高效液相色譜法測定面煨肉豆蔻中去氫二異丁香酚含量

董清，杜攀，李培

（山東省聊城市檢驗檢測中心，山東 聊城 252000）

肉豆蔻作為藥材使用始載于唐代王燾《外臺秘要方》，具有溫中行氣、澀腸止瀉之功效，用于脾胃虛寒、久瀉不止、脘腹脹痛、食少嘔吐［1］。其炮制方法最早見于南北朝劉宋《雷公炮炙論》的面煨法［2］，后又出現(xiàn)麩煨、濕紙煨、滑石粉炒、麩炒、蛤粉炒、制霜等法。2005年及以前版本《中國藥典（一部）》中炮制方法均為面煨法，2010年版以后改為麩煨法［3］?！渡綎|省中藥飲片炮制規(guī)范》采用面煨法［4］，雖操作煩瑣，面結(jié)不易除去，但該炮制工藝沿用已久，且面煨能除去部分油脂，免于滑腸，減輕刺激，增強固腸止瀉功效，故有必要繼續(xù)保留。肉豆蔻主要含有揮發(fā)性成分和非揮發(fā)性成分，非揮發(fā)性成分中去氫二異丁香酚具有較強的抑菌、抑制肝內(nèi)脂質(zhì)氧化作用，為肉豆蔻的活性成分［5］，且在煨制過程中不易揮發(fā)。本研究中建立了測定面煨肉豆蔻中去氫二異丁香酚含量的高效液相色譜法［6?7］，以提高面煨肉豆蔻的質(zhì)量標準?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200sl型色譜工作站（美國安捷倫科技公司），配有G1314B型紫外檢測器；BT 125D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，精度為0.1 mg）；KQ?500GVDV型雙頻恒溫數(shù)控超聲提取儀（昆山市超聲儀器有限公司，功率為500 W，頻率為80 kHz）。

1.去氫二異丁香酚A.對照品溶液B.供試品溶液C.空白溶劑圖1高效液相色譜圖1.DehydrodiisoeugenolA.Reference solution B.Test solution C.Blank solventFig.1 HPLC chromatograms

1.2 試藥

去氫二異丁香酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111838?201804，含量為98.6%）；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純；肉豆蔻（安徽省毫州藥材市場，共10批，產(chǎn)地為廣西），經(jīng)山東省聊城市檢驗檢測中心李廣華主管中藥師鑒定為正品，均符合2020年版《中國藥典（一部）》標準。

2 方法與結(jié)果

2.1 面煨肉豆蔻制備

取面粉，用清水和成面團，壓成薄餅狀，用面餅逐個包裹肉豆蔻，皮厚1.5～3.0 mm［8］，涼至半干，投入已炒熱的滑石粉或沙中，煨炒至面皮呈焦黃色，透出芳香氣味時取出，篩去滑石粉或沙子，剝?nèi)ッ嫫?，放涼；或趁熱剝?nèi)ッ嫫?，及時切成厚片，放涼。共制備10批（分別編號為1?10號）。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇?水溶液（72∶28，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：274 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。理論板數(shù)以去氫二異丁香酚峰計不低于3 000，在此色譜條件下的色譜圖見圖1。

2.3 溶液制備

取去氫二異丁香酚對照品25 mg，精密稱定，加甲醇溶解并定容至50 mL容量瓶中，搖勻，作為對照品貯備液；精密量取3 mL，加甲醇定容至50 mL容量瓶中，搖勻，即得對照品溶液。取樣品粉末（過2號篩）0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz，溫度為2～10℃）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。以甲醇作為空白溶劑。

2.4 方法學考察

線性關(guān)系考察：精密吸取2.3項下對照品貯備液1，2，3，4，5，6 mL，分別置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，按2.2項下色譜條件進樣測定。以去氫二異丁香酚對照品的進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=3 675.9X?4.921 3（r=1.000 0，n=6）。結(jié)果表明，去氫二異丁香酚對照品進樣量在0.132 0～0.792 0μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取2.3項下對照品溶液10μL，按2.2項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.71%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取樣品（編號為7號），按2.3項下方法制備供試品溶液，平行6份，按2.2項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結(jié)果的RSD為0.78%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：吸取2.3項下供試品溶液10μL，分別于0，6，12，18，24，30，36 h時按2.2項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.67%（n=7），表明供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（編號為7號，去氫二異丁香酚含量為0.228%）0.5 g，精密稱定，共12份，置50 mL容量瓶中，分別加入去氫二異丁香酚對照品溶液（質(zhì)量濃度為0.105 6 mg/mL）7.5，15.0 mL，各6份，加甲醇適量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz，溫度為2～10℃）30 min，加甲醇定容，濾過，取續(xù)濾液，即得待測溶液。按2.2項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

2.5 樣品含量測定

取10批樣品（編號為1?10），依法制備供試品溶液，分別吸取上述溶液10μL，按2.2項下色譜條件進樣測定。結(jié)果10批樣品的含量分別為0.16%，0.21%，0.19%，0.40%，0.18%，0.39%，0.23%，0.24%，0.35%，0.36%，平均含量為0.27%。

3 討論

肉豆蔻是種子類藥材，含有大量脂肪類成分，且沸點極低，室溫放置即可析出油脂，檢測時易堵塞液相色譜儀。曾采用正己烷提取油脂，再用甲醇超聲提取的方法處理樣品，后改用直接超聲提取、冰箱冷藏再過濾的方法及低溫超聲提取過濾的方法，測得含量差異不大，故最終選擇低溫超聲提取方法。

本方法操作簡便，結(jié)果準確，靈敏度高，重復(fù)性和穩(wěn)定性均良好，可用于測定面煨肉豆蔻中去氫二異丁香酚的含量。