69 9.49±0.67 7.92±0.59 8.61±0.61對照組 50 7.85±0.62 8.47±0.66 8.93±0.61 9.07±0.63 t值 12.959 7.669 8.415 3.709 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 兩組患者治療后腸道屏障功能比較 兩組患者治療前D-LAC、DAO、L/M比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；兩組治療后D-LAC、DAO、L/M水平較治療前顯著降低，且觀察組顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組患者治療后腸道屏障功能比較（ ）

表3 兩組患者治療后腸道屏障功能比較（ ）

注：與同組治療前比較，*P＜0.05。D-LAC：D-乳酸；DAO：二胺氧化酶；L/M：乳果糖/甘露醇比值。

組別 例數(shù)D-LAC（ng/mL） DAO（ng/mL） L/M治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后觀察組 50 12.37±1.88 9.76±1.52* 109.37±17.88 88.92±13.18* 2.14±0.27 1.17±0.18*對照組 50 12.41±1.89 10.83±1.53* 110.48±17.76 98.77±14.36* 2.15±0.36 1.33±0.27*t值 0.007 3.808 0.311 3.573 0.157 3.487 P值 0.994 0.001 0.756 0.000 0.876 0.001

3 討論

正常生理環(huán)境下的腸道菌群有著黏膜免疫功能，腸道菌群中的厭氧菌占比較多，且可以與腸道黏膜受體結(jié)合，形成生物屏障，減少病菌對機體的侵襲[6]。相當(dāng)一部分結(jié)直腸癌患者在治療前就已存在腸道菌群失衡與腸屏障功能減弱情況[7]，另外，結(jié)直腸癌患者在進行放化療時所使用的藥物除了具有殺死腫瘤細(xì)胞的功效外，藥物本身的毒性也會對患者體內(nèi)正常細(xì)胞造成不良影響[8]，如破壞患者腸道細(xì)胞，致腸道菌群紊亂，侵襲諸如粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞[9]，降低患者免疫力[10]，使革蘭陽性球菌、陰性桿菌等病原菌增殖，腸道菌群易位。同時，出于抗感染考慮，部分結(jié)直腸癌患者會服用慶大霉素等腸道抗菌藥物，對腸道厭氧菌的生長產(chǎn)生抑制，損害腸功能，厭氧菌的大量減少與需氧菌的大幅增多也使腸道菌群平衡受到打擊。另外，因放化療而產(chǎn)生的應(yīng)激狀態(tài)也可引起腸道缺氧，引起內(nèi)臟血管痙攣，炎性介質(zhì)增多，對腸黏膜造成損傷。

本次研究顯示，兩組患者的疾病控制率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示放化療期間加用雙歧桿菌四聯(lián)活菌并不會影響結(jié)直腸癌的治療效果。觀察組患者治療后腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)顯著高于對照組，大腸桿菌、糞腸球菌數(shù)顯著低于對照組，這主要是雙歧桿菌四聯(lián)活菌中含有雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌，可有效與腸道上皮細(xì)胞結(jié)合，使腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量增多。同時，雙歧桿菌產(chǎn)生的脂肪酸也對大腸桿菌與糞腸球菌與大腸桿菌的過度繁殖加以抑制，使腸道感染得以緩解。史新龍等[11]選取60例直腸癌患者，對其行益生菌酪酸梭菌膠囊干預(yù)，比較治療前后的腸道菌群變化，發(fā)現(xiàn)干預(yù)后患者腸道菌群構(gòu)成得到明顯改善，且腸黏膜細(xì)胞間緊密性得以加強，腸道黏膜通透性降低，腸道免疫功能增強，與本次研究結(jié)果一致。

由于炎性介質(zhì)的釋放與內(nèi)臟血管的痙攣，導(dǎo)致結(jié)直腸癌患者的腸黏膜缺血和再灌注損傷，進而使腸道通透性增強，腸屏障功能降低。相關(guān)研究表明，益生菌可通過免疫屏障對腫瘤進行抑制，加速腫瘤組織的凋亡[12]。D-LAC、DAO、L/M均為評價腸屏障功能的重要指標(biāo)，DAO是一種活性細(xì)胞內(nèi)酶，D-LAC則是菌群代謝產(chǎn)物，DAO與D-LAC水平越高，腸黏膜損傷度越高，L/M比值越高，患者腸道通透性越高，腸黏膜連接部位遭到破壞越多。本次研究中觀察組患者治療后D-LAC、DAO、L/M顯著低于對照組，主要是由于益生菌的代謝產(chǎn)物可以形成機體抗原，機體抗原在進入體內(nèi)淋巴細(xì)胞后，促進機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，增強機體免疫功能，減少體內(nèi)炎性介質(zhì)的釋放，增強抗炎細(xì)胞因子表達，從而達到減少患者腸黏膜損傷，提升腸屏障功能的目的。

綜上所述，益生菌可對結(jié)直腸癌患者腸道菌群的紊亂起到糾正作用，對腸屏障功能起到修復(fù)作用，有一定推廣價值。