PD?L1、Beclin?1、P62在NSCLC中的表達(dá)與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

景正全 吳大富 陳明

非小細(xì)胞肺癌（non?small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌總數(shù)的81%［1］，臨床主要表現(xiàn)為咳嗽、咯痰、發(fā)熱、胸痛等。傳統(tǒng)治療策略對NSCLC的療效大多不甚理想，導(dǎo)致NSCLC 患者中位生存時(shí)間僅為8～10 個(gè)月，預(yù)后較差，腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因［2］。近些年分子靶向治療、免疫治療等新興治療手段逐漸受到醫(yī)學(xué)工作者的青睞［3?4］，尤其是免疫治療，包括免疫檢查點(diǎn)抑制、腫瘤疫苗等方法，程序性死亡配體1（Programmed death ligand 1，PD?L1）正是其中主要的檢查點(diǎn)［5］。Be?clin?1、P62 是較重要的自噬蛋白，前者作為腫瘤抑制蛋白，能調(diào)節(jié)自噬過程，后者則更多作為自噬機(jī)制與底物間的調(diào)配器。關(guān)于PD?L1、Beclin?1、P62 與NSCLC 的研究各自均有報(bào)道［6］，但聯(lián)合進(jìn)行深入分析的尚不多見。本研究旨在探討三者在NSCLC 中的表達(dá)及與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以期為NSCLC 的病情診斷和預(yù)后評估貢獻(xiàn)有效的建議。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2019年7月至2020年6月于三峽大學(xué)附屬仁和醫(yī)院檢驗(yàn)科接受檢查的88 例NSCLC 患者作為病例組，收集所有患者的病理資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合臨床上肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］；經(jīng)影像學(xué)檢查確診為NSCLC；②接受在本院治療，依從性好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②既往有放、化療手術(shù)史；③合并其他肺部疾病；④自身免疫疾??；⑤精神類疾病；⑥臨床病歷資料不齊。其中男65 例、女23 例，平均年齡（60.57±10.38）歲，平均病程（1.48±0.35）年，鱗癌37 例、腺癌51 例，TNM 分期［8］Ⅰ期17 例、Ⅱ期20 例、Ⅲ期29 例、Ⅳ期22例。另選距離病例組癌組織5 cm 以上的癌旁組織作為對照組。本研究已獲得院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，受試者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療及檢測方法

所有患者均根據(jù)《非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助治療中國胸外科專家共識》［9］的方案在本院進(jìn)行治療。

檢測方法：采集所有NSCLC 患者的腫瘤標(biāo)本，對照組取病例組旁邊的癌旁組織，均使用10%福爾馬林固定，脫水，石蠟包裹，連續(xù)切片4 μm，切片后常規(guī)染色，再行Envision 兩步法免疫組織化學(xué)染色：切片脫蠟，水化，高壓修復(fù)后，使用3% H2O2滅活過氧化物酶，低溫4℃24 h，再使用二氨基聯(lián)苯胺（diaminobezidin，DAB）染色。同時(shí)使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）作空白對照。所有免疫標(biāo)志物PD?L1、Beclin?1、P62 抗體及免疫組化試劑盒均購自上?；蚩萍加邢薰尽?/p>

1.2.2 結(jié)果判定［10］

采用陽性細(xì)胞比和顯色強(qiáng)度分級綜合判斷，由兩位主治醫(yī)師雙盲法進(jìn)行確認(rèn)。染色強(qiáng)度：未著色0 分，淺黃色1 分，棕黃色2 分，棕褐色3 分；陽性細(xì)胞：陽性細(xì)胞<50%為1 分，>50%為2 分。乘積>1 分為陽性表達(dá)，有爭議的結(jié)果經(jīng)兩位醫(yī)師協(xié)商后進(jìn)行判定。

1.3 隨訪

隨訪時(shí)間為1年，通過門診方式隨訪，治療后1 個(gè)月隨訪一次，隨訪至2021年6月或至患者死亡時(shí)截止，同時(shí)統(tǒng)計(jì)分析術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用IBM SPSS Statistics 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用獨(dú)立t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料使用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用COX 分析NSCLC 患者無復(fù)發(fā)生存情況的影響因素，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組PD?L1、Beclin?1、P62 表達(dá)情況比較

病例組PD?L1、P62 的陽性率均高于對照組，Beclin?1 的陽性率低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1、圖1。

表1 兩組PD?L1、Beclin?1、P62 表達(dá)情況比較［n（%）］Table 1 Comparison of PD?L1，beclin?1 and p62 expressions between the two groups［n（%）］

2.2 PD?L1、Beclin?1、P62 表達(dá)與NSCLC 患者臨床病理特征關(guān)系

不同腫瘤直徑、臨床分期、分化程度和吸煙史的NSCLC 患者的PD?L1 陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；不同腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、肺膜浸潤和吸煙史的NSCLC 患者的Beclin?1 陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；不同腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和肺膜浸潤的NSCLC 患者的P62 陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 PD?L1、Beclin?1、P62 表達(dá)與NSCLC 患者臨床病理特征關(guān)系［n（%）］Table 2 Relationship between PD?L1，Beclin?1，P62 expressions and clinicopathological features of NSCLC patients［n（%）］

2.3 復(fù)發(fā)情況

截至末次隨訪，88 例NSCLC 患者復(fù)發(fā)16 例（復(fù)發(fā)導(dǎo)致的死亡按復(fù)發(fā)計(jì)算），復(fù)發(fā)率為18.18%。

2.4 NSCLC 患者無復(fù)發(fā)生存情況單因素及多因素分析

單因素結(jié)果顯示，腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Beclin?1 表達(dá)（陽性）和P62 表達(dá)（陽性）為影響NSCLC 患者無復(fù)發(fā)生存情況的不良因素（P<0.05）；多因素COX 分析結(jié)果表明，臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和P62 表達(dá)（陽性）是影響NSCLC 患者無復(fù)發(fā)生存情況的獨(dú)立因素（P<0.05）。見表3。

表3 NSCLC 患者無復(fù)發(fā)生存情況單因素及多因素分析Table 3 Univariate and multivariate analysis of recurrence?free survival in patients with NSCLC

3 討論

既往國外研究認(rèn)為，Beclin?1 在肝癌、乳腺癌中低表達(dá)，在結(jié)腸癌中呈高表達(dá)［11］。有報(bào)道提出，P62 的大量積累導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生，且P62 的持續(xù)表達(dá)會抑制Beclin?1 的表達(dá)，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的自噬過程［12］。本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC 組織PD?L1、P62 的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，Beclin?1 的陽性表達(dá)率低于癌旁組織，提示NSCLC 患者存在PD?L1、Beclin?1、P62 表達(dá)異常?？娦≥x等［12］研究認(rèn)為，P62 在癌旁正常肺組織弱表達(dá)，而在肺癌組織高表達(dá)。

本研究顯示不同腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、吸煙史的NSCLC 患者，其PD?L1 陽性率存在明顯差異；除此之外，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺膜浸潤的NSCLC 患者Beclin?1 陽性率的差異比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而P62 陽性率在不同腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肺膜浸潤的NSCLC 患者中存在差異。結(jié)果與早前呂國義等人［13］的相關(guān)研究存在一定出入，原因可能是本研究樣本量少、檢測手段較單一所致。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)88 例NSCLC 患者有16 例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為18.18%。許子宜等人［14］在對221 例NSCLC 患者的預(yù)后研究中，發(fā)現(xiàn)其復(fù)發(fā)率為64.71%，與本研究結(jié)果出入較大，一方面可能是該研究樣本量存在選取偏倚，另一方面也與NSCLC 患者臨床分期相關(guān)，表明NSCLC 患者復(fù)發(fā)率較高，臨床應(yīng)做好隨訪，密切注意患者預(yù)后。

影響NSCLC 患者預(yù)后的多因素分析結(jié)果顯示，臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Beclin?1 表達(dá)（陽性）和P62 表達(dá)（陽性）是影響NSCLC 患者無復(fù)發(fā)生存情況的獨(dú)立因素，提示臨床分期Ⅲ、Ⅳ期、淋巴結(jié)存在轉(zhuǎn)移和P62 陽性表達(dá)的NSCLC 患者術(shù)后有較大可能出現(xiàn)疾病進(jìn)展。關(guān)于P62 陽性表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系，分析是P62 的高表達(dá)能調(diào)控NFKB 細(xì)胞因子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，增加患者復(fù)發(fā)病變的風(fēng)險(xiǎn)［15］。臨床應(yīng)針對性加強(qiáng)對該類患者的術(shù)后監(jiān)測，同時(shí)制定完善隨訪方案，以降低患者術(shù)后復(fù)發(fā)率。與本結(jié)果不同的是，吳菡等［16］發(fā)現(xiàn)PD?L1 陽性的肺癌患者化療效果顯著弱于陰性患者，提示其陽性表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)。造成這一結(jié)果原因，可能是與不同NSCLC 患者腫瘤微環(huán)境的差異以及同一時(shí)間動(dòng)態(tài)表達(dá)水平有關(guān)，導(dǎo)致PD?L1陽性表達(dá)存在明顯差異，這也說明了PD?L1 在NSCLC 患者腫瘤細(xì)胞表達(dá)可能存在時(shí)間、空間的異質(zhì)性。到目前為止，關(guān)于PD?L1 在NSCLC 中表達(dá)的系統(tǒng)研究仍較少，本研究后續(xù)將擴(kuò)大樣本量，延長觀察時(shí)間，深入分析PD?L1 與NSCLC 患者預(yù)后的關(guān)系。

綜上，NSCLC 患者PD?L1、Beclin?1、P62 表達(dá)異常，且P62 陽性表達(dá)是影響復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立因素。