初生麋鹿小腸的組織學(xué)研究※

●郭青云 單云芳 鐘震宇 程志斌 李俊芳 孟玉萍 白加德

（北京麋鹿生態(tài)實(shí)驗(yàn)中心 北京 100076）

麋鹿（Elaphurus davidianus）是我國一級保護(hù)動物，在我國滅絕、重引入后，經(jīng)過30多年的繁育保護(hù)，其種群數(shù)量明顯增長。在麋鹿保護(hù)區(qū)及其遷地保護(hù)場所，如北京南海子麋鹿苑、湖北石首國家級麋鹿保護(hù)區(qū)、河北灤河上游自然保護(hù)區(qū)、河南野生動物救助中心、北京動物園、石家莊動物園等均出現(xiàn)或暴發(fā)過麋鹿出血性腸炎[1-2]，嚴(yán)重影響麋鹿種群健康發(fā)展。完整的腸道結(jié)構(gòu)是阻止腸腔內(nèi)有害物質(zhì)及病原微生物進(jìn)入體內(nèi)其他組織器官和血液循環(huán)的基礎(chǔ)。盡管已有麋鹿腸道組織結(jié)構(gòu)的報(bào)道[3-5]，但尚未見健康初生麋鹿腸道的組織學(xué)結(jié)構(gòu)研究。開展對健康初生麋鹿腸道組織結(jié)構(gòu)的研究，以期為麋鹿消化道疾病研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物及材料采集

北京麋鹿生態(tài)實(shí)驗(yàn)中心因棄仔和難產(chǎn)死亡的初生麋鹿各1只，取其十二指腸、空腸和回腸，分別浸入甲醛固定，制作5 μm厚的切片，用于組織形態(tài)觀察。

1.2 H.E.染色

十二指腸、空腸和回腸各取5張不連續(xù)切片，經(jīng)脫蠟、梯度酒精脫水至蒸餾水后，蘇木精染色10～15 min，1%鹽酸-酒精分色（鏡下觀察可見單獨(dú)細(xì)胞核），自來水藍(lán)化20～30 min，入梯度酒精至95%酒精后，伊紅染色液染色10～20 s，繼續(xù)95%、100%酒精水合，二甲苯透明后封片。每張切片選6個視野，拍照，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，同時應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)測量小腸各段的絨毛高度（Villus height）、隱窩深度（Crypt depth），并計(jì)算絨毛高度/隱窩深度（V/C）比值。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，用SPSS 22軟件進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

顯微鏡下可見初生麋鹿的小腸腸壁分為黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜層（圖1）。麋鹿小腸的黏膜層分為黏膜上皮、固有層和黏膜肌層，其中黏膜上皮和固有層向腸腔內(nèi)突起形成腸絨毛，上皮下陷至固有層形成腸隱窩（又稱小腸腺）。

初生麋鹿十二指腸絨毛呈細(xì)長的葉狀，較空腸絨毛粗短，分布較為稀疏（圖1—A，圖2—A）。腸絨毛的單層柱狀細(xì)胞的細(xì)胞核多呈橢圓形或圓形，緊密排列在腸絨毛上皮細(xì)胞的基底部，上皮細(xì)胞間有少量高腳杯狀的杯狀細(xì)胞和散在分布的腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞（圖2—A）。鏡下可見少量黏膜和部分黏膜下層向腸腔內(nèi)隆起形成環(huán)形皺襞（圖1—A）。腸絨毛中間的固有層內(nèi)有一條中央乳糜管（圖2—A）。黏膜固有層分布大量上皮下陷形成的 腸隱窩（圖2—B）。

圖1 初生麋鹿十二指腸（A）、空腸（B）和回腸（C）的組織結(jié)構(gòu)

圖2 初生麋鹿十二指腸絨毛（A）和腸隱窩（B）

初生麋鹿空腸絨毛呈指狀，細(xì)長而排列緊密（圖1—B，圖3），較十二指腸和回腸長。空腸絨毛上的細(xì)胞類型及形態(tài)都與十二指腸絨毛相似。鏡下未發(fā)現(xiàn)明顯的環(huán)形皺襞。腸絨毛中間的固有層內(nèi)有一條中央乳糜管。黏膜固有層有大量腸隱窩（圖3）。

圖3 初生麋鹿空腸的部分黏膜層和黏膜下層

初生麋鹿回腸絨毛較空腸絨毛短而稀疏，與空腸一樣，腸腔內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯的環(huán)形皺襞（圖1-C），可能與取材部位或者發(fā)育年齡有關(guān)?；啬c絨毛頂部的柱狀細(xì)胞頂端有大量空泡狀結(jié)構(gòu)，核位于細(xì)胞基底部，絨毛中部向下，柱狀細(xì)胞胞質(zhì)中空泡結(jié)構(gòu)逐漸減少（圖4—A）。腸絨毛上杯狀細(xì)胞數(shù)量多于十二指腸和空腸。腸絨毛中間的固有層較厚，有一條中央乳糜管（圖4—A）。黏膜固有層有腸隱窩，黏膜下層有淋巴集結(jié)，呈圓形或橢圓形（圖4—B）。

統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，初生麋鹿空腸的絨毛高度顯著大于十二指腸（P＜0.05）和回腸（P＜0.05），十二指腸和回腸的絨毛高度差異不顯著（P＞0.05，圖5—A）。而從十二指腸到回腸，隱窩深度差異不顯著（P＞0.05，圖5—B）。麋鹿十二指腸、空腸和回腸的V/C比值與絨毛高度趨勢相似，均呈倒“V”形，空腸的V/C比值顯著高于十二指腸（P＜0.05）和回腸（P＜0.05），后兩者差異不顯著（P＞0.05，圖5—C）。

圖5 健康麋鹿小腸的絨毛高度（A）、隱窩深度（B）和V/C比值（C）

3 結(jié)論與討論

麋鹿自重引入以來，其種群發(fā)展受到腸道疾病的困擾，因此，研究健康初生麋鹿腸道的組織結(jié)構(gòu)對今后深入開展麋鹿消化道疾病研究具有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)麋鹿小腸的腸壁結(jié)構(gòu)與雞、豬、牛、羊、羊駝等動物相同[6-9]，由內(nèi)向外依次為黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜層。完整的小腸組織結(jié)構(gòu)是小腸發(fā)揮消化、吸收和局部免疫功能的生理基礎(chǔ)，對防止腸道細(xì)菌移位、識別病原微生物都起著重要作用。初生麋鹿小腸的黏膜層分為黏膜上皮、固有層和黏膜肌層，黏膜上皮和固有層向腸腔內(nèi)突起形成腸絨毛，上皮下陷至固有層形成腸隱窩。腸絨毛可使黏膜表面積增加，利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用，與麋鹿生長發(fā)育密切相關(guān)。從十二指腸到空腸，腸絨毛主要由單層柱狀上皮細(xì)胞構(gòu)成，其間夾雜著少量杯狀細(xì)胞和腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞，且杯狀細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。杯狀細(xì)胞分泌的黏蛋白形成的凝膠型網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)黏液層，在腸道內(nèi)容物和腸上皮細(xì)胞間起潤滑和物理屏障作用[10]。初生麋鹿的腸上皮淋巴細(xì)胞主要位于小腸上皮基底部和固有層中，與腸上皮細(xì)胞、杯狀細(xì)胞和肥大細(xì)胞共同組成腸道黏膜免疫系統(tǒng)，是機(jī)體抵御腸道病原微生物入侵的第一道防線，因此，麋鹿小腸結(jié)構(gòu)的完整與機(jī)體健康息息相關(guān)。

初生麋鹿空腸的絨毛高度和V/C比值顯著高于十二指腸和回腸（P＜0.05），而從十二指腸到回腸，隱窩深度差異不顯著（P＞0.05）。這一指標(biāo)變化與相同日齡黃牛相似，與牦牛略有不同[8]。初生牦?？漳c絨毛高度和V/C比值顯著高于十二指腸，但空腸和回腸的隱窩深度顯著大于十二指腸[8]，這些結(jié)果差異可能與物種、飼養(yǎng)環(huán)境等有關(guān)。已知腸道絨毛高度、隱窩深度和V/C比值受年齡、斷奶、飼料、疾病等因素的影響。1歲麋鹿十二指腸和空腸的絨毛高度和隱窩深度明顯高于回腸，V/C比值在不同腸段間差異不顯著[5]，而出血性腸炎麋鹿的腸黏膜脫落嚴(yán)重，絨毛高度顯著降低（未發(fā)表）。