動(dòng)物炭疽病的診斷方法與防控措施

郭佳怡

內(nèi)蒙古自治區(qū)通遼市科左中旗動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古通遼 029300

1 病原學(xué)

1.1 形態(tài)特征

炭疽桿菌是一種革蘭氏陽性桿菌，是芽孢桿菌屬，菌體呈大桿狀，長(zhǎng)3～10 μm、寬1～3 μm，兩端平直，顯微鏡下觀察以單桿或鏈狀存在，鏈狀形似竹節(jié)。炭疽桿菌無鞭毛，無法運(yùn)動(dòng)。在人或動(dòng)物的血液、組織臟器中均可以生存繁殖，且在人或動(dòng)物體內(nèi)不產(chǎn)生芽孢，只有與空氣接觸，漂浮在外界有足夠的氧氣，溫濕度適宜才會(huì)產(chǎn)生芽孢，芽孢在菌體中為橢圓形。

1.2 培養(yǎng)特性

炭疽桿菌的培養(yǎng)條件為需氧或兼性厭氧，適宜的生長(zhǎng)溫度為30～37 ℃。在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)呈灰白色、不透明、邊緣粗糙表面如卷發(fā)、大而干燥，菌落直徑2～6 mm。在液體培養(yǎng)基中呈白色絮狀生長(zhǎng)。在明膠培養(yǎng)基中沿穿刺線向四周放射狀生長(zhǎng)，形似松樹。在血瓊脂培養(yǎng)基上，也呈灰白色、半透明、周圍無溶血環(huán)，一般情況下不溶血，有時(shí)個(gè)別菌株產(chǎn)生輕微溶血。在含青霉素培養(yǎng)基上，炭疽桿菌的細(xì)胞壁合成發(fā)生改變，顯微鏡下可觀察到圓球狀成串整齊排列的菌體。

2 流行病學(xué)

2.1 流行特征

我國(guó)將炭疽病列為二類動(dòng)物疫病，主要發(fā)生在夏季的7～9月，8月的病例最多，夏季為放牧的主要時(shí)期，雨季蚊蟲繁殖迅速，易引發(fā)本病，且干旱、洪澇等自然災(zāi)害頻發(fā)的時(shí)期，炭疽病的發(fā)病率也呈顯著升高趨勢(shì)。

2.2 傳播方式

傳染源為草場(chǎng)、土壤、患病動(dòng)物的分泌物、排泄物、養(yǎng)殖器具、圈舍、掩埋的尸體及其污染的環(huán)境等。本病的傳播方式一是消化道感染，采食被污染的食草或植物，或飲用了被污染的井水、河水、生活用水等水源；二是通過皮膚感染，解剖帶菌的家畜如牛、羊、豬造成手部產(chǎn)生創(chuàng)口，剪羊毛、家畜斷尾、去勢(shì)手術(shù)過程中造成皮膚受傷，帶菌蚊蟲叮咬等情況均可造成皮膚感染；三是通過呼吸道感染，由于炭疽芽孢可飄浮在空氣中，吸入帶菌的粉塵或氣溶膠菌可感染本病。

2.3 易感動(dòng)物

炭疽病的易感動(dòng)物多，涵蓋范圍廣。以牛、羊等草食動(dòng)物為主，豬等雜食動(dòng)物也易感，犬、狼主要是因?yàn)橥淌掣腥緞?dòng)物的肉感染本病。不僅水牛、河馬等草食類野生動(dòng)物均可感染本病，紫貂、銀黑狐、北極狐等野生動(dòng)物也可感染炭疽。禽類正常情況下不感染本病。人對(duì)炭疽病易感，主要為從事養(yǎng)殖、屠宰、皮毛加工人員，有機(jī)會(huì)接觸患病動(dòng)物的尸體，或誤食患病動(dòng)物的肉造成感染。

3 臨床癥狀

感染炭疽病潛伏期為1～7 d，最長(zhǎng)潛伏期可達(dá)20 d。根據(jù)臨床診斷的癥狀，炭疽病分為以下幾個(gè)類型：①最急性型：外觀正常，無明顯臨床癥狀，突然倒地死亡，常見于牛、羊。觸診可發(fā)現(xiàn)在牛的脖頸、胸、腰上分布炭疽腫塊。有時(shí)突然死亡的羊伴隨全身痙攣、搖擺、磨牙、呼吸困難、肌肉間歇性抽搐、天然孔出血，幾分鐘后倒地死亡；②急性型：病程為1～3 d，體溫升高至42 ℃，前期精神亢奮、發(fā)出叫聲、頂撞物體，后期呼吸困難，反芻減少，虛弱便血，瀕死時(shí)體溫急速下降，可能引發(fā)孕畜流產(chǎn)；③亞急性型：病程為3～8 d，常見于馬屬動(dòng)物，體溫升高，頸、胸、腹、會(huì)陰、乳房等體表可發(fā)生炭疽癰；④慢性型：主要見于豬，無顯著癥狀，多在屠宰后發(fā)現(xiàn)生豬已患本病。可造成咽部發(fā)炎，淋巴結(jié)腫大，部分臟器出血和壞死。

4 病理變化

患炭疽死亡的動(dòng)物，尸體迅速腐敗膨脹、尸僵不全，典型剖檢變化為天然孔出血，血液中含有暗紅色泡沫，血液粘稠呈暗紅色，俗稱煤焦油樣。脾臟高度腫大，是正常情況的3～5倍，包膜緊張易破碎，脾髓質(zhì)呈黑紅色軟如泥狀，脾小梁與脾小體模糊不清。淋巴結(jié)高度腫脹呈黑紅色，有出血點(diǎn)。皮下肌肉和漿膜有黃色膠樣浸潤(rùn)，并伴有數(shù)量不等的出血點(diǎn)，胃腸黏膜有出血點(diǎn)，肝、腎、心腫大，肺臟、呼吸道充血變性。

5 實(shí)驗(yàn)室診斷方法

5.1 炭疽沉淀試驗(yàn)

冷浸法采集動(dòng)物皮張，本病不能隨意解剖，最好的采集方式是疑似患病動(dòng)物的耳朵，密封保存送至實(shí)驗(yàn)室。恒溫箱37 ℃烘干皮張8～12 h，再放至高壓滅菌器中滅菌，若有產(chǎn)生芽孢污染周圍環(huán)境的危險(xiǎn)，可顛倒烘干滅菌步驟。用滅菌剪將皮張剪成小塊，盡量剪小剪碎，加入5～10倍的石炭酸生理鹽水浸泡18～24 h。將浸泡皮張的液體過濾3次以上，過濾掉皮毛殘?jiān)玫匠吻逋该饕后w，即為待檢抗原。

熱浸法用于檢測(cè)病死動(dòng)物的組織臟器，對(duì)于已經(jīng)剖殺、食用的動(dòng)物，可以采集肝、脾、腎等臟器，研磨搗碎后加入5～10倍生理鹽水，裝入三角瓶中加熱煮沸30～40 min，過濾步驟與冷浸法相同。

取出直徑為0.4 mm的瓶口圓底小試管3支，每支均加入炭疽沉淀血清150 mL。第1支加入炭疽沉淀抗原150 mL為陽性對(duì)照；第2支加入生理鹽水150 mL為陰性對(duì)照；第3支加入待檢抗原。等待10 min后觀察結(jié)果，可見第1支陽性對(duì)照抗原管中上下液面之間出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀，為陽性；第2支陰性對(duì)照抗原管中無明顯變化，為陰性；觀測(cè)待檢抗原結(jié)果。該方法操作時(shí)間周期長(zhǎng)，操作簡(jiǎn)單，檢出結(jié)果穩(wěn)定。

5.2 青霉素串珠試驗(yàn)

通過炭疽桿菌細(xì)胞壁接觸青霉素后由長(zhǎng)桿變圓，且此過程中炭疽桿菌不能產(chǎn)生青霉素酶的特性，辨別炭疽桿菌。將可疑病料直接涂布在含有青霉素的瓊脂平板上，直接涂布的方法檢出率較低?；?qū)⒖梢刹×贤ㄟ^血瓊脂平板或碳酸氫鈉瓊脂培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～15 h，用接種環(huán)選取可疑菌落，接種于含有青霉素0.5 IU/mL的瓊脂液體培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h，將培養(yǎng)好的菌液滴加到載玻片上，自然干燥后加入20%甲醛固定，采用美藍(lán)染色，顯微鏡下觀察菌株大而圓呈鏈狀排列，形似串珠，為陽性。

5.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)簡(jiǎn)稱ELISA，此種方法較為方便快捷、敏感性好，一般采用試劑盒有效期長(zhǎng)，穩(wěn)定性強(qiáng)?？蓹z測(cè)人或動(dòng)物的血清、組織等。主要檢測(cè)樣品中的D-谷氨酸莢膜抗體，通過固相吸附原理，將帶熒光的羊抗兔抗體與之結(jié)合，用酶標(biāo)儀450 nm的波長(zhǎng)讀出吸光度值，判定陰陽性。此種方法的特異性不高，主要取決于試劑盒中抗原的制備是否穩(wěn)定。

5.4 熒光定量PCR

根據(jù)世界衛(wèi)生組織（OIE）發(fā)布的診斷手冊(cè)可知從病料或環(huán)境中直接取樣檢測(cè)PCR，均不可作為最終的檢測(cè)結(jié)果，血液、組織臟器、皮毛、環(huán)境中的影響因子過多，檢測(cè)結(jié)果很可能為陰性，而且死亡動(dòng)物的血液組織臟器中的細(xì)菌增生，可能造成假陽性。所以需要對(duì)樣本進(jìn)行DNA提取?？蓪?duì)病料中的炭疽芽孢桿菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，當(dāng)炭疽芽孢桿菌濃度達(dá)到2×106CFU/mL時(shí)，檢測(cè)的靈敏度更高。熒光定量PCR技術(shù)與其他檢測(cè)方法相比，敏感度更高，特異性更好，檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定。

6 防控措施

6.1 宣傳教育

由于炭疽病長(zhǎng)期存在，覆蓋面廣，通過電視、報(bào)紙、網(wǎng)絡(luò)、小視頻等多種方式，加強(qiáng)群眾對(duì)炭疽病的認(rèn)識(shí)，對(duì)于養(yǎng)殖人員、屠宰人員、獸醫(yī)等相關(guān)工作者重點(diǎn)培訓(xùn)炭疽病的傳染途徑、臨床特征、剖檢變化等專業(yè)知識(shí)，禁止私屠濫宰、隨意售賣不明原因死亡的動(dòng)物及其產(chǎn)品。一旦發(fā)現(xiàn)與炭疽病相似癥狀的死亡動(dòng)物，不得私自移動(dòng)處理，應(yīng)立即上報(bào)給相關(guān)部門，由專業(yè)人員對(duì)動(dòng)物尸體進(jìn)行采樣及無害化處理，不危害周圍環(huán)境。

6.2 疫苗免疫

炭疽的疫源地一旦形成，短期內(nèi)無法根除，對(duì)于老疫區(qū)，家畜疫苗免疫接種需達(dá)到70%以上，保證疫情不反復(fù)出現(xiàn)，有效地保障動(dòng)物健康。規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)可以自行購(gòu)買炭疽疫苗進(jìn)行預(yù)防，我國(guó)主要采用II號(hào)炭疽芽孢疫苗和無莢膜炭疽芽孢疫苗對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫。按照疫苗說明書指導(dǎo)，做好疫苗的保存工作，每年秋季對(duì)動(dòng)物進(jìn)行接種注射。

6.3 疫情處置

參與疫情防護(hù)的人員，需戴好口罩、帽子，穿好防護(hù)服，在保障自身安全的前提下，深入第一現(xiàn)場(chǎng)開展工作。當(dāng)某地突發(fā)本病，應(yīng)立即上報(bào)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)。經(jīng)專業(yè)人員確診后，劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)，隔離病畜、對(duì)發(fā)病地區(qū)進(jìn)行封鎖，直至最后一頭病畜痊愈或死亡后，14 d內(nèi)不再發(fā)現(xiàn)新病畜，方可解除封鎖。

采集所需樣品后，一般采用深埋焚燒的方法對(duì)病畜進(jìn)行無害化處理。嚴(yán)禁封鎖地區(qū)動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品、草料的運(yùn)輸和售賣，對(duì)疫區(qū)可能患病的動(dòng)物及時(shí)進(jìn)行炭疽檢測(cè)。對(duì)未患病的動(dòng)物緊急接種疫苗。

6.4 消毒

對(duì)于發(fā)病動(dòng)物的圈舍、飼養(yǎng)器具、車輛用20%～30%漂白粉嚴(yán)格進(jìn)行消毒，可采取5%福爾馬林對(duì)動(dòng)物尸體進(jìn)行消毒。病畜停留污染地墊土鏟除15～20 cm，覆蓋20%漂白粉后再加入新土，對(duì)販運(yùn)牲畜的道路采取20%漂白粉噴灑消毒。對(duì)圈舍中其它動(dòng)物的皮毛采用2%鹽酸和10%食鹽溶液浸泡消毒2～3 d或采用福爾馬林熏蒸消毒。