阿昔洛韋平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定*

謝娜娜，黃玉香，林水森，謝志新

(泉州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)院，福建 泉州 362100)

阿昔洛韋(Acyclovir，ACV)又名無(wú)環(huán)鳥苷，化學(xué)名為9-(2-羥乙氧甲基)鳥嘌呤，為開環(huán)核苷類抗病毒藥，具有廣譜低毒的特點(diǎn)，主要作為抗皰疹病毒的首選藥物，臨床上廣泛用于治療水痘、帶狀皰疹病毒和單純性皰疹病毒等引起的感染[1-2]。阿昔洛韋口服吸收差，生物利用度僅為10%～20%，臨床上采用高頻率給藥方案，病人順應(yīng)性差[3-4]。

藥物的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)是反映藥物理化性質(zhì)的兩個(gè)重要參數(shù)，影響著藥物在體內(nèi)的吸收、分布及轉(zhuǎn)運(yùn)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)阿昔洛韋理化性質(zhì)的研究報(bào)道較少。本文對(duì)阿昔洛韋在不同介質(zhì)中的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)進(jìn)行了測(cè)定，以期能夠了解阿昔洛韋的溶解性能及脂溶性大小，推測(cè)阿昔洛韋的生物藥劑學(xué)分類(BCS)類型，為設(shè)計(jì)生物利用度高的阿昔洛新劑型提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫)，BSA124S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)，UV-2600紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津)，TS-2102C恒溫震蕩搖床(上海天呈實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)，TGL-16M型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器有限公司)，THZ-C恒溫振蕩器(太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠蘇州培英實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)， KQ2200B超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

阿昔洛韋對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)140 630-201 403)，阿昔洛韋原料藥(湖北威德利化學(xué)科技有限公司，批號(hào)HBW190110)，甲醇(色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，其它試劑為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC測(cè)定方法的建立

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取阿昔洛韋對(duì)照品適量，配成質(zhì)量濃度約為10 μg·mL-1的對(duì)照品水溶液。以水為空白對(duì)照，按照紫外-可見(jiàn)分光光度法，于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。紫外掃描結(jié)果顯示，阿昔洛韋在251 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此選擇251 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)[5-6]。

2.1.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(10∶90)；檢測(cè)波長(zhǎng)：251 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。取阿昔洛韋對(duì)照品溶液進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果表明,阿昔洛韋的理論塔板數(shù)不低于12000，保留時(shí)間5.764 min，對(duì)稱因子1.030，主峰與雜質(zhì)峰分離良好，分離度大于1.5，系統(tǒng)適用性良好，表明該方法可用于阿昔洛韋的測(cè)定。

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿昔洛韋對(duì)照品50.0 mg，置于50mL量瓶，加入0.4%氫氧化鈉5 mL溶解后，加純化水稀釋至刻度，搖勻，得到質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的阿昔洛韋對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取阿昔洛韋對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0 mL，置于100 mL量瓶，加純化水稀釋至刻度，搖勻，得阿昔洛韋對(duì)照品溶液。

2.1.4 線性關(guān)系考察

精密量取一定量的阿昔洛韋對(duì)照品儲(chǔ)備液，置于100 mL量瓶，用純化水稀釋至刻度，搖勻，配制成1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00、80.00 μg·mL-1的系列對(duì)照品溶液。按“2.1.2”項(xiàng)所列色譜條件進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，阿昔洛韋質(zhì)量濃度(ρ，μg·mL-1)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=33.025ρ-2.8224，r=0.999 9，結(jié)果表明，阿昔洛韋在1.25～80.00 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 精密度試驗(yàn)

取阿昔洛韋對(duì)照品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)所列色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，并記錄峰面積，計(jì)算日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)；每日測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5 d，計(jì)算日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果顯示，日內(nèi)RSD為0.12%(n=5)，日間RSD為0.23%(n=5)，RSD均小于2%，表明該測(cè)定方法精密度良好。

2.1.6 回收率試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL，分別置100 mL量瓶中，用純化水稀釋至刻度，搖勻，得低、中、高三種不同質(zhì)量濃度，每個(gè)質(zhì)量濃度各3份。按“2.1.2”項(xiàng)所列色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果顯示低、中、高質(zhì)量濃度的回收率依次為100.18%(RSD為0.22%，n=3)、99.13%(RSD為0.10%，n=3)、99.28%(RSD為0.12%，n=3)，表明該測(cè)定方法準(zhǔn)確。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取阿昔洛韋原料藥15份，分別加入水、“2.2.1”項(xiàng)配制的溶液，配制成質(zhì)量濃度為10μg·mL-1的供試品溶液，于0、4、8、12、24、48、72h按“2.1.2”項(xiàng)所列色譜條件，進(jìn)樣10 μL測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD。結(jié)果顯示RSD均小于2%，表明阿昔洛韋在上述溶液中72h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2 阿昔洛韋平衡溶解度的測(cè)定

1)溶液配制：配制pH為1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2的鹽酸溶液，pH為3.0、4.0的檸檬酸-檸檬鈉緩沖溶液，pH為4.5、5.8、6.8、7.4、8.0的磷酸鹽緩沖溶液。

2)分別取純化水及“2.2.1”項(xiàng)下配制的溶液各50 mL，置250 mL具塞錐形瓶中，加入過(guò)量的阿昔洛韋原料藥，于恒溫震蕩搖床中震蕩(37 ℃，100 r/min)72 h，平衡過(guò)程中始終保持有固體藥物存在[7-8]。平衡72 h后取出，以 2650 r/min 離心 10 min，取上清液，用 0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾后，用純化水稀釋適當(dāng)倍數(shù)，按“2.1.2”項(xiàng)所列色譜條件進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，代入“2.1.4”項(xiàng)下回歸方程計(jì)算阿昔洛韋在不同介質(zhì)中的平衡溶解度。平行做3組，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 阿昔洛韋在不同pH介質(zhì)中的平衡溶解度

同時(shí)測(cè)得阿昔洛韋在水中的溶解度為(1.02±0.01)mg·mL-1，按中國(guó)藥典藥品近似溶解度表示法顯示阿昔洛韋微溶于水。

2.3 阿昔洛韋表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定[9]

分別取純化水及“2.2.1”項(xiàng)下配制的溶液各50 mL，置250 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL正辛醇，于恒溫震蕩搖床中震蕩(25 ℃，100 r/min)24 h，使其互相飽和，靜置分層后，分離油水兩相，保存?zhèn)溆谩?/p>

取適量阿昔洛韋加入被正辛醇飽和的水相中，超聲溶解，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后作為平衡前的水相。精密量取平衡前的水相溶液10.0 mL，置50 mL螺口離心管中，再分別加入被純化水/緩沖液飽和的正辛醇5.0 mL，密蓋，于恒溫振蕩器中振蕩(37 ℃，150 r/min)24 h，使達(dá)分配平衡，取出。轉(zhuǎn)移至離心機(jī)中以 2650 r/min 進(jìn)行離心10 min，使兩相分層，取出。分離水相，用10%甲醇稀釋適當(dāng)倍數(shù)，按“2.1.2”項(xiàng)所列色譜條件進(jìn)樣10 μL，測(cè)得平衡后水相中阿昔洛韋的質(zhì)量濃度(ρ2)，平行做3組。將平衡前的水相，用流動(dòng)相稀釋適當(dāng)倍數(shù)，按“2.1.2”項(xiàng)所列色譜條件進(jìn)樣10 μL，測(cè)得平衡前水相中阿昔洛韋的質(zhì)量濃度(ρ1)。按下式計(jì)算阿昔洛韋的表觀油水分配系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 阿昔洛韋在不同介質(zhì)中的表觀油水分配系數(shù) (n=3)

3 討論

平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)可以預(yù)測(cè)藥物在體內(nèi)的吸收、分布及轉(zhuǎn)運(yùn)[9]。測(cè)定阿昔洛韋在不同pH介質(zhì)中的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)，可為阿昔洛韋新劑型的開發(fā)提供參考。

阿昔洛韋在pH 1.0～8.0介質(zhì)中的平衡溶解度測(cè)定結(jié)果表明,阿昔洛韋溶解性能與pH呈現(xiàn)相關(guān)性，在pH 1.0～2.2范圍內(nèi)，阿昔洛韋的溶解度隨pH的增大而急劇下降；在pH 2.2～pH 8.0范圍內(nèi)，溶解度變化趨勢(shì)不大。表明阿昔洛韋具有一定的弱堿性，這與阿昔洛韋結(jié)構(gòu)中鳥嘌呤上的氨基和咪唑環(huán)有關(guān)。

生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)對(duì)溶解性分類的界定為：藥物的最高單次劑量能完全溶解在不高于 250 mL 的pH 1.2～6.8水介質(zhì)中，可判定為高溶解性[10]。阿昔洛韋在治療水痘及帶狀皰疹時(shí)單次給藥劑量為0.8 g，由此確定阿昔洛韋的最高單次劑量為 800 mg。用阿昔洛韋的最高單次劑量除以所測(cè)定的溶解度，發(fā)現(xiàn)在pH2.0～8.0范圍內(nèi)均大于250 mL，為低溶解性藥物。油水分配系數(shù)可以用來(lái)預(yù)測(cè)藥物的親脂性及透過(guò)生物膜的能力[11]。正辛醇有許多與生物膜相似的性質(zhì)[12]，在藥物設(shè)計(jì)時(shí)常選用正辛醇作為模擬生物膜的有機(jī)溶劑來(lái)測(cè)定表觀油水分配系數(shù)。阿昔洛韋表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定結(jié)果顯示，阿昔洛韋在不同pH介質(zhì)中的表觀油水分配系數(shù)(PO/W)均小于1，表明阿昔洛韋的親脂性小，提示阿昔洛韋為低滲透性藥物，穿透生物膜的速率是阿昔洛韋吸收的限速步驟。綜合阿昔洛韋的平衡溶解度和油水分配系數(shù)測(cè)定結(jié)果，可初步推定阿昔洛韋為BCS第四類，即低溶解性、低滲透性藥物。