山茱萸果實發(fā)育過程中單寧物質(zhì)的分布與積累特征

陳旋勐，張 崗，高 靜，顏永剛，魏 瑤，陳 瑩

(陜西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院/陜西省秦嶺中草藥應(yīng)用開發(fā)工程技術(shù)研究中心，陜西咸陽 712046)

山茱萸為山茱萸科植物山茱萸(CornusofficinalisSieb.et Zucc.)的干燥成熟果肉，又稱山萸肉，是中國大宗道地中藥材品種之一[1]，主產(chǎn)于陜西、山西、河南、甘肅等地[2]。山茱萸味酸澀，性微溫，具有補益肝腎，收澀固脫等功效，常用于治療眩暈耳鳴、腰膝酸痛、陽痿遺精、遺尿尿頻、崩漏帶下、大汗虛脫、內(nèi)熱消渴等癥[3]。山茱萸化學(xué)成分主要包含多糖、有機酸、酚類、苷類、環(huán)烯醚萜苷、皂苷、鞣質(zhì)等[4-5]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，山茱萸在抗炎、糖尿病的防治、心腦血管的保護(hù)、神經(jīng)保護(hù)、抗腫瘤、抗氧化和抗衰老等方面均表現(xiàn)出較好的活性[5-7]。

單寧，又名單寧酸、鞣酸，是廣泛存在于植物體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物，在植物防紫外線以及抵御病原體侵害等方面都發(fā)揮著重要的作用[8]。除此之外，單寧物質(zhì)能與人體口腔黏膜蛋白結(jié)合產(chǎn)生強烈的收斂性，引起“澀感”，過量的單寧攝入后，單寧會與唾液蛋白酶及腸胃中的膳食蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)代謝紊亂，影響蛋白質(zhì)的可消化性和利用率[9]；但單寧的適量攝入對多種酶和病菌具有明顯的抑制作用[10]。單寧的存在是導(dǎo)致果實澀感的主要原因，與山茱萸果實“味酸澀，性微溫”的性味特點相一致。目前，對山茱萸的研究主要集中在炮制加工、化學(xué)成分的提取測定、質(zhì)量評價、藥理作用及臨床應(yīng)用等方面[11-14]，而對于山茱萸果實中單寧物質(zhì)的研究報道較少。廖景平等[15]在對山茱萸果皮的解剖學(xué)研究中提到單寧主要積累在山茱萸果實中果皮體積膨大的薄壁細(xì)胞，即單寧細(xì)胞中。喬琦等[16]研究發(fā)現(xiàn)山茱萸中果皮的色素塊中積累了高濃度的皂甙類和多糖等藥用成分。植物中單寧的含量會受到遺傳、環(huán)境變量以及植物成熟度等多方面的影響[17-20]。但是，對于山茱萸果實發(fā)育過程中單寧細(xì)胞發(fā)育及單寧物質(zhì)的積累形式仍缺乏深入研究，本實驗選取不同發(fā)育時期的山茱萸果實作為研究對象，對山茱萸果實發(fā)育過程中單寧物質(zhì)的分布、單寧含量和單寧細(xì)胞數(shù)目變化以及單寧物質(zhì)積累特點進(jìn)行探究，為深入研究山茱萸果實澀味調(diào)控機制奠定實驗基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

山茱萸果實為2018年3月至今采自于陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物園15年生的健康山茱萸植株，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)顏永剛教授鑒定為山茱萸科山茱萸屬的山茱萸。

1.2 實驗方法

1.2.1 果實形態(tài)觀察在光學(xué)顯微鏡Nikon SMZ745T下對山茱萸果實發(fā)育過程中果實的外部形態(tài)及內(nèi)部結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行觀察并拍照記錄。

1.2.2 石蠟切片法使用50% FAA固定液對所采集的山茱萸果實固定，梯度酒精逐級脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋，Lecia RM2135型手搖式切片機切片，切片厚度8 μm～10 μm，在40 ℃的電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘片，番紅-固綠染色，中性樹膠封片，在Leica DM750 型光學(xué)顯微鏡下觀察，并拍照記錄。

1.2.3 組織化學(xué)染色單寧顯色反應(yīng)：三氯化鐵中的鐵離子能夠與單寧中的酚羥基結(jié)合，發(fā)生顯色反應(yīng)。取脫蠟后的山茱萸果實縱切片，在三氯化鐵溶液中浸染25～30 min，用Leica DM750 型顯微鏡觀察染色結(jié)果，并拍照記錄。用以鑒別單寧物質(zhì)在山茱萸果實中的分布。

過碘酸-Schiff試劑在組織學(xué)上可以用來檢測組織中的多糖物質(zhì)，高碘酸是一種氧化劑，能夠?qū)⒍嗵欠肿又邢噜彽亩蓟趸啥┗?，醛基能與Schiff試劑反應(yīng)生成紅色不溶性復(fù)合物。取脫蠟后的山茱萸果實縱切片，在過碘酸液中浸染10 min，自來水沖洗10 min，Schiff試劑染色10 min，流水沖洗5 min，用Leica DM750 型顯微鏡觀察染色結(jié)果，并拍照記錄。

1.2.4 透射電鏡法使用Adobe Photophoto CC作圖示意山茱萸果實透射電鏡的取樣部位，將不同發(fā)育時期山茱萸果實中果皮部分果肉(圖1所示區(qū)域)切成2～3 mm的小塊，使用2.5%的戊二醛固定液(pH=7.0的磷酸緩沖液配置)4 ℃預(yù)固定24 h，然后使用磷酸緩沖液漂洗3次，每次20 min，0.5%的鋨酸(pH=7.0的磷酸緩沖液配置)固定2 h，用磷酸緩沖液漂洗3次，每次20 min，梯度酒精脫水，環(huán)氧丙烷過渡，Epon812包埋劑包埋，60 ℃烘箱聚合24 h,使用Leica EM UC7超薄切片機切片，切片厚度為1～2 μm，制成半薄切片，經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色，Leica DM750顯微鏡觀察并拍照。根據(jù)半薄切片定位情況，使用Leica EM UC7超薄切片機對包埋好的樣品進(jìn)行切片，切片厚度為60～80 nm,經(jīng)醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛雙染色,在日立透射電子顯微鏡H-7650下觀察并拍照。

1.2.5 含量測定可溶性單寧含量測定采用Folin-Ciocaileu法，參考Ikegami[21]和張凡[22]等的方法。取5.0 g山茱萸果肉，以80%甲醇溶液為提取液，按照樣品質(zhì)量(g)：提取液體積(mL)為1∶4的比例處理樣品，充分勻漿后轉(zhuǎn)入EP管中；5 000 r/min，常溫離心10 min，取上清液至50 mL容量瓶中，以20 mL 80%甲醇清洗殘渣，重復(fù)上述步驟，在50 mL容量瓶中定容；隨后移至500 mL的容量瓶中定容將其稀釋10倍；取1 mL樣品，加入7.5 mL蒸餾水和0.5 mL酚類試劑，3 min后加入1 mL飽和碳酸鈉，1 h后在746 nm下測定吸光度，由單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計算對應(yīng)單寧含量。

1. 外果皮；2. 中果皮；3. 內(nèi)果皮；4. 種子圖1 透射電鏡取樣部位示意圖1. Exocarp; 2. Mesocarp; 3. Endocarp; 4. SeedsFig.1 Schematic diagram of sampling position of transmission electron microscope

不溶性單寧含量測定參考Oshida等[23]的方法。用1%(v/v)HCl-甲醇溶液溶解測定完可溶性單寧含量的果肉殘渣，靜置30 min，5 000 r/min、常溫離心10 min；取上清液，用1%(v/v)HCl-甲醇溶液再次清洗殘渣，重復(fù)以上步驟；最后取上清液定容到50 mL，后續(xù)測定步驟與可溶性單寧含量測定方法相同。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析用Excel 2016、Graphpad prism 8、SPSS 25.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 果實形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察

對山茱萸果實的外部形態(tài)以及內(nèi)部結(jié)構(gòu)觀察并結(jié)合果實性狀測定結(jié)果，將山茱萸果實的發(fā)育劃分為幼果期、中果期、成熟期3個時期。

幼果期(開花至花后90 d)果皮顏色為綠色，果實縱、橫徑差異明顯，果實縱徑最大為14.6392 mm，果實橫徑最大為6.4728 mm (圖2)；中果期(花后90～180 d)果皮顏色在較長一段時間內(nèi)為綠色，后期果皮顏色由綠轉(zhuǎn)黃，果實橫徑較幼果期末期增加了2.3828 mm(圖2)；成熟期(花后180～210 d)果皮顏色由黃色逐步轉(zhuǎn)為紅色，全紅之后果皮顏色進(jìn)一步加深，果實縱、橫徑差異較小，果實縱徑保持在14.3076～14.6376 mm，果實橫徑8.6656～8.8556 mm (圖2)。

2.2 單寧物質(zhì)的組織化學(xué)定位

山茱萸果實為核果，主要由果皮和種子兩部分組成，果皮由外到內(nèi)依次是外果皮、中果皮和內(nèi)果皮(圖3,A)。山茱萸果實外果皮由一層排列整齊的矩形細(xì)胞組成。中果皮體積膨大的薄壁細(xì)胞中積累的棕色物質(zhì)經(jīng)三氯化鐵染色后顯藍(lán)黑色 (圖3, C)，表明含有單寧；經(jīng)過碘酸-Schiff試劑反應(yīng)顯色呈紫紅色(圖3,D)，表明含有多糖。在山茱萸果實內(nèi)果皮中有一些細(xì)胞體積較大，與周圍細(xì)胞差異明顯，即異細(xì)胞[15]，它是由內(nèi)果皮特化的細(xì)胞發(fā)育而來的，縱切面觀其形態(tài)呈橢圓形或圓形。

2.3 單寧含量及單寧細(xì)胞數(shù)目變化

對不同發(fā)育時期山茱萸果實縱切觀察結(jié)果如下：

幼果期(開花至花后90 d)：幼果期早期山茱萸果實中果皮薄壁細(xì)胞大小約為0.0119 mm，尚未發(fā)現(xiàn)有單寧物質(zhì)的積累(圖4,A)。隨著果實進(jìn)一步發(fā)育，中果皮體積膨大的薄壁細(xì)胞中逐漸開始積累單寧物質(zhì)(圖4,B)，單寧物質(zhì)經(jīng)番紅-固綠對染呈紫紅色，單寧細(xì)胞數(shù)目也不斷增多(圖4,B-D)。幼果期總單寧和可溶性單寧含量變化呈增長趨勢，不溶性單寧含量變化不明顯(圖5)。其中開花后30～60 d總單寧含量平均日增長速率為48.3836%,可溶性單寧含量平均日增長速率為48.222%；花后60～90 d，總單寧含量的平均日增長速率為8.455%,可溶性單寧含量平均日增長速率為9.5370%。

圖2 不同發(fā)育時期山茱萸果實形態(tài)結(jié)構(gòu)變化Fig.2 Changes of morphological structure of C. officinalis fruit at different development stages

Ep. 外果皮；Me. 中果皮；En. 內(nèi)果皮；Pa. 薄壁細(xì)胞；TC. 單寧細(xì)胞；Id. 異細(xì)胞；黑色箭頭→指示單寧細(xì)胞；A. 番紅-固綠染色，示山茱萸果實縱切面結(jié)構(gòu)；B. 未染色，示陰性對照；C. 三氯化鐵染色，示單寧物質(zhì)染色結(jié)果呈藍(lán)黑色；D. PAS反應(yīng)，示單寧物質(zhì)染色結(jié)果呈紫紅色圖3 山茱萸果實中單寧細(xì)胞分布Ep. Epicarp; Me. Mesocarp; En. Endocarp; Pa. Parenchyma cell; TC. Tannin cell; Id. Idioblast; Black arrow indicates tannin cell；A. Saffron-fast green staining shows the longitudinal section structure of C. officinalis fruit; B. No staining, showing negative control; C. FeCl3 staining showed that tannin were black-blue; D. PAS reaction showed that tannin was purplish redFig.3 Tannin cell distribution in C. officinalis fruit

中果期(花后90～180 d)：山茱萸果實中單寧細(xì)胞的數(shù)目減少(圖4,E)?？倖螌幒筒蝗苄詥螌幍暮烤氏仍龊鬁p的趨勢，可溶性單寧的含量不斷減少(圖5)。其中花后90～150 d可溶性單寧的含量變化與不溶性單寧的含量變化呈負(fù)相關(guān)?？扇苄詥螌幒康钠骄諟p速率為9.9570%，不溶性單寧含量的平均日增速率為11.8882%；花后150～180 d總單寧含量、可溶性單寧含量和不溶性單寧含量均呈下降趨勢，其中總單寧含量的下降速率最大為17.6180%。

成熟期(花后180～210 d)：山茱萸果實單寧細(xì)胞數(shù)目減少(圖4,F)?？倖螌?、可溶性單寧和不溶性單寧的含量均呈下降趨勢(圖5)，其中，總單寧和可溶性單寧含量的平均日下降速率均大于不溶性單寧含量的平均日下降速率，總單寧、可溶性單寧和不溶性單寧平均日下降速率分別為31.3680%、23.9127%和7.4553%。

不同小寫字母表示花后天數(shù)間存在顯著差異(P<0.05)圖5 山茱萸果實發(fā)育過程中單寧含量變化Different normal letter means significant difference among days after flowering (P<0.05)Fig.5 Changes of tannin content during fruit development of C. officinalis

CW. 細(xì)胞壁；V. 液泡；N. 細(xì)胞核；M. 線粒體；Tn. 單寧物質(zhì)；VE. 囊泡；ICS. 細(xì)胞間隙；PD. 胞間連絲；C. 葉綠體；A. 單寧物質(zhì)尚未積累；B-C. 細(xì)胞質(zhì)的小液泡中積累單寧；D-E. 細(xì)胞質(zhì)和中央液泡中積累單寧；F. 細(xì)胞壁周圍有質(zhì)體存在圖6 山茱萸幼果期果實中單寧細(xì)胞發(fā)育CW. Cell wall; V. Vacuole; N. Nucleus; M. Mitochondria; Tn. Tannin substance; VE. Vesicle; ICS. Intercellular space; PD. Plasmodesmata; C. Chloroplast; A. Tannin has not yet accumulated; B-C.Tannin is accumulated in small vacuoles of cytoplasm; D-E. Tannin accumulated in cytoplasm and central vacuole; F. Plastids around the cell wallFig.6 Tannin cell development in C. officinalis fruit at young fruit stage

2.4 單寧物質(zhì)積累特點

山茱萸果實幼果期早期，中果皮薄壁細(xì)胞內(nèi)尚未觀察到單寧物質(zhì)積累(圖4,A)；超微觀察可見，薄壁細(xì)胞細(xì)胞壁厚度均勻，細(xì)胞質(zhì)在整個細(xì)胞中所占比例較大，細(xì)胞核體積較大，核仁大且明顯，細(xì)胞內(nèi)具有線粒體及體積大小不一的液泡 (圖6，A)。單寧物質(zhì)最早積累在單寧細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的小液泡中，小液泡間會發(fā)生相互融合，融合后的液泡中單寧物質(zhì)積累增多(圖6，B-C)。隨著中央大液泡形成，單寧物質(zhì)主要積累在單寧細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的小液泡以及中央大液泡中，囊泡數(shù)目較多(圖6，D)；單寧細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)育后，細(xì)胞核核膜、核仁消失，細(xì)胞壁周圍有質(zhì)體存在，單寧物質(zhì)主要積累在中央大液泡中(圖6，E-F)。

中果期時山茱萸果實中單寧細(xì)胞體積增大且形態(tài)不規(guī)則(圖4,E)，單寧細(xì)胞壁厚度與幼果期時相比有明顯差異。中果期細(xì)胞壁厚度不均，細(xì)胞壁中段厚度較小，細(xì)胞間隙較大，單寧物質(zhì)積累在體積較大的中央大液泡中(圖7，A)。單寧細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)育后，細(xì)胞壁厚度差異明顯，單寧物質(zhì)周圍線粒體數(shù)目較多(圖7，B)。中果期后期，中央大液泡液泡膜周圍出現(xiàn)一些電子致密物質(zhì)(圖7，C)。

成熟期單寧細(xì)胞壁膨大，中央大液泡液泡膜附近出現(xiàn)電子致密度較高的物質(zhì)，單寧物質(zhì)周圍線粒體數(shù)目較多(圖7，D)。

CW. 細(xì)胞壁；V. 液泡；M. 線粒體；Tn. 單寧物質(zhì)；ICS. 細(xì)胞間隙；PD. 胞間連絲；A-B. 單寧細(xì)胞壁變化；C-D. 單寧細(xì)胞中電子致密物質(zhì)圖7 山茱萸中果期(A-C)和成熟期(D)果實中單寧細(xì)胞發(fā)育CW. Cell wall; V. Vacuole; M. Mitochondria; Tn. Tannin substance; ICS. Intercellular space; PD. Plasmodesmata.; A-B. Changes of tannin cell wall; C-D. Electron dense substances in tannin cellsFig.7 Tannin cell development in C. officinalis fruit at middle fruit stage (A-C) and mature fruit stage (D)

a. 顆粒狀；b. 不規(guī)則狀；c. 板塊狀；A. 半薄切片；B、D. 石蠟切片；C、E. 超薄切片圖8 單寧積累的不同形態(tài)a. Granular; b. Irregularities; c. Plate shape; A. Semi-thin section; B and D. Paraffin section; C and E. Ultrathin section; Fig.8 Different forms of tannin accumulation

山茱萸果實中單寧物質(zhì)最早積累在細(xì)胞質(zhì)的小液泡中，隨著單寧細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)育，單寧物質(zhì)以顆粒狀(圖8，B-C)、不規(guī)則狀(圖8，B)、板塊狀(圖8， D-E)等不同形態(tài)積累在中央大液泡中，單寧物質(zhì)積累的3種不同形態(tài)不僅在植物不同發(fā)育時期存在，在同一發(fā)育時期也會同時存在(圖8，A)。

3 討 論

3.1 單寧物質(zhì)積累特性與山茱萸果實澀味變化相關(guān)

單寧是廣泛存在于植物體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物[8]，在不同植物中分布位置不同。葡萄、香蕉、石榴等果實中單寧主要積累在外果皮中[24]，而在山茱萸果實中單寧物質(zhì)主要積累在由中果皮薄壁細(xì)胞特化而來的單寧細(xì)胞中，這一研究結(jié)果與廖景平對山茱萸果實中單寧物質(zhì)分布的研究結(jié)果相一致[15]。單寧物質(zhì)經(jīng)PAS反應(yīng)顯色，表明含有多糖，單寧細(xì)胞中單寧和糖化合的這種形態(tài)有利于防止單寧對細(xì)胞質(zhì)產(chǎn)生沉淀作用[15-16]。植物能夠協(xié)調(diào)自身發(fā)育特性以加強對環(huán)境的適應(yīng)性[25-26]，Jan Lorie M. Robil等發(fā)現(xiàn)隨著寶蓮花的生長發(fā)育單寧的含量也會發(fā)生變化，寶蓮花中單寧的分布方式與植物為適應(yīng)環(huán)境的防御和繁殖特性相關(guān)[27]。山茱萸果實發(fā)育過程中單寧細(xì)胞數(shù)目的變化與單寧含量的測定結(jié)果相符，均呈先增后減的變化趨勢。這一變化趨勢可能與山茱萸果實對環(huán)境的適應(yīng)性及果實澀味變化相關(guān)。

研究表明，果實澀味強弱受到單寧細(xì)胞的體積、數(shù)目、形狀及其生長發(fā)育進(jìn)程的影響[28]。苯丙氨酸解氨酶是果實澀味物質(zhì)合成途徑中的關(guān)鍵酶和限速酶，其活性高峰多出現(xiàn)在果實的幼果期和成熟期[28]。而自然脫澀的果實中乙醛和乙醇是單寧的凝固劑，乙醛作為細(xì)胞內(nèi)不需轉(zhuǎn)運蛋白即可直接跨膜的小分子物質(zhì)，在細(xì)胞膜完整時乙醛可直接跨越液泡膜,使液泡內(nèi)可溶性單寧轉(zhuǎn)變?yōu)椴豢扇苄詥螌?從而降低果實澀味[29]。王玥等對不同品種柿果實的研究發(fā)現(xiàn):柿果實成熟過程中可溶性單寧與水溶性果膠結(jié)合是引起柿果脫澀的因素之一[30]。在山茱萸果實幼果期(花后30～60 d)總單寧和可溶性單寧含量增加，單寧細(xì)胞數(shù)目逐漸增多，這可能與單寧合成過程中相關(guān)酶活性較高有關(guān)。中果期(花后120 d)時總單寧含量達(dá)到最高，中果期早期(花后90～150 d)山茱萸果實中可溶性單寧含量減少，不溶性單寧與可溶性單寧的含量變化呈負(fù)相關(guān)，可能存在有可溶性單寧向不溶性單寧轉(zhuǎn)化的趨勢，以降低果實澀味。中果期后期(花后150～180 d)單寧細(xì)胞數(shù)目減少，總單寧、可溶性單寧和不溶性單寧的含量均降低。隨著果實發(fā)育可溶性單寧可能與細(xì)胞內(nèi)的一些物質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合體，從而使果實澀味降低[29]。成熟期時果實顏色鮮艷，總單寧、可溶性單寧以及不溶性單寧的含量均呈下降趨勢，果實的澀味降低，便于吸引鳥類等潛在的種子散布者對種子進(jìn)行傳播[31]。

3.2 單寧物質(zhì)積累的細(xì)胞學(xué)特性

單寧物質(zhì)是植物長期進(jìn)化過程中與環(huán)境相互作用的結(jié)果，在植物提高自身保護(hù)和生存競爭能力、協(xié)調(diào)與環(huán)境關(guān)系上充當(dāng)重要角色[32-33]，竹筍中單寧物質(zhì)被大液泡擠至細(xì)胞壁附近的細(xì)胞質(zhì)中，僅有少量進(jìn)入液泡，積累量少，分布稀疏[34]。而在山茱萸果實中單寧物質(zhì)早期積累在中果皮單寧細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的小液泡中，小液泡間會發(fā)生相互融合，單寧物質(zhì)積累增多，隨著單寧細(xì)胞的進(jìn)一步發(fā)育，中央大液泡中積累單寧物質(zhì)。Magda Andréia Tessmer等對‘金寶’和‘扶余’兩個柿品種中單寧物質(zhì)的研究結(jié)果表明:在柿果實的同一發(fā)育時期存在有單寧物質(zhì)積累的不同形態(tài)[35]。山茱萸果實中單寧物質(zhì)積累的時空特征與柿果實相同，山茱萸果實中單寧物質(zhì)積累的不同形態(tài)不僅在植物不同發(fā)育時期存在，在同一發(fā)育時期也會同時存在，單寧物質(zhì)主要以顆粒狀、板塊狀以及不規(guī)則狀積累在單寧細(xì)胞中。單寧物質(zhì)屬于類黃酮類次生代謝產(chǎn)物，其合成主要經(jīng)過莽草酸途徑、苯丙烷途徑和類黃酮途徑最終形成[9]?？s合單寧的合成途徑已成為研究植物次生代謝基因表達(dá)及調(diào)控的模式途徑。在擬南芥ANS/LDOX突變體tds4中縮合單寧積累量減少，囊泡運輸紊亂，不能形成中央大液泡，縮合單寧前體的合成與運輸與囊泡運輸形成液泡的過程聯(lián)系緊密[36]。山茱萸果實的單寧細(xì)胞中可見明顯的小液泡和囊泡的存在，這可能與山茱萸果實中單寧前體的合成與運輸相關(guān)。單寧細(xì)胞發(fā)育過程中線粒體數(shù)量較多，可見單寧的積累與組織代謝能力加強相對應(yīng)[37]?；趯Σ煌l(fā)育時期山茱萸果實中單寧物質(zhì)積累特征的研究，后續(xù)可結(jié)合代謝組及轉(zhuǎn)錄組等的分析結(jié)果以揭示山茱萸果實中單寧物質(zhì)合成機制，進(jìn)而為山茱萸果實澀味調(diào)控的研究提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。