HIV/AIDS合并CM患者IL-10對(duì)Th1/Th2免疫調(diào)節(jié)機(jī)制探討*

磨立達(dá)，黃宛虹，劉澤端，羅曉璐

南寧市第四人民醫(yī)院/廣西醫(yī)科大學(xué)附屬南寧市傳染病醫(yī)院/廣西艾滋病臨床治療中心(南寧)檢驗(yàn)科,廣西南寧 530023

人類免疫缺陷病毒(HIV)/艾滋病(AIDS)合并新型隱球菌腦膜炎(CM)患者通常存在多臟器損傷，尤其是肺部損傷以及腦膜炎較為突出，具有較高的病死率。CM屬于中樞神經(jīng)最為常見(jiàn)的真菌感染疾病之一，其主要是因感染新型隱球菌所發(fā)病，該疾病病情重，治療時(shí)間長(zhǎng)，疾病預(yù)后差[1]。伴隨臨床對(duì)HIV/AIDS合并CM研究的不斷深入，越來(lái)越多的抗真菌藥物被逐漸應(yīng)用于臨床治療中，其中氧胞嘧啶、兩性霉素B等藥物在疾病治療中發(fā)揮一定效果，但其中仍有少數(shù)患者在采用抗真菌藥物治療后無(wú)法達(dá)到滿意的治療效果，同時(shí)還會(huì)出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)[2-3]。因此需要了解HIV/AIDS合并CM患者發(fā)病機(jī)制，并制訂安全、有效的治療措施，對(duì)降低患者病死率具有積極意義。白細(xì)胞介素(IL)-10屬于輔助性T細(xì)胞(Th)2型細(xì)胞因子，其可發(fā)揮多種生物學(xué)活性，在感染性疾病中發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用[4]。但是其在HIV/AIDS合并CM發(fā)病機(jī)制方面作用臨床研究較少，一定程度上限制HIV/AIDS合并CM治療效果的提升。因此，本研究通過(guò)觀察IL-10在HIV/AIDS合并CM患者中的表達(dá)水平，分析其與其他因子的相關(guān)性，為揭開(kāi)其在HIV/AIDS合并CM發(fā)生免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中的作用奠定基礎(chǔ)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年1月至2020年9月在南寧市第四人民醫(yī)院住院的HIV/AIDS合并CM的40例患者作為A組，HIV/AIDS合并結(jié)核分枝桿菌感染患者40例作為B組，HIV/AIDS感染患者40例作為C組，40例CM患者作為D組。A組男33例、女7例；年齡19～85歲，平均(45.85±17.95)歲。B組男34例、女6例；年齡20～76歲，平均(49.48±14.00)歲。C組男30例、女10例；年齡20～79歲，平均(50.68±16.82)歲。D組男29例、女11例；年齡19～81歲，平均(52.53±15.78)歲。各組性別、年齡方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。A組、B組及C組患者經(jīng)臨床診斷均符合HIV/AIDS感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；A組、D組患者經(jīng)臨床診斷均符合CM診斷標(biāo)準(zhǔn)[6-7]。其中A組排除結(jié)核分枝桿菌、其他侵襲性真菌感染及細(xì)菌重癥感染；B組排除其他侵襲性真菌感染及細(xì)菌重癥感染；C組排除結(jié)核分枝桿菌、其他侵襲性真菌感染及細(xì)菌重癥感染；D組排除HIV、結(jié)核分枝桿菌、其他侵襲性真菌感染以及細(xì)菌重癥感染。

1.2檢測(cè)前標(biāo)本準(zhǔn)備 全部患者入院后，在未使用抗病毒或抗真菌藥物前抽取血液及腦脊液。

1.2.1血漿準(zhǔn)備 采集患者空腹外周靜脈血8～10 mL，分裝于含乙二胺四乙酸三鉀(EDTA-K3)抗凝采血管，分離出的血漿于-80 ℃保存。

1.2.2腦脊液準(zhǔn)備 選患者腰2至骶1的椎間隙穿刺抽取腦脊液4～6 mL，分裝于無(wú)抗凝試管，于-80 ℃保存。

1.3檢測(cè)方法 應(yīng)用上海博舜生物公司生產(chǎn)的試劑盒，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)血漿及腦脊液的干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12進(jìn)行檢測(cè)。

1.4觀察指標(biāo) 觀察A組血漿及腦脊液中IL-10、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-12水平，并與其他3組比較。對(duì)在血漿、腦脊液中IL-10水平進(jìn)行高低排列。本研究將各組血漿IL-10<30 pg/mL時(shí)視為血漿IL-10低值，而血漿IL-10>60 pg/mL時(shí)視為血漿IL-10高值；各組腦脊液IL-10<15 pg/mL時(shí)視為腦脊液IL-10低值，而腦脊液IL-10>20 pg/mL時(shí)視為腦脊液IL-10高值。最終從每組中篩選符合標(biāo)準(zhǔn)的血漿、腦脊液IL-10低值和IL-10高值病例各14例，統(tǒng)計(jì)各組細(xì)胞因子水平，重點(diǎn)觀察A組各細(xì)胞因子水平間的差異。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件對(duì)調(diào)查結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，非正態(tài)分布的計(jì)量資料以M(P25,P75)表示，組間比較采用Mann-whitneyU檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；指標(biāo)間相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，因存在多個(gè)變量，直接對(duì)兩個(gè)變量進(jìn)行Pearson相關(guān)分析很可能得到偽相關(guān)，故對(duì)其進(jìn)行校正；P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.14組各指標(biāo)水平比較 A組血漿IL-10水平與其他3組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)； A組腦脊液IL-10水平與其他3組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 A組各指標(biāo)與其他組比較[M(P25,P75),pg/mL]

2.2經(jīng)Pearson相關(guān)分析計(jì)算IL-10與其他指標(biāo)的相關(guān)性 對(duì)于A組，血漿IL-10與IL-12、IL-4、IL-6的r值分別為0.729、0.898、0.866，P<0.001；對(duì)于A組，腦脊液IL-10與IL-4、TNF-α的r值分別為0.852、0.714，P<0.05。見(jiàn)表2。

表2 IL-10在各組中與其他指標(biāo)的相關(guān)性

2.3在IL-10低值、IL-10高值時(shí)各組細(xì)胞因子水平比較 對(duì)于A組，血漿IL-10低值的患者IFN-γ水平高于IL-10高值的患者,IL-10低值的患者IL-4、IL-6、IL-12水平低于IL-10高值的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)于A組，腦脊液IL-10低值的患者IL-4水平低于IL-10高值的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 在IL-10低值、IL-10高值時(shí)各組細(xì)胞因子水平比較[M(P25,P75),pg/mL]

續(xù)表3 在IL-10低值、IL-10高值時(shí)各組細(xì)胞因子水平比較[M(P25,P75),pg/mL]

3 討 論

CM是由新型隱球菌感染患者腦膜或者腦實(shí)質(zhì)造成，其早期癥狀并不典型，極易被忽視。一旦與HIV/AIDS合并，免疫力極度低下，新型隱球菌通過(guò)毒性因子相關(guān)作用如葡萄糖醛酸木糖、漆酶、尿素酶、磷脂酶等逃避宿主的免疫清除[8]，直接加重病情，危及患者生命安全。此病理過(guò)程可能跟隱球菌自身的毒性作用與宿主免疫抵御作用有密切關(guān)系，兩者間存在不斷地抗衡。

Th1細(xì)胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-12 等細(xì)胞因子，有介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答和CD8+T細(xì)胞分化成熟的功能，抑制Th2細(xì)胞的功能，在宿主抗胞內(nèi)寄生的病原體(如結(jié)核分枝桿菌)或新型隱球菌感染中起重要作用；Th2細(xì)胞分泌IL-4、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子，有介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答、B細(xì)胞增殖分化、拮抗胞外病原體(如細(xì)菌、寄生蟲(chóng))的功能。正常情況下，兩者處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，維持免疫應(yīng)答平衡。但當(dāng)患者進(jìn)入艾滋病期，抵抗力降低，免疫應(yīng)答受抑制而導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂，引起抗炎癥因子水平升高，出現(xiàn)Th1/Th2失衡結(jié)局[9]。IL-10屬于多細(xì)胞源、多功能的細(xì)胞因子，其可調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化，參與炎性反應(yīng)及免疫反應(yīng)。其主要是由單核細(xì)胞以及Th2細(xì)胞所分泌，常出現(xiàn)在免疫反應(yīng)晚期，于細(xì)胞激活及抗炎因子釋放后出現(xiàn)。有研究報(bào)道從HIV無(wú)癥狀攜帶者發(fā)展至AIDS階段IL-10水平逐漸增高[10]。彭秀娟等[11]證實(shí)CM患者腦脊液內(nèi)IL-10水平明顯高于健康人群。本研究結(jié)果顯示，A組血漿IL-10水平與其他3組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；A組腦脊液IL-10水平與其他3組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對(duì)于HIV/AIDS合并CM患者而言，由于機(jī)體免疫系統(tǒng)逐漸被抑制，T淋巴細(xì)胞抗病毒功能異常，而在CD4+T細(xì)胞耗竭的分子表面存在較多程序性死亡受體，該受體聯(lián)合莢膜多糖誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生大量的IL-10。提示在疾病進(jìn)程中IL-10與HIV/AIDS合并CM應(yīng)該存在密切的正相關(guān)性，只是本研究因病例數(shù)少未能以不同病期分組。

本研究結(jié)果顯示，血漿中，A組的IL-10與IL-4、IL-6、IL-12呈正相關(guān)，與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)。提示在HIV感染初期，血液中以IFN-γ占主導(dǎo)，隨著免疫力的減弱，單核細(xì)胞不斷增多，Th2 型細(xì)胞因子IL-4 和IL-10水平上升，IFN-γ水平呈下降趨勢(shì)，導(dǎo)致Th1/Th2漂移、細(xì)胞免疫功能減弱，使得新型隱球菌被吞噬后無(wú)法得到有效清除，菌體借助“木馬機(jī)制”以吞噬細(xì)胞為載體實(shí)施全身擴(kuò)散，進(jìn)一步誘發(fā)CM[12]；在抑炎因子IL-10水平隨病程發(fā)展有逐漸增高的態(tài)勢(shì)下，雖然IL-10可抑制前炎癥因子IL-12的生成，然而單核巨噬細(xì)胞受到HIV的感染，可誘導(dǎo)大量的IL-12產(chǎn)生，進(jìn)而促進(jìn)Th0向Th1細(xì)胞分化；隨著受到莢膜多糖不斷浸潤(rùn)，大量中性粒細(xì)胞向病變區(qū)域聚集，排出毒性氧基，加重炎性反應(yīng)[13]，同時(shí)受到抗原刺激、HIV調(diào)節(jié)蛋白誘導(dǎo)及B細(xì)胞活化，強(qiáng)效促炎細(xì)胞因子IL-6也因此增高。由此可見(jiàn)，在HIV/AIDS合并CM的疾病發(fā)展中，由于一系列細(xì)胞受到HIV及新型隱球菌的影響，在血液中常常發(fā)生IL-10主導(dǎo)的Th免疫應(yīng)答模式失衡的結(jié)局，Th1、Th2因子均出現(xiàn)過(guò)表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，血漿中，其他3組的IL-10與IL-4、IL-12呈正相關(guān)，與IFN-γ也呈弱負(fù)相關(guān)。提示血液中IL-10在HIV/AIDS合并CM與HIV/AIDS合并結(jié)核分枝桿菌感染、HIV/AIDS感染、CM介導(dǎo)的免疫應(yīng)答所產(chǎn)生的機(jī)制較為相似，但機(jī)制的復(fù)雜性仍需挖掘。

HIV/AIDS合并CM患者機(jī)體內(nèi)同時(shí)存在炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)，共同刺激IL-10，使其水平明顯升高。IL-10主要是通過(guò)降低效應(yīng)T細(xì)胞應(yīng)答來(lái)使機(jī)體持續(xù)處于HIV感染狀態(tài)，還可阻礙HIV復(fù)制及降低慢性免疫活化的免疫效應(yīng)，加重病情，增加患者病死率[14]。本研究結(jié)果顯示，腦脊液中，A組、B組、D組的IL-10與IL-4呈正相關(guān)。提示IL-10在此新型隱球菌或結(jié)核分枝桿菌介導(dǎo)下，其作用于神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的表面，擴(kuò)大炎性反應(yīng)，激活T淋巴細(xì)胞，使IL-4增多[15]。表明腦脊液中IL-10在HIV/AIDS合并CM及HIV/AIDS合并TB中介導(dǎo)的Th因子所產(chǎn)生的機(jī)制較為相似?？梢?jiàn)，自身免疫功能對(duì)CM的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后具有重要影響，維持機(jī)體最佳Th1/Th2免疫應(yīng)答平衡對(duì)控制疾病進(jìn)展具有重要意義。

綜上所述，HIV/AIDS合并CM患者機(jī)體IL-10水平有一定升高，在持續(xù)感染中，既可發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用，又可發(fā)揮免疫抑制作用，并且IL-10可通過(guò)多種機(jī)制對(duì)疾病產(chǎn)生影響，臨床還需做進(jìn)一步研究。但需要說(shuō)明的是，本研究為了校正Pearson相關(guān)分析可能出現(xiàn)偽相關(guān)，根據(jù)血漿、腦脊液中IL-10水平從各組篩選低值及高值病例各僅14例進(jìn)行分析歸納，所推斷出的結(jié)論可能欠精確，缺乏較強(qiáng)的說(shuō)服力，下一步可采取多中心研究或延長(zhǎng)研究周期，最終達(dá)到擴(kuò)大研究病例的目的。