基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接方法探討絡(luò)石藤治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制

李成蹊，關(guān)智宇，蔣太平，劉志倫，劉昭明

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550000；2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科，貴州 貴陽 550001)

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以侵襲性關(guān)節(jié)滑膜炎為主要癥狀的自身免疫系統(tǒng)疾病，其具體病因未明[1]。特征為身體多關(guān)節(jié)的對(duì)稱性、侵蝕性炎癥，臨床表現(xiàn)有關(guān)節(jié)晨僵、腫脹、疼痛及功能障礙等癥狀(最常見于手、足小關(guān)節(jié))，實(shí)驗(yàn)室檢查可見血清類風(fēng)濕因子陽性。如未得到恰當(dāng)治療，可能造成患者永久性骨質(zhì)破壞并最終出現(xiàn)殘疾，甚至累及臟器和神經(jīng)系統(tǒng)而危及生命[2]。目前臨床常見的治療RA藥物的主要局限性在于單一的靶向作用，這使得它們雖然可在短期內(nèi)改善患者的臨床癥狀，但長(zhǎng)期的治療效果往往欠佳，且存在的不良反應(yīng)和較大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)使得很多患者不能維持用藥。故而探尋并利用長(zhǎng)效、低毒、價(jià)廉的中草藥對(duì)RA患者進(jìn)行治療，一直是近些年來臨床研究的一個(gè)熱點(diǎn)。

RA屬中醫(yī)“痹癥”“尪痹”范疇。中醫(yī)理論認(rèn)為痹癥是由于體虛之人受到風(fēng)、寒、濕、熱等邪氣侵襲，進(jìn)而使經(jīng)絡(luò)閉阻，氣血運(yùn)行不暢，所謂“不通則痛”“不榮則痛”，最終導(dǎo)致肢體肌肉廢用，關(guān)節(jié)紅腫熱痛、變形等癥狀的一種疾病。在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐過程中，我國古代醫(yī)家對(duì)此病有了較為系統(tǒng)的認(rèn)知，在許多中醫(yī)典籍中都有對(duì)類似病癥的總結(jié)。《黃帝內(nèi)經(jīng)》最早提出了風(fēng)、寒、濕三種外邪相合而致痹癥，《素問·痹論》[3]曰：“風(fēng)寒濕三氣雜至合而為痹也”；對(duì)風(fēng)濕的認(rèn)知發(fā)展至宋代，有《太平圣惠方》云：“風(fēng)濕腰痛，連腿膝，頑痹不能運(yùn)動(dòng)”，《太平惠民和劑局方》[4]又載：“體虛，風(fēng)邪入血，肌膚頑痹”，都強(qiáng)調(diào)了體虛是痹病之根本原因，此后風(fēng)濕之邪從外侵犯而成痹證。從古至今中醫(yī)對(duì)RA的治法也以祛風(fēng)勝濕，通絡(luò)止痛為主?！吨袊幍洹穂5]記載絡(luò)石藤為夾竹桃科植物絡(luò)石[Trachelospermumjasminoides(Lindl.)Lem.]的干燥帶葉藤莖。味苦，性微寒。歸心、肝、腎經(jīng)。有祛風(fēng)通絡(luò)，涼血消腫的功效。中醫(yī)常將其用于風(fēng)濕痹癥、腰痹筋攣、紅腫熱痛、跌撲損傷等治療?！侗静菥V目》[6]有載：“絡(luò)石，氣味平和，其功主筋骨關(guān)節(jié)風(fēng)熱癰腫”。通過長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐，人們發(fā)現(xiàn)在古今眾多經(jīng)方運(yùn)用過程中，絡(luò)石藤往往可有效延緩各種關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)展，改善患者臨床癥狀。但由于中草藥的成分混雜、機(jī)制不明等原因，其類似“黑箱理論”的運(yùn)作形式在多種臨床疾病治療過程中的作用依然受到質(zhì)疑。本文旨在運(yùn)用現(xiàn)代化的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接方法，分析絡(luò)石藤所含的主要活性物質(zhì)基礎(chǔ)及其可能的作用機(jī)制，為明確絡(luò)石藤對(duì)于RA的治療效果提供數(shù)據(jù)支持與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要軟件與數(shù)據(jù)庫 Cytoscape 3.8.0、R語言、perl document、ChemBio3D Ultra、PyMOL、AutoDockTools、Vina、中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)(TCMSP)、GeneCards基因數(shù)據(jù)庫、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)、PubChem數(shù)據(jù)庫、Uniprot蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫、STRING蛋白互作關(guān)系數(shù)據(jù)庫、PubChem有機(jī)小分子生物活性數(shù)據(jù)庫、RCSB蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(PDB)。

1.2 絡(luò)石藤活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選 在TCMSP中，以“絡(luò)石藤”為檢索詞，獲取絡(luò)石藤已知的藥物成分，將口服生物利用度大于等于30%(OB≥30%)，化合物類藥性大于等于0.18(DL≥0.18)設(shè)定為篩選標(biāo)準(zhǔn)，得到絡(luò)石藤所含化合物中活性度較高的成分，之后利用數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步搜索這些成分所作用的靶點(diǎn)基因，再將藥物所有的作用靶點(diǎn)導(dǎo)入U(xiǎn)niProt數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)、去重后，獲得絡(luò)石藤可作用的靶點(diǎn)基因名稱。

1.3 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎靶點(diǎn)的篩選 在GeneCards、OMIM兩種數(shù)據(jù)庫中同時(shí)檢索關(guān)鍵詞“rheumatoid arthritis”，將檢索物種設(shè)定為“homo sapiens(人類)”，得到較為全面的RA疾病人源靶點(diǎn)基因。

1.4 “藥物-活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 得到絡(luò)石藤活性成分作用靶點(diǎn)與RA潛在靶點(diǎn)基因后，運(yùn)行perl document程序獲取“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)，再利用R語言將交集靶點(diǎn)輸出為Venn圖，運(yùn)用Cytoscape 3.8.0軟件將絡(luò)石藤及其活性成分、RA及其靶點(diǎn)基因之間的作用關(guān)系進(jìn)行可視化分析。

1.5 靶蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)的構(gòu)建 檢索STRING數(shù)據(jù)庫，導(dǎo)入“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)，生成蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)后，將網(wǎng)絡(luò)圖保存為TSV格式的數(shù)據(jù)文件后導(dǎo)入到Cytoscape 3.8.0中進(jìn)行篩選，得到絡(luò)石藤活性成分作用的核心靶點(diǎn)基因。

1.6 分子對(duì)接 首先使用PubChem數(shù)據(jù)庫搜索核心靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的活性成分，導(dǎo)入ChemBio3D Ultra軟件繪制活性成分的3D結(jié)構(gòu)，得到小分子配體文件。之后從RCSB蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(PDB)下載核心靶點(diǎn)的三維結(jié)構(gòu)，用PyMOL軟件刪除配體并除水，得到蛋白受體文件。將二者導(dǎo)入AutoDockTools進(jìn)行加氫修飾，設(shè)定搜索范圍和評(píng)分參數(shù)，形成活性口袋。最后利用Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接。

1.7 GO富集分析與KEGG通路富集分析 下載Bioconductor程序包并利用R語言運(yùn)行，對(duì)之前獲取的“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析和KEGG通路分析，將閾值設(shè)定為P<0.05以提高分析準(zhǔn)確性，將分析結(jié)果按照涉及的靶點(diǎn)數(shù)目從高到低進(jìn)行排列，選取GO富集分析中生物過程(BP)、細(xì)胞組成(CC)和分子功能(MF)的前10 個(gè)條目及KEGG通路富集的前20 個(gè)信號(hào)通路，進(jìn)一步探討絡(luò)石藤治療RA的生物學(xué)過程及其作用的信號(hào)通路。

2 結(jié)果

2.1 絡(luò)石藤活性成分及作用靶點(diǎn) 通過TCMSP數(shù)據(jù)庫共檢索出絡(luò)石藤25 個(gè)已知化學(xué)成分，再將OB≥30%和DL≥0.18設(shè)置為篩選條件，最終得到9 個(gè)活性度較高的化合物，可推測(cè)為絡(luò)石藤活性成分(見表1)。將活性成分導(dǎo)入TCMSP數(shù)據(jù)庫，獲取每個(gè)活性成分所作用的靶點(diǎn)基因，為避免不同活性成分存在重復(fù)的作用靶點(diǎn)，故將全部靶點(diǎn)基因利用UniProt數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)、去重，獲得90 個(gè)絡(luò)石藤治療RA的潛在靶基因名稱。

表1 絡(luò)石藤活性成分

2.2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎靶點(diǎn)的篩選 在GeneCards數(shù)據(jù)庫、OMIM數(shù)據(jù)庫中檢索關(guān)鍵詞“rheumatoid arthritis”，物種設(shè)定為“homo sapiens”，得到RA的人源靶點(diǎn)基因4 427 個(gè)，結(jié)合絡(luò)石藤治療RA的潛在靶點(diǎn)，運(yùn)行perl document取“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)，利用R語言輸出為Venn圖，發(fā)現(xiàn)67 個(gè)絡(luò)石藤作用靶點(diǎn)與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎重合的靶點(diǎn)基因。

2.3 “藥物-活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將藥物活性成分和疾病交集靶點(diǎn)導(dǎo)入Cystoscope 3.8.0軟件，得到“藥物-活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖(見圖1)。網(wǎng)絡(luò)圖中共包含158 個(gè)節(jié)點(diǎn)，其中六邊形代表藥物，矩形代表藥物活性成分，橢圓形代表靶點(diǎn)，菱形代表疾病，連接線表示兩個(gè)元素之間存在相互關(guān)系。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)中絡(luò)石藤活性成分與疾病靶點(diǎn)連接度的多少篩選出排名前四的有效活性分子，分別為木犀草素、伊博格堿、谷甾醇、豆甾醇，各有8 個(gè)以上的靶點(diǎn)基因與這些成分發(fā)生作用，推測(cè)是絡(luò)石藤在RA治療中起主要作用的活性成分，體現(xiàn)了中藥多靶點(diǎn)的特性。

2.4 靶蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)的構(gòu)建 檢索STRING數(shù)據(jù)庫，將范圍設(shè)為“Multiple proteins”，物種設(shè)為“Homo sapiens”，導(dǎo)入“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)，初步生成蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)后，調(diào)整“minimum required interaction score”為0.9并隱藏游離靶點(diǎn)，其余參數(shù)為默認(rèn)值，繪制更明晰的蛋白互作關(guān)系(見圖2)，節(jié)點(diǎn)之間連線越粗代表互作關(guān)系越密切。將互作網(wǎng)絡(luò)保存為TSV格式的數(shù)據(jù)文件，導(dǎo)入到Cytoscape 3.8.0中對(duì)靶蛋白作用程度進(jìn)行打分，篩選兩次后得到6 個(gè)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)核心基因(見圖3)，分別為RB1、MAPK1、AKT1、JUN、IL-6、RELA，確定為絡(luò)石藤活性成分作用的核心靶點(diǎn)。

圖1 “藥物-活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)

圖2 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)

圖3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)核心基因篩選

2.5 分子對(duì)接 將篩選出的6 個(gè)核心靶點(diǎn)與絡(luò)石藤活性成分進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，其結(jié)果見表2，可見木犀草素是與6 個(gè)核心靶點(diǎn)對(duì)接的活性成分，運(yùn)用PyMOL軟件輸出對(duì)接模式圖(見圖4)。分子對(duì)接的結(jié)合能(affinity)越小，表示配體與受體結(jié)合的越牢固。對(duì)接結(jié)果顯示，絡(luò)石藤活性成分與RA核心靶點(diǎn)的結(jié)合能介于-7.7 kcal·mol-1與-9.8 kcal·mol-1之間(低于-5.0 kcal·mol-1)，表明活性成分與核心靶點(diǎn)具有較好的結(jié)合活性，預(yù)測(cè)結(jié)果比較可靠。

表2 活性成分與核心靶點(diǎn)對(duì)接結(jié)果

圖4 絡(luò)石藤活性成分與RA核心靶點(diǎn)對(duì)接模式

2.6 GO富集分析與KEGG通路富集分析 將篩選出的67 個(gè)“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析與KEGG通路富集分析，制作富集圖形。本次GO富集分析共顯示1 888個(gè)生物過程(BP)、84 個(gè)細(xì)胞組成(CC)、91 個(gè)分子功能(MF)，各取其中前10 個(gè)條目進(jìn)行可視化分析(見圖5)。交集靶點(diǎn)基因在BP富集過程中主要表現(xiàn)在對(duì)生物堿的反應(yīng)(response to alkaloid)、肌肉細(xì)胞增殖(muscle cell proliferation)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)(cellular response to chemical stress)、調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞增殖(regulation of smooth muscle cell proliferation)、對(duì)金屬離子的反應(yīng)(response to metal ion)、腺體發(fā)育(gland development)、對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)(response to oxidative stress)、對(duì)類固醇激素的反應(yīng)(response to steroid hormone)、對(duì)活性氧的反應(yīng)(response to reactive oxygen species)等生物過程；在CC富集過程中主要表現(xiàn)為突觸后膜(postsynaptic membrane)、突觸膜(synaptic membrane)、突觸前膜(presynaptic membrane)、細(xì)胞膜筏(membrane raft)、細(xì)胞膜微區(qū)(membrane microdomain)、細(xì)胞膜區(qū)(membrane region)等細(xì)胞組成；在MF富集過程中主要表現(xiàn)在兒茶酚胺結(jié)合(catecholamine binding)、G蛋白偶聯(lián)的胺受體活性(G protein-coupled amine receptor activity)、藥物結(jié)合(drug binding)、神經(jīng)遞質(zhì)受體活性(neurotransmitter receptor activity)、肽結(jié)合(peptide binding)等分子功能。

圖5 絡(luò)石藤治療RA的GO富集分析

本次KEGG通路富集分析顯示了125 條通路，取前20 個(gè)條目進(jìn)行可視化分析(見圖6)。交集靶點(diǎn)主要富集于PI3K-Akt信號(hào)通路、多種癌癥相關(guān)通路、人巨細(xì)胞病毒感染、乙型肝炎、HIF-1信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等，多為癌癥、感染、炎癥和免疫相關(guān)通路。

圖6 絡(luò)石藤治療RA的KEGG通路富集分析

3 討論

經(jīng)過TCMSP數(shù)據(jù)庫篩選后，本次研究共得到絡(luò)石藤中9 個(gè)藥動(dòng)學(xué)特征良好的化合物作為潛在活性成分，通過“藥物-活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖反映出其中木犀草素、伊博格堿、谷甾醇、豆甾醇4個(gè)成分可能為發(fā)揮RA治療作用的關(guān)鍵成分。木犀草素是一種天然黃酮類化合物，具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用。Aziz等[7]通過體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了木犀草素具有較好的抗炎作用，其主要通過NF-κB、MAPK通路發(fā)揮作用。徐強(qiáng)等[8]認(rèn)為木犀草素可以通過下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的表達(dá)，防止軟骨降解，促進(jìn)新合成的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的積累，并抑制滑膜成纖維細(xì)胞增殖，最終緩解關(guān)節(jié)部位的炎癥反應(yīng)。部分關(guān)于急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了木犀草素緩解試驗(yàn)?zāi)Ｐ妥沲钻P(guān)節(jié)腫脹的作用，是通過下調(diào)IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α等的水平達(dá)到的[9]。谷甾醇是植物甾醇的重要組成成分，其作用于多種慢性疾病，具有抗炎、抗氧化及抗腫瘤等作用[10]。Liao等[11]發(fā)現(xiàn)β-谷甾醇可以通過抑制表皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞中炎癥小體NLRP3的激活，來抑制CAS1的產(chǎn)生及MAPK信號(hào)通路的活化，從而顯著減少細(xì)胞中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8生成以起到抗炎作用。曾莉萍等[12]發(fā)現(xiàn)β-谷甾醇可使成骨細(xì)胞護(hù)骨素與破骨細(xì)胞分化因子的比值增高，發(fā)揮雌激素樣作用，促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞分泌雌二醇，從而與骨膜上的雌激素受體結(jié)合，促進(jìn)成骨作用以及抑制破骨作用來調(diào)節(jié)女性骨代謝的平衡。關(guān)于豆甾醇及伊博格堿的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少，豆甾醇的作用主要涉及抗癌方面，而伊博格堿主要用于阻斷某些藥物或毒品的依賴性，本文不做詳細(xì)討論。故推測(cè)木犀草素和谷甾醇為絡(luò)石藤抗RA的關(guān)鍵活性成分。

而分子對(duì)接的結(jié)果也表明，在通過PPI網(wǎng)絡(luò)篩選出的核心靶點(diǎn)基因RB1、MAPK1、AKT1、JUN、IL-6、RELA中，絡(luò)石藤活性成分木犀草素與核心靶點(diǎn)具有較好的結(jié)合活性，進(jìn)一步證實(shí)了絡(luò)石藤藥物成分可以與受體穩(wěn)定結(jié)合并發(fā)揮治療RA的作用，為絡(luò)石藤作用于核心靶點(diǎn)以干預(yù)RA病情提供了更多數(shù)據(jù)支持。

在篩選出的核心靶點(diǎn)基因中，又以MAPK1、AKT1、JUN三個(gè)基因的自由度最高。MAPK(基質(zhì)金屬蛋白酶)信號(hào)通路是經(jīng)典的炎性反應(yīng)通路，有研究表明，對(duì)膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠給予MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑后，與未給信號(hào)通路抑制劑的對(duì)照組相比，給藥組在抑制滑膜炎癥、骨質(zhì)破壞和關(guān)節(jié)軟骨破壞的方面有顯著效果[1]。說明該信號(hào)通路對(duì)炎癥、增生和骨破壞這三大RA病理過程均起到重要的調(diào)節(jié)作用。AKT1可通過磷酸化其下游底物來促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、代謝、凋亡等重要的細(xì)胞生物學(xué)過程[13]。JUN(轉(zhuǎn)錄因子AP-1)主要由C-Fos家族和C-jun家族結(jié)合形成的二聚體構(gòu)成，JUN位于多條信號(hào)通路的下游，主要調(diào)控炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-1、IL-6、IL-17等)和金屬蛋白酶(MMPs)等的釋放，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡，影響機(jī)體的免疫和炎性反應(yīng)[2]。

GO富集分析結(jié)果表明，絡(luò)石藤對(duì)RA的治療過程包括了金屬離子、蛋白質(zhì)等多種物質(zhì)的參與，涉及細(xì)胞器、細(xì)胞膜細(xì)胞，可影響肌肉細(xì)胞增殖、藥物結(jié)合、神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、肽結(jié)合，對(duì)各種有機(jī)環(huán)狀化合物反應(yīng)、對(duì)生物堿反應(yīng)、對(duì)非生物刺激反應(yīng)、對(duì)類固醇激素反應(yīng)和對(duì)含氧化合物等反應(yīng)的一個(gè)復(fù)雜的過程。KEGG通路富集分析可歸納靶基因作用于疾病時(shí)所途徑的信號(hào)通路，便于更加清稀、明確地總結(jié)藥物發(fā)揮治療作用的過程。IL-17在RA患者病理活檢中均可檢測(cè)到，且研究表明IL-17是通過PI3K-Akt途徑刺激RA-FLS分泌IL-6、IL-8及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)[14-15]。而更多研究還發(fā)現(xiàn)，PI3K-Akt可以通過影響FLS的增殖與凋亡干預(yù)RA滑膜炎癥，進(jìn)行對(duì)TNF-α誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)成熟蛋白1(Blimp 1)表達(dá)的調(diào)控干預(yù)RA骨破壞 ，其參與了RA進(jìn)展的全部過程[16]。有研究表明[2]，RA成纖維樣細(xì)胞異常增生，并展現(xiàn)出了類癌細(xì)胞特點(diǎn)，RA纖維樣滑膜細(xì)胞異常增生可能與癌癥相關(guān)通路有關(guān)聯(lián)，絡(luò)石藤對(duì)多種癌癥相關(guān)通路的調(diào)控也可能對(duì)RA發(fā)揮治療作用。

綜上所述，本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接方法，搜集到絡(luò)石藤9種活性成分及可能作用的90 個(gè)潛在靶點(diǎn)，4 427個(gè)RA疾病的相關(guān)靶點(diǎn)，其中包括“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)67個(gè)，構(gòu)建關(guān)于這些靶點(diǎn)基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)，發(fā)現(xiàn)絡(luò)石藤可能是通過作用于RB1、MAPK1、AKT1、JUN、IL-6、RELA等靶點(diǎn)發(fā)揮對(duì)RA的治療作用，分子對(duì)接顯示，其中發(fā)揮主要治療作用的活性成分為木犀草素。通過對(duì)核心靶進(jìn)行GO富集分析和KEGG通路富集分析，絡(luò)石藤可能通過調(diào)控PI3K-Akt信號(hào)通路、癌癥相關(guān)通路、細(xì)胞凋亡通路、IL-17信號(hào)通路等通路，發(fā)揮抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫功能及調(diào)控細(xì)胞凋亡等作用來治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。這些結(jié)果通過數(shù)據(jù)證明了絡(luò)石藤治療RA的有效性，體現(xiàn)了中草藥治療特定疾病可以發(fā)揮多種要素協(xié)同作用的特點(diǎn)，也說明網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接方法運(yùn)用于中醫(yī)藥研究的科學(xué)性和有效性。同時(shí)，本研究尚存在需要改進(jìn)之處，如檢索的數(shù)據(jù)庫種類較少，所獲取的信息可能不完全，獲取的小分子配體及核心靶點(diǎn)數(shù)量有限，無法更加全面地揭示中草藥的藥理作用；作者查閱、引用的文獻(xiàn)及憑借網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)構(gòu)建的框架、列表、繪圖中存在對(duì)當(dāng)前研究熱點(diǎn)的傾向性，可能一定程度上影響到本次研究的結(jié)果，故得出的結(jié)論仍需進(jìn)一步以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)加以驗(yàn)證，以更加準(zhǔn)確地揭示中藥絡(luò)石藤治療RA的具體作用機(jī)制。