關(guān)于高效液相色譜同時測定雞蛋中4種氟喹諾酮類藥物殘留的研究

劉素軍

（萍鄉(xiāng)市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，江西萍鄉(xiāng) 337000）

氟喹諾酮類藥物（FQs）是近些年快速興起的抗菌藥物，具有價格低廉、抗菌譜廣等諸多優(yōu)點，成為醫(yī)學、獸醫(yī)學的熱點藥物。但是隨著氟喹諾酮類藥物的大范圍使用，該藥物的殘留問題不容忽視，人們在食用后不僅會損害身體健康，也有可能導致耐藥菌產(chǎn)生，影響臨床療效。因此為了能夠切實實現(xiàn)食物安全目標，則需要尋找一種有效檢測氟喹諾酮類藥物殘留的方法，這也是本文研究的主要目的。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備與試驗材料

在本次研究中，使用美國WATERS公司生產(chǎn)的2695型高效液相色譜儀以及2475型熒光檢測器；使用美國WATERS公司提供的WatersC18色譜柱，參數(shù)為：5，250×4.6 mm。

試驗中的甲醇與乙腈等由Fish提供；在氟喹諾酮類標準物資采購中均采購于中國獸醫(yī)藥監(jiān)察所，其中沙拉沙星的產(chǎn)品品號為H0181108，含量99.60%；環(huán)丙沙星批號為H0101310，含量99.8%；恩諾沙星的產(chǎn)品批號為H0081505，產(chǎn)品含量為99.50%；達諾沙星產(chǎn)品批號為H0201210，樣品含量達到了95.1%。

試驗中所使用的雞蛋均為本地采購的物品。

1.2 色譜柱條件

本次試驗中的色譜柱為WatersC18色譜柱，流動相0.05mol/L，柱溫35℃；乙腈82∶18，流速0.8 mL/分鐘；進樣量為20。

1.3 樣品提取方法

取2 g雞蛋樣本，在將樣本的精度控制在±0.05 g范圍內(nèi)后，將其放置在50 mL離心管中并添加10mL磷酸鹽緩沖溶液，在渦旋機中處理2分鐘后再振蕩10分鐘，最后按照10000 r/分鐘做長達10分鐘的離心分離，并取上清液放置在另一個離心管中。試驗中的殘渣用10 mL磷酸鹽緩沖液進行第二次提取，第二次提取的液體同樣放置在離心管中。固相萃取C18小柱用磷酸鹽緩沖液以及甲醇進行預(yù)洗，預(yù)洗的液體量均為2 mL，并提取1 mL提取液過柱，擠干后，取1 mL磷酸溶液和乙腈液體（按照70∶30比重配制）進行洗脫，并采集洗脫液。

1.4 制作標準曲線

在制作標準線過程中根據(jù)吸取儲備液用流動相配制標準混合液，混合液的標準分別為0.005、0.01、0.05、0.1、0.2五個標準，設(shè)定進樣量為20后，設(shè)定達諾沙星線性范圍為0.001～0.040 mg/kg，其他三種藥物的線性范圍均為0.05～0.200 mg/kg。

2 試驗結(jié)果分析

2.1 選擇固相萃取小組

在試驗過程中通過調(diào)整乙腈的比重并與標準液進行對比后，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)色譜峰發(fā)生了明顯前移現(xiàn)象，并且隨著乙腈量的增加，則這種前移現(xiàn)象表現(xiàn)得越明顯；而相比之下，出峰越靠后，則出現(xiàn)的前移變化也更加明顯。在試驗中可以發(fā)現(xiàn)，C18柱在ACN40%位置發(fā)生變形，并呈現(xiàn)出展寬的變化，柱壓大，出峰時間快。相比之下，傳統(tǒng)的Phenomenex柱則在ACN40%的情況下出峰相對平穩(wěn)，幾乎無變化，因此在考慮到成本等因素的影響，本次研究中選擇WatersC18柱展開試驗分析。

2.2 繪制色譜圖

在通過上文介紹的方法后，雞蛋中的相關(guān)物質(zhì)得到有效分離，本文研究發(fā)現(xiàn)，在本次設(shè)定的試驗條件下四種藥物的濃度與色譜峰面積之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，根據(jù)試驗隨機選取普色譜圖中基線并以3倍信噪比展開計算，最終的試驗結(jié)果如圖1所示。

圖1 雞蛋四種氟喹諾酮類藥物的色譜圖

2.3 線性范圍

在本次試驗中測定5個平行樣計算出數(shù)據(jù)的標準偏差，針對4種氟喹諾酮藥物的檢測后所設(shè)定的信噪比為3與10時計算出檢出限LOD與定量限LOQ。

2.4 精密度與回收率

試驗期間在吸取20的標準工作液后，根據(jù)上文提出的色譜條件進行檢測，最終發(fā)現(xiàn)藥物的保留時間波動被控制在0.1分鐘以內(nèi)，按照峰面積來計算出標準偏差后，最終的數(shù)據(jù)計算結(jié)果顯示環(huán)丙沙星的相對標準偏差為2.20%、恩諾沙星為2.95%、沙拉沙星為1.69%、達諾沙星為1.52%，這一數(shù)據(jù)證明該方法的精度密度較高，滿足試驗要求。

同時在雞蛋空白試樣的基礎(chǔ)上通過添加四種氟喹諾酮類藥物的標準工作液進行回收試驗后，根據(jù)樣品處理方法進行凈化、色譜分析等方法后連續(xù)開展3次試驗，根據(jù)試驗結(jié)果統(tǒng)計回收率情況，最終的計算結(jié)果如表1所示。

表1 樣品回收率（mg/kg）

根據(jù)表1所統(tǒng)計的相關(guān)資料可知，在本次試驗中4種氟喹諾酮類藥物的回收率被控制在90%～94%之間，符合要求。

2.5 實際樣本檢測

在本次試驗中，為了判斷本文所使用的高效液相色譜法在技術(shù)上是否科學可行，在本地區(qū)農(nóng)貿(mào)市場上分別采購40個雞蛋進行檢測，在按照本文所介紹的方法進行檢測后，每個雞蛋樣本分別設(shè)置2個平行樣本，判斷雞蛋中4種氟喹諾酮類藥物殘留情況，最終的試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所采購的40個雞蛋中僅有1例存在恩諾沙星殘留現(xiàn)象，殘留量達到了3.0，其余雞蛋中未發(fā)現(xiàn)藥物殘留。

3 討論

在本次研究中結(jié)合氟喹諾酮類藥物所具有的酸堿性特征展開含量分析，在試驗中，根據(jù)現(xiàn)有的研究可知，恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、達諾沙星作為常見的氟喹諾酮類藥物，依托毒副作用小、抗菌作用強等優(yōu)點而在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到廣泛使用，但是此類藥物在動物體內(nèi)的消散速度緩慢，可能會造成嚴重的藥物殘留而威脅人們的身體健康，因此為了能夠更好地滿足消費者健康要求，則需要尋找一種有效測量氟喹諾酮類藥物的方法。而根據(jù)經(jīng)驗，針對此類藥物殘留的測量方法較多，常見的技術(shù)手段包括薄層色譜法、毛細管電泳法、微生物法等，但是在分別對比不同方法的應(yīng)用效果后可以發(fā)現(xiàn)，操作最簡單、效率最高的依然是高效液相色譜法，因此基于該方法尋找一種可以有效檢測氟喹諾酮類藥物殘留的技術(shù)方案具有可行性。

本次研究是基于農(nóng)業(yè)部781號公告-6-2006所采取的方法，考慮到雞蛋本身略顯酸性，在常規(guī)試驗處理中采用了0.05 mol/L磷酸溶液：乙腈＝70∶30的方法。本文則將磷酸溶液∶乙腈占比調(diào)整為82∶18，因此洗脫液酸度較高，最終試驗結(jié)果顯示恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、達諾沙星的回收率分別為93%、93%、94%、90%，符合相關(guān)標準；而如果在試驗過程中采用了國標方法，則上述四種藥物的回收率則被限定在50%～60%之間。因此可以認為本文所介紹的高效液相色譜法在技術(shù)上具有可行性，能夠有效檢測雞蛋中4種氟喹諾酮類藥物殘留情況，值得推廣。

4 結(jié)束語

本文所介紹高效液相色譜法能夠快速測量雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留，作為一種高效的藥物檢測技術(shù)，通過該方法可以在短時間內(nèi)檢測雞蛋的藥物殘留情況，作為一種高靈敏度、高準確性的檢測方法，可以滿足廣大企業(yè)以及檢測站點的雞蛋安全管理要求，為未來禽蛋檢測提供了新的技術(shù)渠道，在保證食品安全中發(fā)揮著積極作用，值得推廣。