循環(huán)miR-130a表達(dá)與慢性心力衰竭患者心功能及中醫(yī)證型的相關(guān)性分析*

盧晨君 羅清菊 王建忠

慢性心力衰竭是由于心臟結(jié)構(gòu)和功能改變導(dǎo)致心室充盈或射血分?jǐn)?shù)減少的臨床綜合征[1]。臨床通過心功能分級來判斷患者心臟受損嚴(yán)重程度，根據(jù)自覺活動能力劃分，但心功能分級是一個量化心功能的模糊標(biāo)準(zhǔn)。在中醫(yī)中屬“心悸”“怔忡”“水腫”“喘證”范疇。中醫(yī)認(rèn)為隨著慢性心力衰竭疾病進(jìn)程，患者臨床上表現(xiàn)的癥狀不斷加重，其病機(jī)也在不斷變化，另結(jié)合病機(jī)分為心氣虛型、氣陰兩虛型、氣虛痰瘀型、心腎陽虛型[2]。中醫(yī)病因病機(jī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制在一定程度上是相通的，但準(zhǔn)確分型取決于醫(yī)師經(jīng)驗、水平，對治療方案選取有一定限制。MicroRNAs(miRNAs)是一類非編碼單鏈小RNA，能在轉(zhuǎn)錄后水平對基因表達(dá)發(fā)揮調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)[3]，miRNAs在心血管疾病(例如心力衰竭、心肌梗死、心律不齊、動脈粥樣硬化等)的病理生理學(xué)中發(fā)揮重要作用。心肌梗死病理過程中，miR-130a表達(dá)水平上調(diào)促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡；在胚胎心肌細(xì)胞中，miR-130a表達(dá)上調(diào)可能導(dǎo)致心室肌萎縮和心臟結(jié)構(gòu)不規(guī)則[4]。研究均證實miR-130a水平與心臟疾病密切相關(guān)。因此本研究擬探討miR-130a與慢性心力衰竭患者心功能及中醫(yī)證型的相關(guān)性分析，旨在為心功能分級及中醫(yī)證型劃分提供量化指標(biāo)，為慢性心力衰竭患者的診治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年8月—2020年8月鄭州市中醫(yī)院心內(nèi)科收治的慢性心力衰竭患者184例，年齡40～80歲，平均(56.73±10.58)歲。參照美國心臟協(xié)會心功能(NYHA)分級[5]，將慢性心力衰竭患者分為Ⅰ級、Ⅱ級67例，Ⅲ級60例，Ⅳ級57例。同時參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[6]進(jìn)行辨證分型，將慢性心力衰竭患者分為心氣虛型32例，氣陰兩虛型50例，氣虛痰瘀型61例，心腎陽虛型41例。本研究經(jīng)道德倫理委員會批準(zhǔn)通過，符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合慢性心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②符合中醫(yī)辨證的舌、脈主要癥狀及次要癥狀；③患者近6個月內(nèi)未服用中藥；④臨床資料齊全；⑤患者及其監(jiān)護(hù)人知情，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①惡性腫瘤、嚴(yán)重肝功能異常患者；②具有嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病患者；③急、慢性腎功能不全患者；④3個月內(nèi)有心絞痛病史患者；⑤嚴(yán)重免疫系統(tǒng)紊亂、先天性心臟病患者；⑥肺源性心臟病引起的心衰患者。

1.3 方法

1.3.1 樣品收集所有受試者清晨空腹抽取肘靜脈血4 ml于試管中，室溫靜止15 min，3500 r/min離心15 min，分離上清，超低溫凍存待檢。

1.3.2 qRT-PCR檢測血清中miR-130a表達(dá)水平采用實時熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR，qRT-PCR)檢測血清中miR-130a表達(dá)水平。miR-130a上游引物序列：5’-CCAGCCAAAGTAGGAAGGAG-3’，下游引物序列：5’-CCGGAGTTCCTCAGACA-AGAG-3’，內(nèi)參U6上游引物序列：5’-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3’，下游引物序列：5’-GGAACGCTTCACGAATTTG-3’。采用試劑盒提取血清總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，qRT-PCR程序設(shè)定為94 ℃預(yù)熱3 min，94 ℃ 30 s，56℃ 25 s，72 ℃ 20 s，共38個循環(huán)。反應(yīng)體系20 μl∶5×SYBR Green qPCR Mix 4 μl，cDNA模板(25 ng/μl)2.0 μl，ROX Reference Dye 0.4 μl，上游引物2.0 μl，下游引物2.0 μl，ddH2O 9.6 μl。miR-130a相對表達(dá)量用2-ΔΔCT法計算。

1.4 心功能指標(biāo)檢測采用vivid 7彩色超聲診斷儀檢測所有研究對象左室舒張內(nèi)徑(Left ventricular end diastolic diameter，LVDD)，左室射血分?jǐn)?shù)(Left ventricular ejection fraction，LVEF)。

2 結(jié)果

2.1 不同心功能分級患者血清miR-130a表達(dá)水平比較與Ⅰ級、Ⅱ級相比，心功能Ⅲ級患者miR-130a表達(dá)水平較高(P<0.05)；與Ⅲ級相比，心功能Ⅳ級患者miR-130a表達(dá)水平較高(P<0.05)。見表1。

表1 不同心功能分級患者血清miR-130a表達(dá)水平比較 (例，

2.2 不同心功能分級患者心功能指標(biāo)比較與Ⅰ級、Ⅱ級相比，心功能Ⅲ級患者LVEF值較低(P<0.05)，LVDD值較高(P<0.05)；與Ⅲ級相比，心功能Ⅳ級患者LVEF值較低(P<0.05)，LVDD值較高(P<0.05)。見表2。

表2 不同心功能分級患者心功能指標(biāo)比較 (例，

2.3 血清miR-130a表達(dá)水平與心功能指標(biāo)的相關(guān)性心功能指標(biāo)LVDD值與miR-130a水平呈正相關(guān)(P<0.05)，LVEF值與miR-130a水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 血清miR-130a表達(dá)水平與心功能指標(biāo)的相關(guān)性

2.4 中醫(yī)辨證分型與心功能分級的關(guān)系不同心功能分級患者組間中醫(yī)辨證分型例數(shù)比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=90.931，P<0.05)，在心功能Ⅱ級患者中以心氣虛型、氣陰兩虛型為主，在心功能Ⅲ級患者中以氣虛痰瘀型為主，在心功能Ⅳ級患者中以心腎陽虛型為主。見表4。

表4 中醫(yī)辨證分型與心功能分級的關(guān)系 (例，%)

2.5 慢性心力衰竭患者中醫(yī)辨證分型與血清miR-130a表達(dá)水平的關(guān)系比較與心氣虛型相比，氣陰兩虛型、氣虛痰瘀型、心腎陽虛型患者miR-130a表達(dá)水平較高(P<0.05)；與氣陰兩虛型相比，氣虛痰瘀型、心腎陽虛型患者miR-130a表達(dá)水平較高(P<0.05)；與氣虛痰瘀型相比，心腎陽虛型患者miR-130a表達(dá)水平較高(P<0.05)。見表5。

表5 慢性心力衰竭患者中醫(yī)辨證分型與血清miR-130a表達(dá)水平的關(guān)系比較 (例，

3 討論

慢性心力衰竭是大多數(shù)心臟疾病發(fā)展的終末階段，其發(fā)病率不斷上升，也是目前我國老年人住院和死亡的主要原因[8]。慢性心力衰竭是由多種原因(炎癥、心肌梗死等)引起的心肌損傷，從而引起心臟結(jié)構(gòu)變化及功能喪失，與中醫(yī)認(rèn)為慢性心力衰竭形成心氣虛衰、積累成損的過程基本一致[9]。中醫(yī)認(rèn)為慢性心力衰竭本虛標(biāo)實，本虛為氣虛、氣陰兩虛、陽虛；標(biāo)實多見血瘀，兼有痰、飲等，具體證型本虛與標(biāo)實相互結(jié)合。因虛證遷延日久，虛實夾雜，相互為病，導(dǎo)致病情不斷進(jìn)展。

研究報道m(xù)icroRNAS在心血管疾病發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[10，11]。其亦可通過調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞，從而參與心血管疾病的發(fā)病過程[12]。miR-130a位于染色體11q12.1上，具有組織特異性。Osbourne等[13]研究發(fā)現(xiàn)miR-130a在成年小鼠心臟中過度表達(dá)，6周開始出現(xiàn)持續(xù)性室性心律失?，F(xiàn)象。臨床顯示，動脈粥樣硬化心血管疾病患者的主動脈粥樣硬化斑塊中miR-130a呈高表達(dá)[14]，且病情較重者血漿水平更高[15]。本研究發(fā)現(xiàn)慢性心力衰竭患者血清中miR-130a表達(dá)水平在心功能Ⅰ級、Ⅱ級，Ⅲ級，Ⅳ級患者中依次顯著升高，且Pearson分析發(fā)現(xiàn)，miR-130a表達(dá)水平與心功能指標(biāo)LVDD值呈正相關(guān)，與LVEF值呈負(fù)相關(guān)，提示miR-130a可能參與慢性心力衰竭疾病進(jìn)程。

在慢性心力衰竭臨床心衰階段，病因為心肌細(xì)胞基本表達(dá)異常導(dǎo)致心肌結(jié)構(gòu)和功能變化，加重疾病程度；難治性終末期心衰階段則因患者病情惡化，心肌細(xì)胞調(diào)亡加劇[16]。此外，在心衰初期以心肺氣虛證及氣陰兩虛證較為常見，隨著病情進(jìn)展，氣虛導(dǎo)致心陽虛，久病可表現(xiàn)為陽虛等，在此過程中，陽氣虧虛、血瘀飲停是慢性心力衰竭疾病的終末期，主要為腎虧。劉玥等[17]研究顯示心功能Ⅱ級患者多見心氣虛型、氣陰兩虛型，心功能Ⅲ級患者多見氣虛痰瘀型，心功能Ⅳ級患者多見心腎陽虛型。本研究發(fā)現(xiàn)在心功能Ⅱ級患者中以心氣虛型、氣陰兩虛型為主，Ⅲ級患者中以氣虛痰瘀型為主，Ⅳ級患者中以心腎陽虛型為主，心氣虛型、氣陰兩虛型、氣虛痰瘀型、心腎陽虛型患者病情與心功能分級由低到高趨勢一致，提示4種分型可能在一定程度上可反應(yīng)慢性心力衰竭嚴(yán)重程度。且miR-130a表達(dá)水平在心氣虛型、氣陰兩虛型、氣虛痰瘀型、心腎陽虛型4種分型中水平依次顯著升高，提示miR-130a可能作為慢性心力衰竭不同中醫(yī)證型的分型依據(jù)，為中醫(yī)辨證分型提供客觀依據(jù)。

綜上所述，慢性心力衰竭患者血清miR-130a表達(dá)水平呈上調(diào)。miR-130a在不同中醫(yī)證型慢性心力衰竭中表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義，臨床進(jìn)行血清miR-130a檢測可能有利于慢性心力衰竭中醫(yī)分型。但后期將擴(kuò)大樣本數(shù)量及研究范圍、延長研究時間，彌補(bǔ)此次研究不足，多角度研究慢性心力衰竭中醫(yī)證型。