養(yǎng)殖場(chǎng)非洲豬瘟病毒變異株防控技術(shù)指南

1 病毒特點(diǎn)

非洲豬瘟病毒變異株包括基因缺失株、自然變異株、自然弱毒株等。與2018年傳入的非洲豬瘟病毒毒株相比，變異株基因組序列發(fā)生不同程度的改變，包括核苷酸突變、缺失、插入或短片段替換等，部分變異株失去紅細(xì)胞吸附活性。

從生物學(xué)特性看，部分病毒單基因缺失株的致病力與感染劑量呈相關(guān)性，病毒雙基因制發(fā)失株感染豬可間歇性排毒，病毒可以水平傳播。部分失去紅細(xì)胞吸附活性的變異株具有水平傳播能力，高劑量感染能引起亞急性或慢性病程，部分豬只死亡，低劑量感染引起非致死性的持續(xù)感染。從傳播性看，非洲豬瘟病毒變異株臨床傳播性與經(jīng)典毒株無(wú)明顯區(qū)別。從臨床特點(diǎn)看，臨床癥狀不典型，與2018 年傳入毒株有明顯差異，常表現(xiàn)為采食量下降、體表發(fā)紅、皮膚壞死、淋巴結(jié)腫大、肺炎等癥狀；顯微鏡下多器官特別是淋巴結(jié)和堅(jiān)臟可見(jiàn)伴有梗塞和血栓的壞死和出血區(qū)，以及慢性纖維化病變。從易感性看，妊娠母豬和育肥豬的易感性無(wú)明顯差異，妊娠母豬群體生產(chǎn)性能受影響較大。病毒感染潛伏期過(guò)后，母豬表現(xiàn)反復(fù)發(fā)燒，不食等癥狀，部分母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、高比例死胎、乳房結(jié)痂等癥狀；初生仔豬活力差；育肥群靜止?fàn)顟B(tài)下的癥狀不顯著，應(yīng)激情況下可排毒，表現(xiàn)皮膚壞死，關(guān)節(jié)腫大，脾臟腫大、壞死等臨床癥狀和剖檢變化。

2 防控難點(diǎn)

2.1 隱蔽性強(qiáng) 非洲豬瘟病毒變異株感染潛伏期長(zhǎng)，病豬初期無(wú)臨床表現(xiàn)或臨床癥狀不典型，致死率較低，不易被識(shí)別。感染變異株的豬群口腔排毒滯后，排毒不規(guī)律，采樣檢測(cè)很難及時(shí)發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致豬群隱性帶毒并間歇性排毒，很難做到精準(zhǔn)清除，并且經(jīng)多次轉(zhuǎn)群、并群等操作，感染源可能遍布多棟豬舍，呈現(xiàn)多點(diǎn)同時(shí)發(fā)病的特點(diǎn)。實(shí)踐中，常有豬場(chǎng)在實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)時(shí)Ct 值較高，但因豬只臨床表現(xiàn)健康，未能及時(shí)采取有效措施，致使豬只在應(yīng)激和混合感染等因素誘發(fā)下發(fā)病。

2.2 檢測(cè)難度大 非洲豬瘟病毒變異株感染前期病毒滴度較低，感染后產(chǎn)生抗體延遲，常規(guī)鑒別診斷方法有局限性，在出現(xiàn)變異株的情況下，容易造成誤判。此外，過(guò)高頻次的全群普查也會(huì)增加交叉污染或擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)。因此如果監(jiān)測(cè)方案和檢測(cè)方法選擇不當(dāng)，有可能造成病毒傳播和擴(kuò)散。

3 防控措施

3.1 加強(qiáng)臨床巡視 做好技術(shù)培訓(xùn)，提高飼養(yǎng)人員識(shí)別能力，一旦發(fā)現(xiàn)豬只出現(xiàn)嗜睡、輕觸不起、采食量減少、拱料不食、發(fā)熱、皮膚發(fā)紅、關(guān)節(jié)腫脹、壞死、咳喘、腹式呼吸，育肥豬死淘率增高，母豬流產(chǎn)或出現(xiàn)死胎、木乃伊胎等可疑臨床表現(xiàn)時(shí)，第一時(shí)間采樣檢測(cè)。有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)可使用紅外線熱成像儀對(duì)所有豬群進(jìn)行每日一次的體溫監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)體溫異常豬只，及時(shí)進(jìn)行采樣檢測(cè)。通過(guò)每日體溫篩查，減少豬場(chǎng)采樣頻次，達(dá)到降本增效目的。

3.2 優(yōu)化監(jiān)測(cè)方案 針對(duì)變異株的病原特點(diǎn)，優(yōu)化監(jiān)測(cè)方案。每日開(kāi)展豬場(chǎng)場(chǎng)內(nèi)巡欄，監(jiān)測(cè)豬群臨床癥狀和體溫變化。定期開(kāi)展場(chǎng)外環(huán)境采樣檢測(cè)。每周對(duì)豬群進(jìn)行病原和抗體監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)采樣時(shí)可對(duì)全群進(jìn)行20%～30%比率的抽樣檢測(cè)。在豬群進(jìn)行疫苗接種、轉(zhuǎn)群、云勢(shì)，或母豬分娩后，開(kāi)展抽樣檢測(cè)。一旦豬只出現(xiàn)疑似臨床癥狀，立即采樣檢測(cè)。

3.1.1 育肥豬群 豬場(chǎng)發(fā)現(xiàn)臨床異常豬只后，立即對(duì)育肥豬群進(jìn)行大欄棉繩口腔液采樣，及時(shí)送檢進(jìn)行病原檢測(cè)。

3.1.2 產(chǎn)房 在母豬分免后，采集臍帶血、胎衣或胎衣等樣品以及母豬口鼻拭子聯(lián)合尾根血混樣樣品進(jìn)行病原檢測(cè)。

3.1.3 病死豬 在確保養(yǎng)殖場(chǎng)丙生物安全的情況下，及時(shí)采集病死豬淋巴結(jié)、肺臟等樣品在當(dāng)天送檢。有研究報(bào)道非洲豬瘟病毒變異株在豬淋巴結(jié)、且，肺臟病毒載量最高，采集相應(yīng)組織樣品進(jìn)行檢測(cè)，可提高檢出率。

3.1.4 環(huán)境 定期對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)料槽、風(fēng)機(jī)等進(jìn)行環(huán)境樣品要測(cè)。國(guó)家非洲豬瘟區(qū)域?qū)嶒?yàn)室（廣州）研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)料槽樣品的病毒核酸檢出時(shí)間早于豬只出現(xiàn)異常臨床癥狀的時(shí)間。

3.3 科學(xué)采樣檢測(cè) 國(guó)家非洲豬瘟區(qū)域?qū)嶒?yàn)室（廣州）研究發(fā)現(xiàn)，采取口鼻拭子聯(lián)合尾根血混樣，或口鼻拭子聯(lián)合腹股溝淋巴結(jié)穿刺混樣的檢測(cè)采樣方法，可提高病原檢出率。同時(shí)還應(yīng)當(dāng)采集臨床異常豬的前腔靜脈血或尾靜脈血，分離血清后進(jìn)行非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)。

3.3.1 采樣 使用聚丙烯材質(zhì)拭子，避免作用頭部為棉花制品的拭子、含海藻酸鈣拭子以及木柄拭子，防止棉花纖維對(duì)蛋白質(zhì)吸附影響病毒洗脫效果及抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)影響檢測(cè)結(jié)果。

3.3.2 樣品保存 樣品保存管應(yīng)使用無(wú)菌、對(duì)核酸無(wú)吸附作用的螺旋蓋塑料管。每個(gè)樣品管應(yīng)再套一個(gè)樣品袋防止樣品泄露和污染。新鮮采集的臨床標(biāo)本應(yīng)在2～8 ℃條件下，在采集后2～4 h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。用于病毒分離和核酸檢測(cè)的樣品應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，能在24 h內(nèi)檢測(cè)的樣品可置于4 ℃保存；24 h內(nèi)無(wú)法檢測(cè)的樣品則應(yīng)當(dāng)置于-70 ℃或以下保存（如無(wú)-70 ℃保存條件下，則于-20 ℃冰箱暫存）。

3.3.3 病原檢測(cè)方法 可采用非洲豬瘟病毒（P72/CD2v/MGF）三重實(shí)時(shí)熒光定量PCR 方法，也可采用發(fā)明專(zhuān)利CN112646934B提供的非洲豬瘟病毒（P72/EGFP/mCherry）三重監(jiān)察部時(shí)熒光定量PCR 方法檢測(cè)病毒核酸。對(duì)非常見(jiàn)基因變異組臨床癥狀特殊的病例，需進(jìn)一步送相關(guān)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行全基因組測(cè)序鑒別。

3.3.4 抗體檢測(cè)方法 采用《非洲豬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 18648）規(guī)定的間接ELISA、阻斷ELISA等方法進(jìn)行抗體檢測(cè)。

3.4 強(qiáng)化生物安全防護(hù)措施 我國(guó)非洲豬瘟防控實(shí)踐表明，落實(shí)好常態(tài)化防控措施能有效阻止非洲豬瘟病毒感染。針對(duì)非洲豬瘟病毒變異株的流行特點(diǎn)，要持續(xù)從人、車(chē)、物、今朝等方面強(qiáng)化防控措施。

3.4.1 人員管理 人員在進(jìn)場(chǎng)前3 d不得去菜市場(chǎng)、豬場(chǎng)、屠宰廠（場(chǎng)）、無(wú)害化處理廠（場(chǎng)）及動(dòng)物產(chǎn)品交易市場(chǎng)等生物安全高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)所。根據(jù)不同區(qū)域生物安全等級(jí)進(jìn)行人員管理，人員遵循單向流動(dòng)原則，禁止逆向進(jìn)入生物安全更高級(jí)別區(qū)域。

進(jìn)入辦公、生活區(qū)域人員要更換干凈消毒過(guò)的衣服及鞋靴，洗手消毒并有效淋浴后，方可進(jìn)場(chǎng)，淋浴時(shí)必須注意指甲的清洗。實(shí)踐表明，一次有效的淋?。ㄣ逶÷逗拖窗l(fā)水淋浴5 min以上）可以消除人員體表攜帶的病毒。隨身物品經(jīng)消毒后入場(chǎng)，嚴(yán)禁攜帶豬肉制品入場(chǎng)。未經(jīng)允許，禁止進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)。進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)前，人員要在生產(chǎn)區(qū)淋浴間元澡，所攜帶物品須經(jīng)生產(chǎn)區(qū)物資消毒間消毒后，方可帶入。

進(jìn)入豬舍的流程：人員按照規(guī)定路線進(jìn)入各自工作區(qū)域，禁止進(jìn)入未被授權(quán)的工作區(qū)域。每棟豬舍入口處都應(yīng)該放置消毒盆（桶）、洗手消毒盆。進(jìn)出豬舍前注意洗水，清洗、消毒工作靴，程序?yàn)橄人⑾葱?、鞋面污物，后在腳踏消毒盆（桶）浸泡消毒。人員離開(kāi)生產(chǎn)區(qū)，將工作服放置含有消毒劑的桶中浸泡消毒。嚴(yán)禁飼養(yǎng)人員互串宿舍。

3.4.2 車(chē)輛管理 豬場(chǎng)車(chē)輛管理主要包括外來(lái)運(yùn)豬車(chē)、飼料運(yùn)送車(chē)、收集死豬、豬糞車(chē)、私家車(chē)等外部車(chē)輛；內(nèi)部運(yùn)豬車(chē)、拉料車(chē)、運(yùn)死豬、豬糞車(chē)等內(nèi)部車(chē)輛。外部車(chē)輛進(jìn)入場(chǎng)區(qū)需經(jīng)徹底清洗、消毒、烘干。

3.4.2.1 外來(lái)運(yùn)豬車(chē)管理：外來(lái)運(yùn)豬車(chē)應(yīng)為在畜牧獸醫(yī)部門(mén)一夜情的備案車(chē)輛，經(jīng)過(guò)清洗、消毒及干燥后，方可接近豬場(chǎng)出豬臺(tái)或中轉(zhuǎn)站（臺(tái)）。運(yùn)輸后對(duì)車(chē)輛所經(jīng)道路進(jìn)行徹底消毒。

3.4.2.2 飼料運(yùn)送車(chē)管理：飼料運(yùn)送車(chē)停放在場(chǎng)區(qū)外安全距離，對(duì)車(chē)體和車(chē)輪進(jìn)行消毒，卸下飼料后，由場(chǎng)內(nèi)人員對(duì)飼料外包裝表面消毒。建議設(shè)置中轉(zhuǎn)料塔、場(chǎng)內(nèi)飼料運(yùn)輸車(chē)，飼料可從場(chǎng)外直接輸送到中轉(zhuǎn)料塔，運(yùn)輸車(chē)輛不必進(jìn)入豬場(chǎng)內(nèi)。

3.4.2.3 內(nèi)部運(yùn)豬車(chē)管理：選擇場(chǎng)內(nèi)空間相對(duì)獨(dú)立的地點(diǎn)進(jìn)行車(chē)輛洗消和停放。運(yùn)豬車(chē)使用完畢后立即到指定地點(diǎn)清洗、消毒及干燥。流程包括：清洗，確保表面無(wú)污物；清潔劑處理有機(jī)物；消毒劑噴灑消毒；充分干燥。

3.4.2.4 死豬及豬糞運(yùn)輸車(chē)管理：死豬及豬糞運(yùn)輸車(chē)專(zhuān)場(chǎng)專(zhuān)用。交接死豬/豬糞時(shí)，避免與外部車(chē)輛接觸，交接地點(diǎn)距離場(chǎng)區(qū)大于100～200m。使用后，車(chē)輛及時(shí)清洗、消毒及干燥，并消毒車(chē)輛所經(jīng)道路。

3.4.3 物資管理 豬場(chǎng)物資管理主要包括食材、生活物資、獸藥疫苗、飼料、設(shè)備以及其他入場(chǎng)物資的管理。

3.4.3.1 入場(chǎng)食材管理：在入場(chǎng)食材的選取上，要求食材生產(chǎn)、流通背景清晰、可控，無(wú)病原污染；禁止生鮮豬肉及制品入場(chǎng)；蔬菜和瓜果類(lèi)食材無(wú)泥土、無(wú)爛葉，禽類(lèi)和魚(yú)類(lèi)食材無(wú)血水，經(jīng)食品消毒處理后入場(chǎng)。進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)的飯菜，應(yīng)由豬場(chǎng)廚房提供熟食，生鮮食材禁止進(jìn)入。飯菜容器經(jīng)消毒后進(jìn)入。

3.4.3.2 入場(chǎng)獸藥疫苗管理：嚴(yán)格掃行進(jìn)場(chǎng)消毒，疫苗及有溫度要求的藥品，拆掉外層包裝，使用消毒劑浸泡消毒后再轉(zhuǎn)入儲(chǔ)存或立即使用。其他常規(guī)藥品，拆掉外層包裝，經(jīng)烘干、或臭氧、或熏蒸消毒，轉(zhuǎn)入儲(chǔ)存或立即使用。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)或規(guī)程儲(chǔ)存、使用疫苗及藥品，疫苗瓶和注射器等醫(yī)療廢棄物及時(shí)無(wú)害化處理。

3.4.3.3 飼料管理：禁止從疫區(qū)購(gòu)買(mǎi)玉米等飼料原料，確保飼料無(wú)病原污染。了解購(gòu)進(jìn)的全價(jià)飼料是否含有動(dòng)物源性飼料添加劑，避免飼料中添加動(dòng)物源性飼料添加劑，特別是乳豬料。飼料經(jīng)充分干燥或加熱熟化后使用，所有飼料包裝袋均充分消毒（臭氧或熏蒸）。禁止飼喂餐有別于剩余物。

3.4.4 豬群管理 避免場(chǎng)外散養(yǎng)或放養(yǎng)：避免場(chǎng)外散養(yǎng)和放養(yǎng)模式，防止家豬與野豬接觸，采食丟棄的垃圾食物。實(shí)施“全進(jìn)全出”管理制度：“全進(jìn)全出”模式是豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理、減少疫病循環(huán)傳播的核心。

3.4.4.1 引進(jìn)豬只管理：堅(jiān)持自繁自養(yǎng)。引種時(shí)要嚴(yán)格采取檢測(cè)和隔離措施。引種前需經(jīng)過(guò)非洲豬瘟等重大動(dòng)物疫病檢測(cè)，抗原、抗體檢測(cè)結(jié)果合格，可進(jìn)行場(chǎng)外或場(chǎng)內(nèi)特定區(qū)域隔離檢疫，確認(rèn)方全方可引種。對(duì)僅飼養(yǎng)育肥的豬場(chǎng)，全部空欄消毒后再購(gòu)入仔豬，應(yīng)到非疫區(qū)的有良好聲譽(yù)和信用的正規(guī)養(yǎng)殖場(chǎng)，經(jīng)官方獸醫(yī)檢疫合格后方可購(gòu)進(jìn)，密切關(guān)注豬只健康情況。

3.4.4.2 每日臨床巡視排查：做好非洲豬瘟的日常巡視排查，便于早發(fā)現(xiàn)、早檢測(cè)、早處理。養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)要加強(qiáng)學(xué)習(xí)和掌握非洲豬瘟防控知識(shí)，每天進(jìn)行健康檢查。一旦發(fā)現(xiàn)豬只精神不好，厭食，體溫升高，皮膚發(fā)紅，皮膚壞死斑塊，關(guān)節(jié)腫大，母豬流產(chǎn)、乳房結(jié)痂等臨床癥狀，發(fā)病、死亡豬只增多的情況，可采集口腔液、糞便拭子等送檢，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性要及時(shí)向當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)部門(mén)報(bào)告。

3.4.4.3 豬只轉(zhuǎn)運(yùn)管理：豬只轉(zhuǎn)運(yùn)一般包括斷奶豬轉(zhuǎn)運(yùn)、淘汰豬轉(zhuǎn)運(yùn)、育肥豬出欄轉(zhuǎn)運(yùn)以及后備豬轉(zhuǎn)運(yùn)。根據(jù)是否自有和可控，將運(yùn)輸車(chē)輛分為兩類(lèi)：自有可控車(chē)輛可在豬場(chǎng)出豬間（臺(tái)）進(jìn)行豬只轉(zhuǎn)運(yùn)，及非自有車(chē)輛不可接近豬場(chǎng)出豬間（臺(tái)），由自有車(chē)輛將豬只轉(zhuǎn)運(yùn)到中轉(zhuǎn)站（臺(tái)）交接。

3.4.4.4 售豬管理：禁止生豬販運(yùn)人員、承運(yùn)人員等外來(lái)人員，以及外來(lái)拉豬車(chē)輛進(jìn)入養(yǎng)殖場(chǎng)。避免場(chǎng)內(nèi)外人員交叉。豬場(chǎng)趕豬人員嚴(yán)禁接觸出豬間（臺(tái)）靠近場(chǎng)外生豬車(chē)輛的一側(cè)，外來(lái)人員禁止接觸出豬間（臺(tái)）靠近場(chǎng)內(nèi)一側(cè)。售豬前、后，立即對(duì)出豬間（臺(tái)）、停車(chē)處、趕豬通道和裝豬區(qū)進(jìn)行全面清洗消毒。注意硬化出豬間（臺(tái)）及附近區(qū)域、趕豬通道，方便沖洗、消毒，采取防鼠、防雨水倒流等措施?！仓袊?guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，國(guó)家非洲豬瘟區(qū)域?qū)嶒?yàn)室（廣州）〕■