葫蘆藥材質量標準研究

●侯文欣 魏紅立 徐利亞 孟憲磊 呂勤芝（邢臺市食品藥品檢驗所 河北 邢臺 054000）

葫蘆為葫蘆科植物瓢葫蘆Lagenaria Siceraria（Molina）Standl.var.depressa（Ser.）Hara，藥用部分是干燥果皮[1]，具有利水、通淋、消腫的功效，用于面目浮腫、大腹水腫等癥，常與豬苓、茯苓、澤瀉等藥同用[2-4]。2013年，河北省食品藥品監(jiān)督管理局修訂2003 年版《河北省中藥飲片炮制規(guī)范》，將葫蘆列為新增補藥材品種。

葫蘆含有莽草酸，測定其含量，并按照《中國藥典》（2020年版）四部通則方法測定水分、總灰分，以期為有效控制該藥材質量提供依據。

1 材料

1.1 儀器

高效液相系統（Waters e2695，美國waters公司），電子天平（METTLER TOLEDO MS205DU，瑞士梅特勒－托利多集團），超聲儀（KQ-600DE，昆山市超聲儀器有限公司），顯微鏡（BX53 OLYMPUS），電熱恒溫干燥箱（202-1，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司），箱式電阻爐（SX-4-10，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司），色譜柱（Agilent ZORBAX SB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm）。

1.2 供試材料及試劑

莽草酸（批號：130067-201508，上海奈啟生物科技有限公司），葫蘆對照藥材（201509，上海奈啟生物科技有限公司），甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。共收集了10批葫蘆樣品，經河北省藥品檢驗研究院鑒定均為葫蘆。具體信息，見表1。

2 方法

2.1 性狀

檢查10組樣本，并參考《中國藥典》（1977年版）、《山東省中藥材標準》（2002年版）等材料的描繪作出敘述[1，4]。

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 樣品溶液的制備取樣品粉末2.5 g，加乙醇20 mL，超聲處理15 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對照藥材溶液的制備取葫蘆對照藥材2 g， 同法制成對照藥材溶液。

2.2.3 薄層色譜方法按照《中國藥典》（2020年版）薄層色譜法（通則0502）實驗。吸取上述2種溶液各5μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.3 水分和總灰分測定

2.3.1 水分本研究增加了葫蘆水分檢查，按《中國藥典》（2020年版）四部通則0832第二法進行測定。

2.3.2 總灰分為了控制可能帶入的泥沙等雜質，確保藥材質量，本研究增加了灰分檢查，按《中國藥典》（2020年版）四部通則2302進行測定。

2.4 莽草酸含量測定

莽草酸是自然界中存在的一種重要的有機酸，具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。莽草酸為治療禽流感特效藥物“達菲”的重要原料，也是一些抗病毒和抗癌藥物的中間體。有報道稱葫蘆含有莽草酸、葫蘆素B，但經試驗未從葫蘆中提取出葫蘆素B，所以選擇測定莽草酸[5-13]。

2.4.1 色譜條件及系統適應性試驗色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-1%磷酸溶液（3∶97）；檢測波長：210 nm；柱溫30℃，理論板數按莽草酸峰計不得少于3000。

2.4.2 對照品溶液的制備精密稱取莽草酸對照品（批號：130067—201508，上海奈啟生物科技有限公司）9.78 mg，置100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為儲備液。再精密吸取5 mL置于10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，制成1 mL含48.9 μg莽草酸的對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備取樣品粉末（過三號篩）約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水100 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率600 W，頻率40 kHz）60 min，放冷再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液50 mL，蒸至近干，轉移至5 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻即得。

2.4.4 專屬性考察分別取對照品溶液和供試品溶液各10 μL在“2.4.1”項色譜條件 下進樣測定，記錄色譜圖，結果見圖1。進行了峰純度測試，結果見圖2。結果顯示，樣品色譜峰的保留時間與對照品一致，分離度＞1.5，而且達到基線分離，表明該方法專屬性良好。

圖1 莽草酸對照品（A）和樣品（B）HPLC色譜圖

圖2 莽草酸對照品（C）和樣品（D）峰純度圖

2.4.5 線性關系考察精密吸取“2.4.2”項對照品溶液1，2，5，10，15，20 μL，分別按上述色譜條件進行測定，記錄峰面積。在“2.4.1”項色譜條件下進樣測定。以色譜峰峰面積Y為縱坐標，以對照品濃度X（μg）為橫坐標，進行線性回歸，得線性方程：Y=2.995×106X-1.038×105，R2=0.999 99，在0.0489～0.9780 μg范圍內線性關系良好。

2.4.6 精密度試驗精密吸取“2.4.2”項對照品溶液10 μL，在“2.4.1”色譜條件下連續(xù)進樣6次，莽草酸色譜峰面積的RSD值為0.21%。表明用該方法測定莽草酸精密度良好。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗取藥材粉末（1號）約1.0 g，精密稱定，按“2.4.3”項所述方法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h在“2.4.1”色譜條件下進樣，計算出莽草酸色譜峰面積的RSD為0.1%。表明樣品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.4.8 重復性試驗稱取葫蘆藥材粉末（1號）6份，各約1 g，精密稱定，按“2.4.3”項所述方法制備供試品溶液，在“2.4.1”色譜條件下進樣測定，結果莽草酸含量RSD為0.58%。表明本方法重復性良好，適用于葫蘆中莽草酸的提取及含量的測定。

2.4.9 加樣回收試驗取已知含莽草酸為0.053% 的樣品粉末6份，各約0.5 g，精密稱定。精密稱取莽草酸對照品9.78 mg置于100 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，作為標加溶液，分別精密吸取2 mL此溶液置上述6個錐形瓶中。按“2.4.3”項所述方法制備供試品溶液，進行測定，計算回收率，見表2。

表2 莽草酸回收率

3 結果

3.1 性狀

本品呈瓢狀，多碎成不規(guī)則的塊狀，厚0.5～1.5 cm。外表面黃棕色，較光滑；內表面黃白色或灰黃色，松軟。體輕，質硬，斷面黃白色。氣微，味淡[1，4]。結果10組樣品性狀均合格。

3.2 薄層色譜

按照薄層色譜條件試驗，10批樣品薄層色譜圖，見圖3。

圖 3 10批樣品薄層色譜圖

3.3 水分和總灰分測定

水分和總灰分測定結果，見表3。

表3 葫蘆水分、總灰分測定結果 單位：%

3.4 樣品莽草酸含量測定

取各批樣品粉末 0.2 g，按“2.4.3”項所述方法制備供試品溶液，每個樣品平行做2份，并按“2.4.1”色譜條件進行測定，以干燥品計算各供試品中莽草酸的含量，結果見表4。

表4 莽草酸含量測定結果

4 結論與討論

通過采用薄層色譜法對葫蘆飲片進行定性分析，根據藥典方法測定葫蘆中水分、灰分含量，采用HPLC法測定莽草酸含量。結果表明，葫蘆飲片薄層色譜斑點清晰明顯，10批葫蘆樣品的水分含量為7.2%～9.4%，總灰分含量為3.8%～10.0%,莽草酸含量為0.002%～0.043%。

依據上述試驗結果， 建議增加水分、總灰分檢查項、薄層色譜鑒別、含量測定項，評價葫蘆飲片的質量標準；增加水分不得超過 12.0%，總灰分不得超過12.0%，按干燥品計算含莽草酸不得少于0.010%這三項檢測指標，以期為葫蘆藥材質量標準的制定及資源的開發(fā)利用提供依據。