電針對小鼠腦創(chuàng)傷介導急性肺損傷的機制研究*

陳冬冬 楊新霞 樓穎穎

寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院 浙江 寧波 315000

腦創(chuàng)傷介導急性肺損傷（TBI-ALI）是腦創(chuàng)傷常見的并發(fā)癥，其致病率往往高達25%。本實驗擬通過觀察腦創(chuàng)傷后肺組織中谷氨酸及相關炎癥因子的表達，探究電針對減輕小鼠TBI-ALI發(fā)生的具體機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組：清潔級C57BL/6（體質(zhì)量21～22g，年齡8周）30只小鼠購買于上海實驗動物中心。術前12小時禁食，自由飲水。隨機分為對照組、造模組、電針組3組。

1.2 儀器與試劑：精密顱腦損傷撞擊器（深圳瑞沃德，68093型號）；腦立體定位儀（深圳瑞沃德，68025型號）；紫外分光光度計(南京科捷，752/752N型號)；谷氨酸檢測試劑盒（南京建成，A074-1-1）；炎癥因子TNF-α、IL-1β試劑盒（美國Ebioscience）。

1.3 模型制備：待小鼠麻醉，將小鼠仰臥位固定于腦立體定位儀，選擇小鼠前囟和人字縫之間左側(cè)顱骨的位置，剪開皮膚1cm暴露顱骨，隨即打開骨膜，對小鼠頭部進行左側(cè)顱骨鉆孔。選定打擊參數(shù)為：深度2mm，時間100ms，速度3.5m/s。打擊后，將骨瓣還納于骨窗中，用膠水封閉窗口，最后縫合頭皮。

1.4 干預方法：對照組：小鼠僅打開顱骨，不進行鉆孔。造模組：本實驗采用控制性皮層沖擊法制備腦創(chuàng)傷模型。電針組：電針組小鼠先行TBI造模，造模后0.5小時進行電針“百會”“大椎”穴，選用華佗牌電針儀進行電刺激，疏密波，頻率2/15Hz，強度1mA，持續(xù)30min，以小鼠肢體輕微抖動為度?！鞍贂毖ㄎ挥陧敼钦?，“大椎”在第7頸椎與第1胸椎間，背部正中。

1.5 谷氨酸濃度測定：TBI術后24小時處死小鼠。取小鼠左肺組織進行勻漿，4℃，12000rpm，10min進行離心。取上清液按照谷氨酸檢測試劑盒添加相應試劑，混勻，37℃水浴40min。取出后采用紫外分光光度計，340nm，1cm光徑，檢測各樣本吸光度值。根據(jù)吸光度計算出谷氨酸濃度。

1.6 炎癥因子測定：取上述肺組織勻漿后上清液，采用ELIAS法進行炎癥因子TNF-α、IL-1β檢測。

1.7 統(tǒng)計學方法：采用SPSS 13.0軟件分析，數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Turkey檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 3組間谷氨酸濃度比較：見表1。

表1 3組間谷氨酸濃度比較（±s）

表1 3組間谷氨酸濃度比較（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與造模組比較，#P＜0.05。

谷氨酸濃度（ng/ml）32.45±7.54 79.88±6.55*46.34±9.34*#組別對照組造模組電針組例數(shù)10 10 10

2.2 3組間炎癥因子濃度比較：見表2。

表2 3組間炎癥因子TNF-α、IL-1β比較（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與造模組比較，#P＜0.05。

組別對照組造模組電針組IL-1β（pg/ml）22.83±3.29 69.72±5.23*44.72±3.75*#例數(shù)10 10 10 TNF-α（pg/ml）18.34±4.33 55.22±3.78*37.65±4.25*#

3 討論

TBI介導ALI發(fā)生的機制多種多樣。研究發(fā)現(xiàn)，血漿中谷氨酸濃度與TBI-ALI的發(fā)生率密切相關，其可通過促進炎癥因子的表達而增加肺損傷的發(fā)生率。因此，有效降低血漿中谷氨酸濃度可有效減輕ALI的致病率。中醫(yī)學認為TBI為腦部受損，瘀血內(nèi)停，氣機受阻，阻滯經(jīng)絡[1]，而針刺“百會”及“大椎”穴可疏通經(jīng)絡，健腦補髓，從而達到腦保護的作用。本研究發(fā)現(xiàn)小鼠造模后肺組織中谷氨酸及炎癥因子TNF-α、IL-1β濃度較對照組明顯增加，而給予電針處理后，三者濃度均較TBI組下降，但仍高于對照組?？梢婋娽樉哂袦p輕TBI-ALI的效果，且其機制可能為通過降低谷氨酸濃度，從而降低炎癥因子的產(chǎn)生而發(fā)揮作用。