砂糖桔黃龍病防治技術(shù)中有機磷農(nóng)藥殘留分析

砂糖桔黃龍病為我國植物重點檢疫常見病害項目之一。我國大部分區(qū)域的砂糖桔黃龍病均是通過農(nóng)藥給予控制的，然而農(nóng)藥的頻繁使用會造成土壤中有機磷農(nóng)藥含量過高，進而對土壤產(chǎn)生嚴重不良影響。為保證砂糖桔的食用安全與持續(xù)的生長發(fā)育，有必要對黃龍病防治技術(shù)過程中有機磷農(nóng)藥殘留進行檢測與詳細分析，嚴格控制化學藥物的使用劑量，確保有機磷農(nóng)藥未超出國家食品安全標準，使土壤與砂糖桔呈現(xiàn)健康狀態(tài)，同時保障大眾的生命健康。

引言

砂糖桔黃龍病，又稱為黃梢病，其能夠破壞整片桔樹健康生長狀態(tài)，是柑橘主要病害現(xiàn)象。黃龍病傳播的主要方式是柑橘木虱從病株吸取汁液，通過唾液侵染到健康樹冠，從而誘發(fā)病害。砂糖桔黃龍病初期癥狀為樹冠?，F(xiàn)均勻性黃化葉片，或在葉脈底部或葉片邊緣附近呈現(xiàn)無規(guī)律的黃綠色斑駁區(qū)域，伴隨淀粉沉積現(xiàn)象;在發(fā)病中期，病枝長出新葉片，叫作“插金花”，其主脈和側(cè)脈依舊為綠色，而葉肉部分則泛黃嚴重;后期，新梢抽牙艱難，葉片病變癥狀顯著，部分葉片出現(xiàn)下落，枝條自上而下干枯，病枝木質(zhì)部部分或全部呈現(xiàn)出玫瑰色，最終整株凋亡。

1. 基本防治方法

黃龍病的感染發(fā)生在柑橘芽萌發(fā)早期，并傳播到果園。病害接穗和幼苗的傳播是病害遠距離傳播的主要途徑。疾病傳播的速度取決于木虱種群數(shù)量和帶菌率，其發(fā)病率和病情與許多因素有關。幼樹容易生病，樹勢強，抗病性強，病樹多;木虱數(shù)量越多，黃龍病就越普遍，且春梢病較輕，夏、秋梢病較重。

砂糖桔黃龍病的傳播途徑是柑桔木虱，防治該病必須清除柑桔木虱，在幼芽期可用25%殺滅快1000倍，或4.5%好綠微乳劑1500倍，或20%頑蟲敵1500噴藥護梢，并及時根除病株和苗木，徹底消滅病原。然而因農(nóng)藥防治技術(shù)會致使土壤中殘留一定量的有機磷農(nóng)藥，為了食品的安全性，需對有機磷農(nóng)藥殘留狀況有細致的了解，便于采取相應的治理措施及方案來解決問題。

2. 黃龍病防治過程中殘留的有機磷農(nóng)藥

2.1材料與方法

（1）設備準備

NY-16DA農(nóng)藥殘留檢測儀、電子天平、高效無管道凈氣型通風柜、氣相色譜儀、石英毛細管柱、冷凍離心機、液氮罐、鼓風干燥柜、超聲波清洗器等。

（2）試劑準備

無水氯化鈉、丙酮、乙腈、甲醇和正己烷以及有機磷農(nóng)藥。目前，有機磷農(nóng)藥已成為我國農(nóng)業(yè)防治病蟲害的常用產(chǎn)品，其種類眾多，其中典型代表為敵敵畏、毒死蜱、辛硫磷、馬拉硫磷、噻唑磷等，產(chǎn)品純度均大于99%，且要在4℃恒溫條件下進行保存。

（3）試驗方法

使用上述試劑，對農(nóng)業(yè)研究基地的砂糖桔果肉和果皮開展有機磷農(nóng)藥檢測。如果有機磷農(nóng)藥殘留量低于國家食品安全標準，則表明未合格產(chǎn)生。此外，還對未采取控制措施的果園進行了水果和土壤試驗比較。

①農(nóng)藥殘留檢測儀重點對有機磷、氨基甲酸脂類等農(nóng)藥殘留物檢測。測試結(jié)果定性定量均可，定性顯示結(jié)果為抑制率，定量顯示結(jié)果為mg/kg。抑制率顯示和測量范圍：0-100%、農(nóng)藥定量含量測量范圍：0-20mg/kg、透射比準確性≤±1.5%、透射比重復性吸光度（A）≤0.005（0.5%）。預熱20min后，光電流3min內(nèi)漂移引起的透射比（T）值變化不超過1.0%（或吸光度（A）值0.005）。

②氣相色譜條件，取管柱內(nèi)樣品，進行加熱試驗，初始溫度為80℃，維持大約1min時間，然后進行預熱，每分鐘加熱10℃，直至250℃，恒溫形態(tài)大約維持10min。載氣流速為0.8ml/min，尾氣流速為10.0ml/min，氫氣流速為40.0ml/min，空氣流速為400.0ml/min，進樣量為1μL。結(jié)合定性保留時間，用外標法定量峰面積。

③有機磷農(nóng)藥溶液的制備，應用上述所列出的有機磷農(nóng)藥，再用丙酮對其進行稀釋，以準確得到各種混合溶液，將其分別置于10ml器皿中，固定丙酮體積，進行充分均勻混合，并制備不同濃度的0.05-0.50μg/ml溶液，每種樣品一式三份。

④樣品制備，分別取1kg砂糖桔和土壤作為樣品，冷凍干燥，再將獲得的土壤進行研磨，并通過100目篩。再取5g過篩樣品，置于50ml離心管中，隨后注入2ml的水，再添加10ml乙腈，進行充分、均勻混合后，再添入0.5g氯化鈉，再實施充分、均勻混合，后于超聲波中靜置15min，使乙腈與水分層，并除去乙腈層，再利用10ml乙腈執(zhí)行二次萃取操作，合并過濾乙腈層，置于離心管中，樣品制備完成。

2.2 結(jié)果與分析

2.2.1有機磷混合溶液色譜

將濃度設為每毫升0.20μ。結(jié)果顯示，上述五種有機磷農(nóng)藥在約25min均能夠完成分離，并無干擾源。可見，構(gòu)建的色譜條件與此次分析試驗相適應，且滿足砂糖桔黃龍病的檢測基本要求。

2.2.2標準曲線與檢出限

試驗結(jié)果顯示，上述有機磷農(nóng)藥的標準曲線關系均高于0.999，利用S/N計算的檢測限，作為最低檢測濃度，檢測限大約平穩(wěn)在0.01-0.08μg/ml左右，線性范圍控制在0.05-0.50μg/ml，滿足砂糖桔黃龍病的檢測基本要求。相關回歸方程、相關系數(shù)、線性范圍及檢出限（見下表1）。

2.2.3精密度試驗

取5.0g樣品粉末，加入到0.1ml標準混合儲備液之中，予以充分均勻的攪拌后，再依照上述樣品處理方法來制備所需試驗的溶液，按照構(gòu)建的色譜條件予以分析，精確測量參考樣品的峰面積與精密度。結(jié)果表明，該儀器的精密度RSD<2.98%，具有良好的精密度。

平均RSD詳見下表2。

2.2.4重現(xiàn)性試驗

共取5份5.0g粉末樣品，精密加入0.1ml混合標準儲備液，予以充分均勻的攪拌后，按上述項下樣品處理方法制備所需溶液，同時按照照構(gòu)建的色譜條件予以分析，計算方法的重復性和平均RSD如表2所示。結(jié)果表明，重復性RSD<2.78%，計算計方法具備用良好的重現(xiàn)性。

2.2.5樣品回收率

將樣品混合物分成9份，每份5.0g，分為三組：低、中、高。添加不同量的有機磷農(nóng)藥進行比較。按上述制樣處理方法配制溶液，計算有機磷農(nóng)藥的回收率。通過反復試驗發(fā)現(xiàn)，在不同溶液、不同提取措施的有機磷農(nóng)藥之中，乙腈超聲提取方案最簡單、便捷且效果顯著。經(jīng)純化后，通過濾膜即可測定。結(jié)果表明，黃龍病防治方法中，有機磷農(nóng)藥的回收率為87%-105%，滿足實際應用需求。

2.2.6 樣品檢測

根據(jù)上述樣品處理方法，通過色譜條件進行檢測，結(jié)合不同保留時間的定性研究和峰面積外標法定量測定。每個樣品分為3部分，以計算不同種類有機磷農(nóng)藥的殘留量，并取每個樣品的平均值。在檢測過程中，所殘留的有機磷農(nóng)藥不會對砂糖桔及其果皮造成影響，且其對土壤污染不顯著，在土壤中殘留的有機磷農(nóng)藥均符合國家食品安全標準。在土壤中檢測到少量毒死蜱，其含量<1mg/kg，滿足有機磷農(nóng)藥柑橘最大殘留標準，低于標準值，對土壤無污染影響。

3. 討論

隨著農(nóng)業(yè)技術(shù)的不斷更迭，經(jīng)農(nóng)技部門多年深化研究，總結(jié)出以下幾種非農(nóng)藥的黃龍病防治措施，能夠從本質(zhì)上降低有機磷農(nóng)藥使用過多造成的食品污染及安全問題。①強化果樹檢疫。鑒于砂糖桔黃龍病現(xiàn)象頻出，有必要進行劃分區(qū)域管理，分成疫區(qū)與非疫區(qū)，采用病樹隔離措施，預防黃龍病植物與健康樹接觸，感染正片非疫區(qū)。砂糖桔在種植過程中遭到柑橘木虱的病毒傳播危險，柑橘木虱可通過唾液攜帶病原體侵入健康樹。因此，必須做好砂糖桔樹檢疫工作，強化對柑桔木虱的防治，以免病毒蔓延，造成不可挽回的損失。此外，柑橘木虱的防治工作于每年的4-10月進行，可使用低毒藥物防止病原體的持續(xù)、廣泛傳播。②深化栽培管理制度。由于過多的應用有機磷農(nóng)藥，會對食品安全與大眾健康安全存在著一定的威脅，需盡量采取有效的針對性預防措施，并進行細致化管理，在最大程度上減少黃龍病危害。一是做好砂糖桔栽培管理，增加植物抗病性，防止出現(xiàn)黃龍病的到處傳播和蔓延的惡劣情況;二是針對病發(fā)砂糖桔樹木，務必及時實施挖掘、砍伐措施，清理病果，清除病原菌，并即刻進行病株焚燒措施。此外，對于砂糖桔栽培工作，在種植過程要科學施肥，提高砂糖桔樹抗病能力。依據(jù)各地的氣候特征以及砂糖桔的生長規(guī)律，做好冬肥、春肥的及時施用。冬季肥料主用于砂糖桔收獲7天后，每棵果樹施0.4kg45%的復合肥（N∶ P∶K=1∶0.5∶1）。每年2月下旬-3月上旬施春肥，每棵果樹施0.3kg復合肥，保證果樹生長需要;12月-次年3月，利用99%200倍綠顆乳油實施消毒2次，同時需做好其他病蟲害防治。③提升人工檢查頻率。每年組織技術(shù)人員對砂糖桔園進行定期檢查，并結(jié)合種植地區(qū)黃龍病的發(fā)生頻率與規(guī)律，尤其是在秋梢成熟和果實變色階段，提高檢測頻率，以便及時了解黃龍病的發(fā)生時間及病情進展。同時，盡早排查整個砂糖桔園，設置隔離帶，保證砂糖桔基地其他健康樹木不受黃龍病感染。

結(jié)語

此次試驗采用有機磷農(nóng)藥噴灑病枝，采用抑蟲、殺菌、營養(yǎng)液滴入樹干、空洞中，以此來防治黃龍病，其操作便捷，成本費用較低，效果明顯。同時，通過檢測證明了采用有機磷農(nóng)藥治理砂糖桔樹木病害，所殘留的有機磷農(nóng)藥不會對砂糖桔及其果皮造成影響，且其對土壤污染十分微小，在土壤中殘留的有機磷農(nóng)藥均符合國家食品安全標準。此次研究結(jié)果，為果農(nóng)及時止損，幫助脫貧致富，并對其他地區(qū)防治黃龍病措施有著指導作用，可大范圍實施推廣應用。

作者簡介：

鄭麗（1975.4-），女，廣西荔浦人，漢族，工程師，本科，研究方向：農(nóng)藥殘留分析。