黃精炭疽病病原鑒定及藥劑篩選

桑維鈞　宋寶安　練啟仙　李小霞　熊繼文　曾令祥

摘要根據(jù)病原菌形態(tài)特征和致病性等特點(diǎn)，黃精炭疽病的病原菌鑒定為半知菌亞門刺盤孢屬的Colletotrichumclrczl'lan~(Perk．)Vogl。供試的5種殺菌劑對(duì)病原菌菌絲的抑制作用結(jié)果表明，64％(口惡)霜·錳鋅WP、75％代森錳鋅WP濃度為800μg／mL以上時(shí)抑菌率達(dá)100％；90％三乙膦酸鋁WP濃度為1125μg／mL時(shí)的抑菌率為96．3％，15％三唑酮WP濃度為188μg/mL時(shí)抑菌率為85．2％，69％烯酰嗎啉WP濃度為l 380μg/mL時(shí)抑菌率為51．9％，863．g／mL時(shí)抑菌率僅35．2％。

關(guān)鍵詞黃精炭疽?。徊≡b定；藥劑篩選

中圖分類號(hào)S 435．672

近年來貴州省重點(diǎn)發(fā)展的地產(chǎn)中藥材主要有石斛、半夏、天冬、黃精、淫羊藿、草烏、白術(shù)、白芍、玉竹、吳茱萸等。黃精(Polygonatumsibiricum Red．)是百合科(Liliaceae)多年生草本植物，在貴州俗稱“老虎姜”，興義稱為“觀音臺(tái)”，解放前均為自產(chǎn)自銷，由于品質(zhì)優(yōu)良，解放后遠(yuǎn)銷江蘇、浙江等地。黃精具有提高免疫力、降血脂、降血糖、抗菌、抗腫瘤、抗病毒等作用，在研制新藥和開發(fā)保健品方面有廣泛發(fā)展前景。由于野生黃精產(chǎn)量低，近年來又被大量采挖，不能滿足市場(chǎng)需要，目前在貴州鳳崗、湄潭、興義、大方等地有大面積栽培。然而，隨著栽培面積的不斷增加，病蟲害發(fā)生逐年加重。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，炭疽病是黃精上的一種重要病害，主要危害葉片及莖桿，病重時(shí)造成全株枯死，地下部分腐爛，嚴(yán)重影響了黃精的生產(chǎn)，但對(duì)該病的研究尚無(wú)系統(tǒng)的報(bào)道。2003—2005年，從基地采集病株標(biāo)樣分離、鑒定，并進(jìn)行了殺菌劑的室內(nèi)篩選試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1材料與方法

1．1病害發(fā)生特點(diǎn)調(diào)查

調(diào)查并采集貴州省鳳崗縣、湄潭縣、大方縣、興義市等中藥材基地的黃精炭疽病的典型癥狀標(biāo)本，記錄發(fā)病特點(diǎn)和病株率、病葉率等。

1．2病原菌鑒定

1．2．1分離培養(yǎng)

在對(duì)自然發(fā)病組織上的病菌鏡檢觀察的基礎(chǔ)上進(jìn)行組織分離。剪取病健交界處約5 mm的組織，先在70％的酒精中浸幾秒鐘，再用0．1％的升汞滅菌2min，用無(wú)菌水洗3次，然后置于PDA上培養(yǎng)，長(zhǎng)出菌絲后，取菌落邊緣菌絲再轉(zhuǎn)置PDA上培養(yǎng)。在顯微鏡下觀察菌絲、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)等形態(tài)，并測(cè)其大小。

1．2．2致病性測(cè)定

將分離純化的病菌配成懸浮液，用噴霧法接種黃精新葉，接種后用塑料薄膜保濕48h，用無(wú)菌水作為對(duì)照，定期觀察發(fā)病情況。發(fā)病后從病組織上取子實(shí)體鏡檢，描述病原菌形態(tài)特征，測(cè)其大小。將自然發(fā)病與接種發(fā)病的病原菌進(jìn)行形態(tài)比較，參考有關(guān)文獻(xiàn)確定病原菌的種類。

1．3藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

1．3．1供試藥劑

供試藥劑有90％三乙膦酸鋁可濕性粉劑(fos—etyl-aluminium，夏邑華泰化工有限公司)；69％烯酰嗎啉可濕性粉劑(dimethomorph，青島東生藥業(yè)公司)；64％(口惡)霜·錳鋅可濕性粉劑(hymexazol+man—cozeb，西安近代農(nóng)藥科技股份有限公司)；75％代森錳鋅可濕性粉劑(mancozeb，杜邦中國(guó)有限公司)；15％三唑酮可濕性粉劑(triadimefon，四川國(guó)光農(nóng)化有限公司)。

1．3．2抑菌試驗(yàn)

將待測(cè)菌株接種在PDA平板上25℃恒溫培養(yǎng)4 d，用90％三乙膦酸鋁可濕性粉劑，69％烯酰嗎啉可濕性粉劑，64％霜·錳鋅可濕性粉劑，15％三唑酮可濕性粉劑，75％代森猛鋅可濕性粉劑配制成不同濃度PDA平板，將已培養(yǎng)好的病菌用打孔器的把菌落打成直徑5 mm的菌餅，然后移到含藥PDA平板上，另設(shè)清水空白對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次，恒溫培養(yǎng)后，測(cè)量菌落直徑，計(jì)算抑菌率。計(jì)算公式如下：

抑菌率＝[(對(duì)照菌落直徑一5)－(處理菌落直徑一5)]／(對(duì)照菌落直徑一5)X100％。

2結(jié)果與分析

2．1危害特點(diǎn)

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，黃精炭疽病主要危害葉片和莖桿，發(fā)病輕的田塊，株發(fā)病率達(dá)13％，葉發(fā)病率達(dá)20％～30％，發(fā)病嚴(yán)重的田塊，株發(fā)病率達(dá)20％，葉發(fā)病率達(dá)50％以上。該病在葉片上或葉尖或葉緣產(chǎn)生圓形、半圓形、橢圓形或不規(guī)則形病斑；直徑為0．5～2．0 cm，多數(shù)為1 cm左右。病斑初期褪綠，后期整個(gè)病斑中央變?yōu)辄S白色，病斑外圍呈黃褐色，濕度大時(shí)，病斑擴(kuò)展迅速，嚴(yán)重時(shí)造成葉片大量枯死。莖部受害后形成褐色稍凹陷的病斑，其上產(chǎn)生大量黑色小點(diǎn)，后期莖桿枯死。

2．2病原菌鑒定

2．2．1病原菌的致病性測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)果表明，接種發(fā)病植株的癥狀與田間植株癥狀相同；取病部組織分離，在PDA上培養(yǎng)，鏡檢病原菌，其分生孢子盤和分生孢子的形態(tài)特征和田間病株上的病原菌一致。

2．2．2病原菌的形態(tài)及鑒定

鏡檢病原菌，分生孢子盤為淺褐色，直徑170μm左右；產(chǎn)生大量剛毛，剛毛深褐色，具隔，表面光滑，頂端尖，長(zhǎng)為90—295 pm，放射狀排列于分生孢子盤上；分生孢子梗棒形或圓柱形，密生于分生孢子盤上；分生孢子鐮刀形，無(wú)色，單胞，兩端略尖，大小為(17．3～27．6)pmX(2．4～3．6)pm，內(nèi)含顆粒狀物質(zhì)，有油球。純化的菌株在PDA上，菌落邊緣整齊，菌絲體較發(fā)達(dá)，毛絨狀，初期白色，后期基質(zhì)變?yōu)楹诤稚?。根?jù)病原菌的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性和致病性測(cè)定結(jié)果，參考有關(guān)文獻(xiàn)，確定引起該病的病原菌為Colletotrichumcircinans(Berk．)Vogl．。

2．3藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

由表1可以看出，對(duì)黃精炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)有較強(qiáng)抑制作用的殺菌劑有64％(口惡)霜·錳鋅可濕性粉劑和75％代森猛鋅可濕性粉劑，在兩種濃度下對(duì)病菌的抑菌率均達(dá)100％；90％三乙膦酸鋁可濕性粉劑為85％以上，15％三唑酮可濕性粉劑和69％烯酰嗎啉的抑菌率相對(duì)較低。

3結(jié)論與討論

由于省內(nèi)各藥材基地的中藥材栽培大都是單一品種成片種植，隨著栽培時(shí)間的延長(zhǎng)，一旦有侵染性病害發(fā)生，條件具備時(shí)往往會(huì)逐年加重，造成大面積感病。因此，針對(duì)我省黃精炭疽病的發(fā)生特點(diǎn)，在進(jìn)行殺菌劑的室內(nèi)篩選試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，有待在病區(qū)進(jìn)行防治試驗(yàn)以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果，并結(jié)合其他防治技術(shù)的應(yīng)用，提前預(yù)防，以減輕該病的危害。