VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)葡萄球菌鑒定能力的評(píng)價(jià)

劉美慧 遼寧省遼陽(yáng)遼化醫(yī)院檢驗(yàn)科 （遼寧 遼陽(yáng) 111000）

內(nèi)容提要：目的：評(píng)價(jià)VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)葡萄球菌的鑒定能力。方法：選取2019年10月～2020年4月本院80例患者，收集分離出葡萄球菌80株，分別采用VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)進(jìn)行葡萄球菌的檢測(cè)，對(duì)VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用的優(yōu)勢(shì)及不足進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果：經(jīng)VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)后，其鑒定率均為100.00%；在葡萄球菌鑒定符合率方面，VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)鑒定一致率為96.25%，不一致的為3.75%；VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)鑒定后發(fā)現(xiàn)，80株葡萄球菌中，金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌分別為39株和41株，39株金黃色葡萄球菌的鑒定符合率為100%，而41株凝固酶陰性葡萄球菌中，鑒定一致率為92.68%，其中3株鑒定不一致。結(jié)論：VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)金黃色葡萄球菌的鑒定能力比較強(qiáng)，但是對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌的鑒定存在著一定的局限性，臨床進(jìn)行應(yīng)用時(shí)，還需要其他方法輔助鑒定。

目前，醫(yī)院及社區(qū)獲得性感染已經(jīng)成為醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)關(guān)注的重點(diǎn)問(wèn)題，而引起感染的最常見(jiàn)病原菌之一是金黃色葡萄球菌，該病菌可引起皮膚軟組織感染、其他身體部位廣泛感染及食物中毒。隨著抗生素藥物的使用越來(lái)越普遍，金黃色葡萄球菌感染率也不斷升高，尤其是金黃色葡萄球菌對(duì)-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的多重耐藥性、固有耐藥性，已經(jīng)對(duì)抗感染治療產(chǎn)生了嚴(yán)重影響[1]。所以，臨床中在對(duì)抗生素藥物合理使用中，對(duì)金黃色葡萄球菌準(zhǔn)確進(jìn)行鑒定意義重大。隨著我國(guó)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，微生物鑒定儀被廣泛地應(yīng)用在了各種病原菌的檢測(cè)中，VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀有著較強(qiáng)的代表性，但是經(jīng)過(guò)大量的研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為APIStaph微生物鑒定系統(tǒng)的準(zhǔn)確性和可靠性都比較高[2]。本次研究選取了80例患者，收集了從其標(biāo)本中分離出的80株葡萄球菌株，通過(guò)采用VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，詳細(xì)分析了VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)葡萄球菌的鑒定能力，具體如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

本次研究對(duì)象為2019年10月～2020年4月在本院各科室治療的80例患者，收集所有患者標(biāo)本，從中分離出葡萄球菌80株，本組中男性患者與女性患者分別為42例和38例，患者年齡28～67歲，平均（49.52±7.38）歲。本次收集到的80株葡萄球菌經(jīng)APIStaph系統(tǒng)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌分別為39株和41株。本次研究經(jīng)過(guò)了本院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：在本院各科室接受治療；患者及家屬同意參與本次研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：同一個(gè)患者相同部位分離出的重復(fù)菌株。

1.2 方法

分別采用VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)進(jìn)行葡萄球菌的檢測(cè)。采用本院VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀（生產(chǎn)廠家：法國(guó)梅里埃公司），以及與其配套的GP鑒定卡，本次檢驗(yàn)操作由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)并且考核合格的微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn)行操作，對(duì)葡萄球菌進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)過(guò)程中的標(biāo)本接種、分離等各項(xiàng)操作均嚴(yán)格按照臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程中的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行，再采用本院APIStaph系統(tǒng)以及與其配套設(shè)計(jì)，按照操作手冊(cè)，進(jìn)行葡萄球菌的檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

以APIStaph系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果為參照，對(duì)VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用的優(yōu)勢(shì)及不足進(jìn)行評(píng)價(jià)。VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定技術(shù)中綜合應(yīng)用了光電技術(shù)、微生物8位進(jìn)制數(shù)碼鑒定技術(shù)和計(jì)算機(jī)信息技術(shù)，所使用的鑒定卡內(nèi)含有64項(xiàng)生化反應(yīng)，將每三項(xiàng)組成了一個(gè)小組，每個(gè)小組內(nèi)各項(xiàng)反應(yīng)的陽(yáng)性分別賦值為1、2和4，最后計(jì)算每組數(shù)值，通過(guò)64項(xiàng)生化反應(yīng)結(jié)果的數(shù)值計(jì)算最終可獲得微生物數(shù)碼。應(yīng)用計(jì)算機(jī)軟件，每間隔15min進(jìn)行一次數(shù)據(jù)讀取，掃描個(gè)反應(yīng)孔底物，對(duì)各反應(yīng)孔底物的變化情況進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察。

2.結(jié)果

2.1 本次檢測(cè)的質(zhì)控菌株情況

質(zhì)控菌株的鑒定結(jié)果方面，本次鑒定出的金黃色葡萄球菌均為ATCC 25923，經(jīng)VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)后，其鑒定率均為100.00%。

2.2 本次檢測(cè)的總體情況

在葡萄球菌鑒定符合率方面，VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)鑒定一致率為96.25%（77/80），不一致的為3.75%（3/80）。

2.3 對(duì)葡萄球菌的鑒定情況

VITEK-2 compact和APIStaph系統(tǒng)鑒定后發(fā)現(xiàn)，80株葡萄球菌中，金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌分別為39株和41株，39株金黃色葡萄球菌的鑒定符合率為100%，而41株凝固酶陰性葡萄球菌中，鑒定一致率為92.68%（38/41），其中3株鑒定不一致，見(jiàn)表1。

表1.鑒定結(jié)果不一致的菌株情況

3.討論

金黃色葡萄球菌是葡萄球菌屬中致病性極強(qiáng)的一種菌種，其不但分布較為廣泛，并且傳播速度非常快，尤其在一些感染性疾病中，金黃色葡萄球菌是最為常見(jiàn)的病原菌之一[3]。由于金黃色葡萄球菌的感染率比較強(qiáng)，機(jī)體感染后，常常會(huì)出現(xiàn)皮膚嚴(yán)重感染、呼吸道嚴(yán)重感染，嚴(yán)重的甚至?xí)霈F(xiàn)敗血癥。在醫(yī)院內(nèi)獲得性感染疾病中，革蘭氏陽(yáng)性球菌中，金黃色葡萄球菌也是最為常見(jiàn)的菌種。因此，對(duì)金黃色葡萄球菌的鑒定能力進(jìn)行評(píng)價(jià)，也是對(duì)鑒定系統(tǒng)勝任能力進(jìn)行評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一[4]。

從金黃色葡萄球菌感染的機(jī)制來(lái)看，主要從病原學(xué)特征及宿主因素兩個(gè)方面進(jìn)行研究。首先，宿主因素。是宿主受金黃色葡萄球菌入侵后，產(chǎn)生多種毒力因子，參與菌體與宿主細(xì)胞的黏附，在宿主體內(nèi)擴(kuò)散。致病過(guò)程比較復(fù)雜，以多種毒力因子相互作用形成，最早發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌調(diào)控位點(diǎn)為葡萄球菌附屬基因調(diào)節(jié)，對(duì)多種毒力基因表達(dá)可進(jìn)行調(diào)控[5]。其次，病原學(xué)角度。金黃色葡萄球菌在侵入宿主細(xì)胞內(nèi)后，對(duì)抗生素的滅殺及宿主免疫系統(tǒng)的識(shí)別與滅殺均能進(jìn)行逃避，并能持續(xù)不斷地釋放侵襲性酶類(lèi)及毒素，導(dǎo)致慢性遷徙性感染發(fā)生；其中金葡菌A蛋白是重要毒力因子之一，與吞噬細(xì)胞形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，對(duì)多形核白細(xì)胞吞噬作用產(chǎn)生抑制，對(duì)白細(xì)胞素進(jìn)行滅殺，使機(jī)體免疫細(xì)胞、正常組織受到破壞，引起嚴(yán)重感染的發(fā)生[6]。通過(guò)對(duì)金黃色葡萄球菌的感染機(jī)制進(jìn)行研究，金葡菌毒力因子表達(dá)受宿主環(huán)境因素直接影響，尤其是素質(zhì)環(huán)境鐵含量，現(xiàn)階段被認(rèn)為是金葡菌毒力因子表達(dá)的最主要的影響因素。包含金葡菌在內(nèi)，諸多細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中都離不開(kāi)鐵，金葡菌在生長(zhǎng)中，通過(guò)鐵攝取調(diào)節(jié)蛋白，機(jī)體環(huán)境中如果鐵含量充足，則調(diào)節(jié)蛋白與目標(biāo)基因DNA結(jié)合，對(duì)目標(biāo)基因DNA表達(dá)進(jìn)行抑制，反之目標(biāo)基因表達(dá)增強(qiáng)。現(xiàn)有研究表明，免疫抑制患者機(jī)體對(duì)鐵的利用能力以及體內(nèi)鐵離子水平均有明顯的下降情況，與其發(fā)生感染存在密切關(guān)系[7]。再如惡性腫瘤患者在接受化學(xué)藥物治療中，機(jī)體通常處于免疫抑制狀態(tài)，機(jī)體對(duì)鐵的利用能力也較低[8]。

本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀在金黃色葡萄球菌的鑒定能力較好，與APIStaph系統(tǒng)鑒定結(jié)果的符合率為100%，并且VITEK-2 compact鑒定儀還能夠?qū)瘘S色葡萄球菌與凝固酶陰性葡萄球菌進(jìn)行區(qū)分，這也給臨床診斷及治療提供了準(zhǔn)確的指導(dǎo)依據(jù)。由于金黃色葡萄球菌的致病性非常強(qiáng)，各臨床醫(yī)師要將其重視起來(lái)，如果實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中不小心將金黃色葡萄球菌錯(cuò)誤的鑒定成了凝固酶陰性葡萄球菌，則極易對(duì)治療造成延誤，甚至導(dǎo)致患者死亡[9]。醫(yī)院感染中，致病菌類(lèi)型比較多，對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌進(jìn)行鑒定變得非常重要，因此對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌正確進(jìn)行鑒定，在分離株院內(nèi)感染是散發(fā)株還是流行株可準(zhǔn)確進(jìn)行鑒別。本次研究中，采用VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀在鑒定金黃色葡萄球菌時(shí)，未發(fā)現(xiàn)漏檢情況，也就是說(shuō)，并沒(méi)有將金黃色葡萄球菌誤鑒為凝固酶陰性葡萄球菌，從而較好地避免了延誤治療情況的發(fā)生[10]。本次研究結(jié)果還顯示，不論是VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀，還是APIStaph鑒定系統(tǒng)，其對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌的符合率均較金黃色葡萄球菌低，對(duì)此進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，這可能是因?yàn)閂ITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀和APIStaph鑒定系統(tǒng)均屬于生理學(xué)與生物化學(xué)鑒定法，在進(jìn)行細(xì)菌鑒定時(shí)，均需要明確細(xì)菌的生理生化特征，但是實(shí)際上，影響細(xì)菌生理生化特征的因素較多，如細(xì)菌的生理生化反應(yīng)能力會(huì)隨著細(xì)菌的生長(zhǎng)階段不同而不同，還有一些患者長(zhǎng)期使用抗生素治療，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)的病原菌失去了最為明顯的生理生化特性，這些因素都導(dǎo)致對(duì)葡萄球菌的鑒定結(jié)果造成了影響[11,12]。因此，臨床中在對(duì)某些鑒定率相對(duì)較低的凝固酶陰性葡萄球菌鑒定時(shí)，要正確分析鑒定結(jié)果。當(dāng)然，在鑒定過(guò)程中，如果有需要，可采用16S rRNA基因分析法輔助進(jìn)行檢測(cè)，該方法對(duì)核酸堿基排列進(jìn)行監(jiān)測(cè)，屬于遺傳學(xué)分類(lèi)法，對(duì)細(xì)菌的遺傳狀況能夠準(zhǔn)確反應(yīng)出來(lái)，所以鑒定率比較高。

本次研究中，應(yīng)用了VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀以及與其配套的GP鑒定卡，本次檢驗(yàn)操作由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)并且考核合格的微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn)行操作，發(fā)現(xiàn)VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)的應(yīng)用范圍比較廣，比如目前可進(jìn)行G-桿菌、G-球菌檢測(cè)，還能進(jìn)行真菌和厭氧菌檢測(cè)，此系統(tǒng)中應(yīng)用的是高級(jí)專(zhuān)家系統(tǒng)（AES），條例式+表型匹配式高級(jí)專(zhuān)家系統(tǒng)，檢測(cè)的過(guò)程中可自動(dòng)填充、自動(dòng)封口、自動(dòng)裝載和卸載，相比較熒光法細(xì)菌檢測(cè)，VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物沒(méi)有任何隱蔽性耗材，可以將檢測(cè)中得到的數(shù)據(jù)直接導(dǎo)入Whonet中，計(jì)算機(jī)中所使用的系統(tǒng)為Windows XP系統(tǒng)，這一系統(tǒng)也是目前全球公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)。整個(gè)過(guò)程中實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化操作，基本不需要檢驗(yàn)人員進(jìn)行手工操作，鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性比較高，生物安全性也比較高。隨著臨床應(yīng)用范圍的擴(kuò)大，VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)用戶界面實(shí)現(xiàn)了改良，幫助檢驗(yàn)人員更加容易的掌握了系統(tǒng)操作的方式，從多個(gè)方面提高了臨床微生物檢測(cè)的效率以及質(zhì)量。隨著系統(tǒng)的逐步升級(jí)，鑒定數(shù)據(jù)庫(kù)得到了擴(kuò)展，也在很大程度上拓寬了可鑒定的微生物范圍，比如在具體微生物鑒定的過(guò)程中從菌懸液的配制一直到所有鑒定步驟的結(jié)束都實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化操作，系統(tǒng)中應(yīng)用了條碼識(shí)別，可全程追溯微生物鑒定流程，降低了人工操作造成的失誤率。一般從檢驗(yàn)到結(jié)果出具時(shí)間只需2～18個(gè)小時(shí)，且準(zhǔn)確率較高。

從總體上來(lái)看，VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物鑒定儀基本滿足了臨床檢測(cè)的需求，其對(duì)金黃色葡萄球菌的鑒定能力比較強(qiáng)，但是對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌的鑒定存在著一定的局限性，還需要其他方法輔助鑒定。