復合酶制劑對凡納濱對蝦生長性能、血漿生化指標和免疫性能的影響

申亮 于志文 韓佳樂 何立彬 郭冉

摘要：為研究復合酶制劑對凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）生長性能、血淋巴生化指標和免疫性能的影響，選用初始體重為（0.40±0.02）g的蝦苗240尾，隨機分為兩組，對照組投喂基礎(chǔ)飼料，試驗組飼料中添加0.04%復合酶制劑，試驗為期10周。結(jié)果顯示：與對照組相比，試驗組凡納濱對蝦生長性能無顯著變化（P>0.05），但存活率有降低的趨勢;對蝦體成分有顯著變化（P<0.05）;試驗組對蝦肝胰腺中T-AOC、血漿中TCHO和TG含量顯著提高（P<0.05），肝胰腺中AKP、SOD、GOT活性和血漿中GLU含量顯著降低（P<0.05）?？梢?，在本試驗條件下，飼料中添加0.04%復合酶制劑能有效改善凡納濱對蝦體成分組成，提高其對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，增強其抗氧化能力，對其肝臟有明顯的保護作用。

關(guān)鍵詞：凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）;復合酶制劑;生長性能;生化指標;免疫性能

近年來隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模越來越大，各種水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的飼料需求也不斷增加，而魚粉作為優(yōu)質(zhì)蛋白源，其產(chǎn)量不增反減，且價格不但居高不下還有上漲的趨勢[1]。為應(yīng)對這一問題，我國的科研人員開始尋找其他的植物性蛋白源或動物性蛋白源來替代魚粉，目前研究較多的動物性蛋白源有雞肉粉、血粉和魚漿蛋白肽等，植物性蛋白源有玉米粉、豆粕、花生粕、微藻類等[2]。但由于不同原料的蛋白質(zhì)含量和組成不同，只能在一定程度上替代魚粉，且多數(shù)植物性原料中含有抗營養(yǎng)因子，例如植酸、丹寧等會影響?zhàn)B殖動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[3];動物性原料中不合理的蛋白質(zhì)組成也限制了其替代魚粉的比例[4]。不同的養(yǎng)殖品種對蛋白質(zhì)的需求量也不盡相同。所以，較好的解決方法是根據(jù)養(yǎng)殖動物的營養(yǎng)需求特征將不同的蛋白質(zhì)原料合理搭配并在飼料中加入外源酶制劑以提高養(yǎng)殖動物對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。

已有研究表明，生物體內(nèi)未被完全消化的植酸鹽在腸道內(nèi)會結(jié)合鈣、鋅、銅等礦物質(zhì)，可能導致動物缺乏礦物質(zhì)營養(yǎng)，而添加高質(zhì)量的植酸酶可以將植酸鹽分解，有效避免這一問題[5]。宋紅利[6]的研究發(fā)現(xiàn)，在低魚粉飼料中添加蛋白酶能顯著促進凡納濱對蝦生長性能，提高免疫酶和消化酶活性。周萌等[7]的研究指出，在半精制飼料中添加植酸酶能有效改善南美白對蝦的生長性能及磷的利用率。此外，在歐洲鰻鱺的研究中也發(fā)現(xiàn)復合酶制劑具有促進生長，增強免疫的作用[8]。但關(guān)于復合酶制劑在凡納濱對蝦飼料中應(yīng)用的研究較少，鑒于此，本試驗以凡納濱對蝦為試驗對象，在飼料中添加一定量的復合酶制劑探究其對凡納濱對蝦生長、代謝及免疫性能的影響。

1材料與方法

1.1試驗飼料

飼料中脂肪源為魚油、豆油和玉米油，蛋白源為魚粉、魷魚膏和花生粕。添加酶制劑的飼料記為C組，對照組記為A組。飼料原料中的豆粕、花生粕和魚粉經(jīng)過粉碎機粉碎后過80目網(wǎng)篩。將各種原料按照配方中的比例均勻混合到一起，經(jīng)過擠壓膨化機處理制成粒徑為1.5mm顆粒飼料。烘箱60℃烘干半小時再進行自然風干，于-20℃的冰箱中冷凍保存。

復合酶制劑組成：木聚糖酶（20000000U/kg）、葡聚糖酶（2000000U/kg）、果膠酶（2000000U/kg）、蛋白酶（15000000U/kg）、植酸酶（15000000U/kg）、甘露聚糖酶（5000000U/kg）。每噸添加400g。

1.2試驗設(shè)計

凡納濱對蝦蝦苗在正式試驗前經(jīng)14d的暫養(yǎng)，暫養(yǎng)期間投喂商業(yè)飼料，蝦苗產(chǎn)地的鹽度為15‰，與本實驗室所用的海水鹽度不一致，暫養(yǎng)期間逐漸提升暫養(yǎng)用水的鹽度（每天增加1‰～2‰）。正式進行試驗前將蝦苗空腹24h，挑選體質(zhì)強健，大小均勻，體重為（0.40±0.02）g的蝦苗進行為期10周的養(yǎng)殖試驗。

1.3飼養(yǎng)管理

將蝦苗置于規(guī)格為60cm×40cm×50cm玻璃缸中飼養(yǎng)，每缸中放蝦苗40尾。試驗用水為經(jīng)二氧化氯處理過的天然海水，鹽度為（30±1）‰。本試驗共分兩組，每組設(shè)置3個平行，對照組A投喂基礎(chǔ)飼料，試驗組C投喂0.04%酶制劑的飼料，定時投喂（08：00、14：00和20：00），投喂量控制在蝦總重的6%～10%，投喂半小時后觀察吃食情況，投喂1h后用虹吸管清除糞便。每兩周稱重一次，調(diào)整投喂量;每天換水一次，換水量控制在1/3。水溫控制在27～29℃，每周測定水體氨氮、亞硝酸鹽、pH值、溶解氧、鹽度等常規(guī)水質(zhì)指標。要求：氨氮<0.2mg/L、亞硝酸鹽<0.05mg/L、pH值在7.6～8.1、溶解氧為5.5～7.5mg/L、鹽度為31‰。

1.4樣品采集

飼養(yǎng)至試驗結(jié)束，空腹24h后取樣，記錄每缸的總數(shù)、總重。每缸中隨機撈取蝦12尾，經(jīng)丁香酚麻醉后，擦干體表水分，稱重并記錄體長。取4尾蝦擦干表面水分，記錄體長體重，放入烘箱烘干至重量不再發(fā)生變化，放入干燥器用作全蝦指標的測定。另取8尾蝦用作血漿生化指標的測定。用1mL的一次性注射器于對蝦的圍心腔抽取血淋巴。血淋巴和抗凝劑的比例為1∶2，每尾蝦抽取血淋巴的量為0.3mL。血淋巴經(jīng)離心后（3500r/min）取上清液即血漿用于生化指標的測定，抗凝劑的組成為：0.45mol/LNaCl，0.01mol/LKCl，0.01mol/LEDTA·Na 2，0.01mol/LHEPES，pH值7.3。將抽取血淋巴后的蝦放于冰托盤上，小心取出肝胰腺，放入液氮迅速冷凍后轉(zhuǎn)入-80℃的冰箱中保存，以用于肝胰腺中相關(guān)指標的測定，蝦體的剩余部分剝離出肌肉，擦干表面水分，稱重，放入烘箱中（105℃）烘干至重量不發(fā)生變化，轉(zhuǎn)入干燥器中保存，用于肌肉指標的測定。

1.5測定指標及方法

飼料、全蝦和肌肉中的水分含量采用烘干減重法（烘箱105℃）;粗灰分含量采取馬弗爐灰化法;粗蛋白含量用凱氏定氮法;粗脂肪采用索氏抽提法。堿性磷酸酶（AKP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量均采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定;血漿生化指標送秦皇島港口醫(yī)院檢測。

存活率（SR，%）=100×N t/N 0;

增重率（WGR，%）=100×（W t-W 0）/W 0;

特定生長率（SGR，%/d）=100×（lnW t-lnW 0）/t;

飼料系數(shù)（FCR）=F/（W t-W 0）。

式中：N t為試驗?zāi)┐婊畹奈矓?shù)，N 0為試驗初蝦的尾數(shù);W t為試驗?zāi)┪r體重，g;W 0為試驗初蝦體重，g;t為試驗天數(shù)，d;F為飼料攝食量，g。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

本試驗所涉及的數(shù)據(jù)均采用SPSS26.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析軟件進行單因素方差分析（one-wayANOVA），試驗結(jié)果用平均值±標準差表示。若經(jīng)單因素方差分析后結(jié)果有顯著性差異（P<0.05），則用Duncan氏法進行多重比較分析。

2結(jié)果與分析

2.1復合酶制劑對凡納濱對蝦生長性能的影響

A組和C組試驗蝦的增重率、特定生長率、飼料系數(shù)間無顯著性差異（P>0.05）;存活率A組高于C組（P<0.05）。見表2。

2.2復合酶制劑凡納濱對蝦體成分的影響

全蝦和肌肉的水分含量兩組間無顯著性差異（P>0.05），粗灰分含量C組顯著低于A組（P<0.05）;全蝦的粗脂肪含量C組顯著高于A組，粗蛋白含量A組顯著高于C組（P<0.05）;肌肉的粗脂肪含量C組顯著低于A組，粗蛋白含量A顯著低于C組（P<0.05）。見表3。

2.3復合酶制劑對凡納濱對蝦肝胰腺免疫酶活性的影響

A組試驗蝦肝胰腺中的堿性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的活性顯著高于C組（P<0.05）;A組的總抗氧化能力（T-AOC）則顯著低于C組（P<0.05）;丙二醛（MDA）含量A組略高但兩組無顯著性差異（P>0.05）。見表4。

2.4復合酶制劑對凡納濱對蝦血漿生化指標的影響

A組試驗蝦血漿中的膽固醇（TCHO）和甘油三酯（TG）的含量顯著低于C組（P<0.05）;葡萄糖（GLU）含量A組顯著高于C組（P<0.05）。見表5。

3討論

3.1復合酶制劑對凡納濱對蝦生長性能及體成分的影響

在飼料中添加復合酶制劑可以彌補動物內(nèi)源消化酶的不足，并有助于動物對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[9]。黃燕華等[10]的試驗證明，單獨添加某一種酶制劑對南美白對蝦幼蝦的生長性能無顯著影響，而對蝦體成分中也僅有添加淀粉酶組的蛋白質(zhì)含量顯著高于對照組。另有研究表明在凡納濱對蝦飼料中添加不同量的植酸酶對其生長性能和體成分均無顯著性影響[11]。在日本沼蝦的研究中發(fā)現(xiàn)，添加500U/kg的植酸酶可以顯著提高其生長性能，而全蝦的粗蛋白質(zhì)和粗灰分含量在添加2000U/kg的植酸酶時最高，肌肉中粗灰分含量則表現(xiàn)出先升后降的趨勢[12]。本試驗的結(jié)果顯示，飼料中添加0.04%的復合酶制劑，對凡納濱對蝦增重率、飼料系數(shù)和特定生長率均無顯著影響，而成活率反而降低，這一結(jié)果在黃燕華等[10]的文章中也有提及，不同的酶制劑可能會對養(yǎng)殖動物的生長性能產(chǎn)生積極的或消極的影響，推測原因可能是不同的養(yǎng)殖對象、養(yǎng)殖環(huán)境和復合酶制劑的組成不同所導致。全蝦粗蛋白含量對照組顯著高于試驗組，粗脂肪含量對照組顯著低于試驗組，而肌肉中的結(jié)果則剛好相反。這表明飼料中添加復合酶制劑后對脂肪和蛋白質(zhì)在凡納濱對蝦體內(nèi)的沉積轉(zhuǎn)化造成影響。對蝦的可食部位一般為肌肉，更高的蛋白質(zhì)含量、較低的脂肪含量口感會更好。本試驗結(jié)果表明復合酶制劑組全蝦和肌肉的粗灰分含量顯著低于對照組，這一結(jié)果與冷向軍[3]所闡述的不同，但在歐洲鰻鱺的試驗中也出現(xiàn)了添加了外源酶制劑魚體粗灰分含量降低的現(xiàn)象[8]。粗灰分含量可能與養(yǎng)殖的種類相關(guān)，復合酶制劑中各種酶不同的添加比例，所產(chǎn)生的結(jié)果也可能不同，具體原因還有待深入研究。

3.2復合酶制劑對凡納濱對蝦血漿生化指標的影響

凡納濱對蝦血漿中總膽固醇、甘油三酯和葡萄糖含量的高低能反映其對營養(yǎng)物質(zhì)的代謝情況。

本試驗結(jié)果顯示，試驗組血糖含量低，甘油三酯和總膽固醇含量高，目前關(guān)于酶制劑對凡納濱對蝦血漿生化指標的研究較少。但在魚類中的研究顯示，飼料中添加木聚糖酶可以有效消除木聚糖的抗營養(yǎng)因子作用，提高動物對營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收，在芙蓉鯽飼料中添加木聚糖酶后出現(xiàn)血糖、甘油三酯升高，總膽固醇含量下降的現(xiàn)象[13]。造成本試驗結(jié)果的原因可能是試驗組長期加入酶制劑能提高凡納濱對蝦對飼料中糖的利用，試驗結(jié)束時，經(jīng)過24h饑餓，試驗組仍以糖為供能物質(zhì)而不動用脂類供能，從而導致血糖含量較對照組偏低;而對照組在長期的飼養(yǎng)中，凡納濱對蝦對飼料中糖類利用有限，在24h的饑餓后，優(yōu)先以消耗體內(nèi)脂肪來提供能量，而導致脂肪含量偏低。

3.3復合酶制劑對凡納濱對蝦肝胰腺免疫指標及代謝酶活性的影響

超氧化物歧化酶是生物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，可以將生物體內(nèi)的超氧陰離子變成過氧根離子。丙二醛是生物體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其含量高低可以反映機體的肝臟損傷情況，在試驗中，丙二醛常與超氧化物歧化酶一起作為評價動物體抗氧化能力的重要指標[14]?？偪寡趸芰娙蹩梢灾苯臃从撤布{濱對蝦的健康狀況，堿性磷酸酶在凡納濱對蝦代謝過程中起重要作用[15]。此外，谷丙轉(zhuǎn)氨酶亦可被用來作評價肝臟是否受損傷[16]。宋紅利[6]的研究表明，在低魚粉凡納濱對蝦飼料中添加蛋白酶能明顯提高其血清和肝胰腺中超氧化物歧化酶活性，降低丙二醛含量。但譚崇桂等[17]的研究卻發(fā)現(xiàn)，添加一定量的蛋白酶并未對南美白對蝦血清中超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶活性及丙二醛含量造成顯著影響。黃燕華等[10]的試驗亦證明，添加植酸酶、木聚糖酶并未對南美白對蝦的超氧化物歧化酶活力造成顯著影響。在本試驗中，加入復合酶制劑后試驗組的總抗氧化能力顯著高于對照組;此外，超氧化物歧化酶活性對照組顯著高于試驗組;丙二醛含量差異雖不顯著，但對照組偏高，兩個指標表現(xiàn)出一致的趨勢。丙二醛含量高說明凡納濱對蝦體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化物含量高，因此，超氧化物歧化酶的活性升高來清除體內(nèi)的氧自由基;同時，谷草轉(zhuǎn)氨酶活性試驗組顯著低于對照組。以上結(jié)果表明復合酶制劑可以有效保護凡納濱對蝦的肝臟，增強其抗氧化能力。試驗組中所添加的復合酶制劑含有植酸酶，植酸酶能夠提高凡納濱對蝦對磷的利用率，而對照組肝胰腺中堿性磷酸酶活性顯著高于試驗組，說明凡納濱對蝦開始消耗自身儲備的磷來維持正常的生命活動，從而出現(xiàn)試驗組堿性磷酸酶活性低于對照組的結(jié)果。由此可推測，凡納濱對蝦全蝦和肌肉中試驗組粗灰分含量低于對照組的原因可能是，復合酶制劑能夠分解各種抗營養(yǎng)因子，提高凡納濱對蝦對礦物鹽的利用，因此在體內(nèi)不需大量的積累礦物鹽，所以含量低于對照組。由于本試驗并未設(shè)置單獨的酶制劑組，所以究竟是哪一種酶或哪些酶在起作用還有待深入研究。

4結(jié)論

在本試驗的條件下，在凡納濱對蝦飼料中添加0.04%的復合酶制劑能夠有效改善對蝦體成分組成，提高口感;有效提高凡納濱對蝦對飼料中難消化物質(zhì)（如植酸）的吸收利用;顯著增強凡納濱對蝦的抗氧化能力，對凡納濱對蝦的肝臟有明顯的保護作用。

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Effectofcompoundenzymepreparationonthegrowthperformance，plasmabiochemicalindex，andimmuneperformanceofLitopenaeusvannamei

SHENLiang，YUZhiwen，HANJiale，HELibin，GUORan

（OceanCollegeofHebeiAgriculturalUniversity，Qinhuangdao066000，China）

Abstract：Tostudytheeffectofthecompoundenzymepreparationonthegrowthperformance，hemolymphaticbiochemicalindexandimmuneperformanceofLitopenaeusvannamei，240shrimpfrywithaninitialbodyweightof（0.40±0.02）gwereselectedandrandomlydividedintotwogroups.Thecontrolgroupwasfedwiththebasicfeed.Thetestgroupwasfedwithabasaldietcontaining0.04%complexenzymepreparation.Thefeedingtestlastedfor10weeks.Theresultsshowedthatcomparedwiththecontrolgroup，therewasnosignificantchangeinthegrowthperformanceofLitopenaeusvannameiintheexperimentalgroup（P>0.05），butthesurvivalratewasreduced.ThereweresignificantchangesinthebodycompositionofLitopenaeusvannamei（P<0.05）.T-AOCwassignificantlyincreased（P<0.05），buttheactivitiesofAKP，SODandGOTweresignificantly

reduced（P<0.05）inthehepatopancreasofLitopenaeusvannameiintheexperimentalgroup.ThecontentofTCHOandTGwassignificantlyincreased（P<0.05）buttheGLUcontentwassignificantlyreduced（P<0.05）intheplasmaofLitopenaeusvannameiintheexperimentalgroup.Itcanbeseenthatundertheconditionsofthistest，theadditionof0.04%compoundenzymepreparationstothefeedcaneffectivelyimprovethebodycompositionofLitopenaeusvannamei，improveitsdigestionandabsorptionofnutrientsinthefeed，enhanceitsantioxidantcapacity，andhadasignificantprotectiveeffectonitsliver.

Keywords：Litopenaeusvannamei;compoundenzymepreparations;growthperformance;biochemicalindicators;immuneperformance

（收稿日期：2021-11-23;修回日期：2022-01-07）