分散固相萃取-高效液相色譜法測定水產(chǎn)品中7種麻醉劑

石 芳, 壽 旦, 金米聰, 王宏偉, 陳旭光, 朱 巖,6

(1. 浙江大學(xué)化學(xué)系, 浙江 杭州 310028; 2. 浙江省中醫(yī)藥研究院中藥研究中心, 浙江 杭州 310007; 3. 寧波市疾病預(yù)防控制中心, 浙江 寧波 315010; 4. 浙江省立同德醫(yī)院, 浙江 杭州 310012; 5. 浙江省冶金研究院有限公司, 浙江 杭州 310007; 6. 浙江省微量有毒化學(xué)物 健康風(fēng)險評估技術(shù)研究重點實驗室, 浙江 杭州 310028)

隨著生活水平的提高,消費者對于水產(chǎn)品的質(zhì)量和鮮活程度提出了更高的要求。麻醉劑是一種能在不同程度上抑制動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的藥物[1]。如今麻醉劑已經(jīng)廣泛用于魚類的育種、手術(shù)等漁業(yè)生產(chǎn)過程和鮮活水產(chǎn)品運輸?shù)阮I(lǐng)域。在水產(chǎn)品運輸過程中,麻醉劑的使用可以保持水產(chǎn)品的鮮活度,降低水產(chǎn)品的新陳代謝,從而減少因缺氧和皮膚損傷等造成的死亡,提高存活率[2,3]。

MS-222和丁香酚類麻醉劑是目前常用的漁用麻醉劑。MS-222又稱三卡因,是美國、歐盟、加拿大允許使用的水產(chǎn)品麻醉劑,美國限定休藥期為21天,最大殘留限量(maximum residue limit, MRL)為1 mg/L;加拿大限定休藥期為5天[4]。丁香酚是日本允許使用的魚類麻醉劑,限定MRL值為0.05 mg/kg[1];異丁香酚則在澳大利亞、新西蘭等國家批準(zhǔn)使用[5],但我國并沒有出臺相關(guān)法規(guī)規(guī)范其使用和殘留限量。雖然這些麻醉劑是安全的,但是也有報道提出一些麻醉劑具有致敏性和致癌性[6],且美國國家毒理學(xué)計劃(NTP)發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示,丁香酚類化合物對于嚙齒動物是致癌物或者潛在致癌物,因此對水產(chǎn)品中麻醉劑殘留的檢測對于水產(chǎn)品的流通和質(zhì)量管控等方面具有重要意義。

目前,用于水產(chǎn)品中麻醉劑的檢測方法主要有高效液相色譜法(HPLC)[7-9]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC/MS)[10,11]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC/MS)[12,13]等。樣品前處理是分析方法中的重要組成部分,由于水產(chǎn)品基質(zhì)復(fù)雜,含有蛋白質(zhì)、脂肪、磷脂等多種干擾物質(zhì),且水產(chǎn)品中麻醉劑殘留的水平很低,因此需要通過適當(dāng)?shù)那疤幚矸椒ㄌ岣邫z測的靈敏度。已經(jīng)報道的相關(guān)前處理方法有固相萃取法(SPE)[14,15]、固相微萃取法(SPME)[13,16]、QuEChERS法[17,18]等。

分散固相萃取是在傳統(tǒng)的固相萃取的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的一種前處理技術(shù),通過將吸附劑分散于樣品溶液達到富集和凈化的效果,適用于液體樣品和固體樣品的液態(tài)提取物。固相萃取雖然具有重現(xiàn)性好、可實現(xiàn)自動化操作等優(yōu)點,但是步驟復(fù)雜、成本較高[19]。分散固相萃取法則具有操作簡單、有機溶劑使用量少、成本低、凈化效率高等優(yōu)點[20,21],已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種復(fù)雜樣品基質(zhì)中目標(biāo)物的檢測,如環(huán)境水樣[22-24]、動物肌肉樣品[20,25]、水果和果汁[26]、保健品片劑[27]等。本實驗選取了常用的7種氨基苯甲酸酯類和丁香酚類麻醉劑作為分析物,采用1.0%甲酸乙腈為提取溶劑,苯乙烯-甲基丙烯酸縮水甘油酯聚合物微球(PS-GMA)、N-丙基乙二胺(PSA)和C18混合吸附劑為凈化劑,結(jié)合高效液相色譜建立了水產(chǎn)品中普魯卡因(procaine)、丁氧卡因(oxybuprocaine)、三卡因(tricaine)、丁香酚(eugenol)、異丁香酚(isoeugenol)、甲基丁香酚(methyl eugenol)、甲基異丁香酚(methyl isoeugenol)的檢測方法。此方法操作簡單、靈敏度與準(zhǔn)確度高,可以為水產(chǎn)品中7種麻醉劑殘留的檢測提供參考。

1 實驗部分

1.1 實驗儀器與試劑

超高效液相色譜儀(Ultimate 3000,美國賽默飛公司),帶有紫外檢測器;KQ-500DE超聲波清洗機(300 W,昆山市超聲儀器有限公司); DCY-12S氮吹儀(紹興市蘇珀儀器有限公司); SU-70場發(fā)射掃描電鏡(日本Hitachi公司); ASAP 2460比表面與孔隙度分析儀(美國Micromeritics公司)。

普魯卡因鹽酸鹽、丁氧卡因鹽酸鹽、三卡因甲磺酸鹽、丁香酚、甲基丁香酚、甲基異丁香酚、色譜純的甲酸、乙酸銨均購自上海麥克林生化科技有限公司;異丁香酚、十二烷基硫酸鈉(SDS)、苯乙烯(ST)、二乙烯基苯(DVB)、偶氮二異丁腈(AIBN)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA)、過氧化苯甲酰(BPO)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、甲苯購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;苯乙烯、二乙烯基苯、偶氮二異丁腈、甲基丙烯酸縮水甘油酯、過氧化苯甲酰經(jīng)純化后使用;N-丙基乙二胺(PSA, 40～60 μm)、C18(40～60 μm)購買于上海安譜實驗科技股份有限公司;苯乙烯-二乙烯基苯聚合物(PS-DVB,約5 μm)依照實驗室已有技術(shù)制備而成[28]。色譜純的甲醇、乙腈購自美國Tedia公司;分析純的乙酸乙酯、無水乙醇購自國藥集團上?；瘜W(xué)試劑有限公司;所用超純水均來自于Thermo Fisher Scientific超純水系統(tǒng)。魚和對蝦樣品購買于杭州本地超市。

1.2 實驗方法

1.2.1PS-GMA的合成

苯乙烯-甲基丙烯酸縮水甘油酯聚合物(PS-GMA)微球由實驗室基于已有的成熟技術(shù)(兩步溶脹法)[29]制備而成。合成步驟如下:將3 g聚乙烯吡咯烷酮和100 mL 95%乙醇加入三頸燒瓶并水浴加熱至70 ℃。在N2保護下,在30 min內(nèi)向其中逐滴加入0.8 g偶氮二異丁腈和18 g苯乙烯,250 r/min機械攪拌的條件下反應(yīng)24 h。反應(yīng)結(jié)束后用砂芯漏斗抽濾,并用去離子水洗滌干凈。制備好的小球保存在10 g/L十二烷基硫酸鈉水溶液中。將4.0 mL聚苯乙烯種子和20 mL 2 g/L十二烷基硫酸鈉加入三頸燒瓶中,隨后加入4.0 mL鄰苯二甲酸二丁酯和30 mL 2 g/L十二烷基硫酸鈉水溶液的混合乳化液,并在120 r/min機械攪拌的條件下反應(yīng)24 h。向250 mL 10 g/L聚乙烯醇水溶液加入5 g甲基丙烯酸縮水甘油酯、10 g二乙烯基苯、14 g甲苯、0.2 g過氧化苯甲酰和0.8 g十二烷基硫酸鈉,經(jīng)過超聲粉碎后加入三頸燒瓶對種子進行溶脹,反應(yīng)24 h后通N230 min,將水浴溫度升高至70 ℃繼續(xù)反應(yīng)24 h。得到的小球抽濾后用熱的去離子水和無水乙醇洗滌,隨后以甲苯作為提取劑進行索氏提取48 h,產(chǎn)物用去離子水和無水乙醇洗滌至無甲苯味道,60 ℃真空干燥24 h,放于陰涼干燥處備用。

1.2.2溶液的配制

準(zhǔn)確稱量普魯卡因、丁氧卡因、三卡因、丁香酚、甲基丁香酚、異丁香酚、甲基異丁香酚標(biāo)樣,用甲醇/水(50∶50, v/v)配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,于-20 ℃冰箱中密封避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3水產(chǎn)品前處理方法

魚和對蝦經(jīng)清洗后吸干表面水分,魚去鱗去皮,蝦去頭去殼,取魚肉和蝦肉分別于混合器研磨后置于-20 ℃冰箱中冷藏,實驗前室溫解凍備用。取2.0 g待測樣品加入15 mL離心管中,加入10.0 mL 1.0%甲酸乙腈溶液,超聲提取10 min, 8 000 r/min下離心6 min,取上清液于另一15.0 mL離心管中,加入20 mg PS-GMA、50 mg PSA、10 mg C18,振蕩2 min, 10 000 r/min下離心6 min,取上清液加入100 μL二甲基亞砜(DMSO), 40 ℃下氮吹至近干,用去離子水定容至1.0 mL,過0.22 μm尼龍濾膜后進液相色譜分析。樣品前處理大致流程如圖1所示。

圖 1 樣品前處理流程示意圖Fig. 1 Schematic diagram of the sample pre-treatment

圖 2 PS-GMA微球的SEM圖Fig. 2 SEM images of poly(styrene-glycidylmethacrylate) (PS-GMA) microsphere a. microsphere diameter; b. dispersity.

1.2.4色譜條件

色譜柱:Welch welchrom C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm);柱溫:30 ℃;進樣體積:20 μL。流動相A:甲醇;B: 0.05%甲酸-5 mmol/L乙酸銨水溶液;流速:1.0 mL/min。梯度洗脫程序為:0～11 min, 20%A～80%A; 11～15 min, 80%A; 15～16 min, 80%A～20%A; 16～18 min, 20%A。檢測波長:235、260和290 nm。

1.2.5方法學(xué)驗證

通過線性、檢出限、定量限、精密度、準(zhǔn)確度對該分析方法進行評估?；|(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線用于目標(biāo)化合物定量分析;以信噪比的3倍和10倍計算檢出限與定量限;相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation, RSD)用于評價日內(nèi)與日間精密度,低、中、高3個水平(0.2、0.5、1.0 mg/kg)的加標(biāo)樣品用于評價方法的回收率。5個不同批次合成的PS-GMA用于評價方法的可重復(fù)性。

2 結(jié)果與討論

2.1 PS-GMA的表征

采用掃描電鏡對合成的PS-GMA微球進行表征,結(jié)果見圖2。觀察發(fā)現(xiàn),合成的PS-GMA微球具有較好的球形,微球粒徑約為13 μm,且具有良好的分散性。采用氮氣吸附脫附法對PS-GMA微球的表面和孔的性質(zhì)進行表征。根據(jù)Brunauer-Emmett-Teller (BET)等溫線方程計算該微球的比表面積為333 m2/g,孔體積為0.36 cm3/g,平均孔徑為4.35 nm。表征結(jié)果表明,合成的PS-GMA微球具有充足的空腔和比表面積,且分散性好,適合用于分散固相萃取吸附雜質(zhì)以達到凈化樣品基質(zhì)的目的。

圖 3 (a)提取溶劑種類和(b)乙腈中甲酸的體積分?jǐn)?shù)對 目標(biāo)物回收率的影響(n=3)Fig. 3 Effects of (a) the extraction solvent and (b) the volume percentage of formic acid (FA) in acetonitrile on the recoveries of the targets (n=3)

2.2 樣品前處理條件的優(yōu)化

2.2.1提取溶劑的優(yōu)化

樣品的提取是復(fù)雜基質(zhì)檢測的重要步驟,提取溶劑的選擇對提取效率有著重要的影響。本實驗探究了乙腈、甲醇、乙醇、乙酸乙酯作為提取溶劑的提取效率,實驗結(jié)果(見圖3a)表明,4種提取溶劑對丁香酚類物質(zhì)提取效果較好,但是對普魯卡因、丁氧卡因、三卡因的提取效果較差。相比之下,乙腈的提取效果優(yōu)于其他3種,由于乙腈對于魚和對蝦中的蛋白質(zhì)具有一定的沉淀效果且能夠減少脂肪的提取,因此選擇乙腈進行后續(xù)實驗。氨基苯甲酸酯類麻醉劑均為伯胺類化合物,向乙腈中添加甲酸有助于氨基的質(zhì)子化,提高提取效率。對乙腈中甲酸的體積分?jǐn)?shù)(0.1%、0.5%、1.0%、2.0%)進行了優(yōu)化,結(jié)果如圖3b所示。隨著乙腈中甲酸添加量的增加,普魯卡因、丁氧卡因、三卡因的回收率顯著提升;當(dāng)甲酸的體積分?jǐn)?shù)達到1.0%時,各物質(zhì)的回收率為80.3%～92.1%;繼續(xù)增大甲酸濃度,回收率無明顯提高。最后選擇1.0%甲酸乙腈作為提取溶劑。

2.2.2超聲提取時間的優(yōu)化

超聲有助于目標(biāo)物更好地進行相轉(zhuǎn)移,縮短提取時間,超聲時間長短決定了目標(biāo)物與提取溶劑的接觸時間。本實驗在0～20 min的范圍內(nèi)對超聲時間進行優(yōu)化,結(jié)果見圖4。超聲時間從0延長到10 min,各物質(zhì)的回收率逐漸增加至80.0%～90.6%;但進一步延長超聲時間,各物質(zhì)回收率增長并不明顯。綜合以上實驗結(jié)果,為節(jié)省時間和保證各物質(zhì)的提取效率,選擇10 min作為超聲提取時間。

圖 4 超聲提取時間對目標(biāo)物回收率的影響(n=3)Fig. 4 Effect of the ultrasonic extraction time on the recoveries of the targets (n=3)

2.2.3凈化劑的優(yōu)化

由于魚肉和對蝦樣品基質(zhì)復(fù)雜,共萃取物含有脂肪、蛋白質(zhì)、色素等多種雜質(zhì),因此需要對樣品基質(zhì)進行凈化。吸附劑的選擇和使用量會影響分析的靈敏度和目標(biāo)物的回收率。漁用麻醉劑種類和不同水產(chǎn)品基質(zhì)均具有多樣性,因此我們選擇多種凈化劑協(xié)同作用,以優(yōu)化凈化效果和凈化流程,用于水產(chǎn)品中不同種類麻醉劑的檢測。PSA作為一種弱的離子交換劑,可用于除去基質(zhì)中的極性有機酸、脂肪酸、糖類等物質(zhì);C18可用于除去基質(zhì)中的非極性化合物,如脂類等;PS-GMA這類聚合物微球具有大量苯環(huán)、大的比表面積,能夠通過π-π作用和疏水作用去除基質(zhì)中的脂肪、色素和非極性化合物。本實驗對比了PS-DVB和PS-GMA兩種聚合物微球的萃取效果,由圖5a可知并無明顯差別。鑒于PS-GMA表面存在環(huán)氧基,可通過開環(huán)反應(yīng)對其進行修飾,方便在后續(xù)實驗中進一步修飾、優(yōu)化,所以本實驗選用PS-GMA。保持50 mg PSA和10 mg C18不變,對PS-GMA的用量(0～40 mg)進行了考察。結(jié)果如圖5b所示,當(dāng)PS-GMA的用量增加到40 mg,各目標(biāo)物的回收率有所降低,丁香酚類物質(zhì)降低至64.7%～81.1%。這是由于吸附劑過量使用會造成對目標(biāo)物的吸附,從而降低回收率。當(dāng)PS-GMA的用量為20 mg時,各物質(zhì)的回收率介于80.6%和96.6%之間。綜合考慮凈化效果和目標(biāo)物回收率,最終PS-GMA的用量固定為20 mg。

圖 5 (a)吸附劑種類和(b)PS-GMA用量對目標(biāo)物 回收率的影響(n=3)Fig. 5 Effects of (a) the adsorbent type and (b) the amount of PS-GMA on the recoveries of the targets (n=3) PS-DVB: polystyrene-divinylbenzene.

2.2.4DMSO用量的優(yōu)化

樣品經(jīng)乙腈提取后,提取液體積大,且提取液與流動相存在較大差距,為避免溶劑效應(yīng)的出現(xiàn),樣品氮吹濃縮后以去離子水定容。實驗發(fā)現(xiàn),提取后的加標(biāo)樣品直接在40 ℃氮吹后,普魯卡因、丁氧卡因、三卡因3種物質(zhì)的損失較小,而4種丁香酚類物質(zhì)損失較大,回收率介于38.1%～52.2%之間。考慮到DMSO與水、乙腈等溶劑具有良好的相容性,本身沸點較高且對多種化合物具有良好的溶解性,嘗試在氮吹前向提取液中加入少量DMSO,以減少丁香酚類化合物在氮吹過程中隨溶劑蒸發(fā)造成的損失,提高回收率。本實驗對DMSO的添加量進行了優(yōu)化,結(jié)果見圖6。隨著DMSO加入量的增加(0～100 μL), 4種丁香酚類化合物的回收率明顯提高;當(dāng)DMSO添加量超過100 μL后,回收率無明顯變化,因此選擇添加100 μL DMSO再進行后續(xù)實驗。

圖 6 氮吹濃縮過程中DMSO添加量對目標(biāo)物 回收率的影響(n=3)Fig. 6 Effect of the dosage of dimethyl sulfoxide (DMSO) used in nitrogen condensation step on the recoveries of the targets (n=3)

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

實際樣品基質(zhì)復(fù)雜,而基質(zhì)效應(yīng)(ME)的存在可能會增強或者減弱目標(biāo)物的響應(yīng)信號,從而影響目標(biāo)物的定性與定量,因此研究了本實驗方法的基質(zhì)效應(yīng)。基質(zhì)效應(yīng)通過實際樣品提取液為樣品基質(zhì)和以去離子水為樣品基質(zhì)所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率之比進行衡量:

ME=(Km/Ks-1)×100%

其中Km和Ks分別指的是以魚肉(或?qū)ξr)空白樣品提取液為基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和以去離子水為基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。實驗結(jié)果見表1,經(jīng)過分散固相萃取凈化后,魚肉的基質(zhì)效應(yīng)介于-11.32%和0.23%之間,對蝦的基質(zhì)效應(yīng)介于-9.32%到-0.70%之間,表明兩種基質(zhì)對于大部分目標(biāo)物存在抑制情況。為保證實驗的準(zhǔn)確性,本實驗通過基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線進行定量分析。

圖 7 空白加標(biāo)樣品和7種麻醉劑混合標(biāo)樣的液相色譜圖Fig. 7 Liquid chromatograms of the blank spiked samples and the mixed standards of seven anestheticsa. spiked fish sample (1.0 mg/kg); b. blank fish sample; c. spiked shrimp sample (1.0 mg/kg); d. blank shrimp sample; e. standard solution. Peak identification: 1. procaine; 2. oxybuprocaine; 3. tricaine; 4. eugenol; 5. isoeugenol; 6. methyl eugenol; 7. methyl isoeugenol.

2.4 分析方法驗證

2.4.1線性范圍、檢出限和定量限

分別配制一系列魚肉和對蝦基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照1.2.3節(jié)條件進行液相色譜分析,得到7種麻醉劑的標(biāo)樣、魚肉和對蝦的加標(biāo)(1.0 mg/kg)和未加標(biāo)樣品的色譜圖(見圖7)。以目標(biāo)物的峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),繪制基質(zhì)匹配工作曲線,考察方法的線性范圍、檢出限和定量限,結(jié)果如表1所示。7種目標(biāo)分析物在0.05～10.0 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999 1。分別以信噪比的3倍和10倍計算檢出限和定量限,魚肉樣品中的檢出限為0.011～0.043 mg/kg,定量限為0.036～0.142 mg/kg;對蝦樣品中的檢出限為0.011～0.043 mg/kg,定量限為0.037～0.144 mg/kg。該方法的檢出限均低于美國、日本、澳大利亞、歐盟等國家和地區(qū)對丁香酚類麻醉劑和MS-222在水產(chǎn)品中最高殘留限定的檢測要求。

表 1 7種麻醉劑的線性方程、定量限、檢出限和基質(zhì)效應(yīng)Table 1 Linear equations, LODs, LOQs and matrix effects (ME) of the seven anesthetics

如表2所示,比較本方法與已經(jīng)報道的水產(chǎn)品中麻醉劑的檢測方法[8,9,30]。本方法前處理過程分為8個步驟,耗時24 min,有機溶劑消耗量為10 mL,明顯少于其他3種方法(液液萃取法[8](12步,51 min, 26 mL)、冷凍干燥法[9](18步,>63 min, 16 mL)、QuEChERS-SPE法[30](19步,>31 min, 45 mL))。本方法可以簡化前處理步驟、縮短前處理時間、減少有機試劑用量,是一種快速、簡單、環(huán)保的前處理方法。

2.4.2方法的精密度與重復(fù)性

在空白魚肉和對蝦樣品中添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,在0.2、0.5和1.0 mg/kg 3個水平下進行加標(biāo)回收試驗,加標(biāo)樣品按照1.2.2節(jié)的方法進行前處理后液相色譜分析。一天內(nèi)平行測定5次,計算日內(nèi)精密度(intra-day RSD);平行測定5天,計算日間精密度(inter-day RSD),結(jié)果如表3所示。在魚肉樣品中,7種麻醉劑的平均回收率為79.7%～109%, RSD小于7.2%;在對蝦樣品中,7種麻醉劑的平均回收率為78.0%～99.9%, RSD小于8.3%;說明該方法具有良好的精密度。

采用5批不同時間制備的PS-GMA評價合成方法可重復(fù)性。實驗結(jié)果表明,7種麻醉劑回收率的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6.7%,說明PS-GMA的合成具有良好的重復(fù)性。

2.5 實際樣品的測定

采用已經(jīng)建立的方法,對從當(dāng)?shù)厥袌鲭S機購買的5份羅非魚樣品和5份對蝦樣品進行前處理和檢測,10份樣品均未檢測出7種麻醉劑。雖然在實際樣品中均未檢測到7種麻醉劑,但實際樣品加標(biāo)回收試驗可證明本方法的準(zhǔn)確性和可靠性。

表 3 魚肉和對蝦空白樣品在3個水平下的加標(biāo)回收率和精密度(n=5)Table 3 Recoveries and precisions of the blank fish and shrimp samples at three spiked levels (n=5)

3 結(jié)論

本實驗建立了一種同時檢測水產(chǎn)品中3種氨基苯甲酸酯類和4種丁香酚類麻醉劑的DSPE-HPLC方法。樣品通過1.0%甲酸乙腈結(jié)合超聲提取,采用50 mg PSA+10 mg C18+20 mg PS-GMA凈化后進樣分析。樣品前處理耗時24 min, 7種目標(biāo)物在優(yōu)化后的條件下具有良好的線性關(guān)系、回收率與精密度。該方法操作簡單、耗時短、靈敏度高、有機試劑消耗少,可以應(yīng)用于水產(chǎn)品中7種氨基苯甲酸酯類和丁香酚類麻醉劑的檢測。本實驗采用的PS-GMA表面的環(huán)氧基雖以原始狀態(tài)存在,但其可進行開環(huán)反應(yīng),引入其他官能團,對PS-GMA進行功能化修飾,為提高吸附劑選擇性提供可能。