遮陰對浙北地區(qū)七葉一枝花生理生化指標(biāo)及皂苷含量的影響*

陳 文,劉守贊,耿東杰,顧依雯,李 者,潘潔渝,白 巖

(浙江農(nóng)林大學(xué)林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院/浙江省特色中藥資源保護(hù)與創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/浙江農(nóng)林大學(xué)植物園/浙江農(nóng)林大學(xué)省部共建亞熱帶森林培育國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 杭州 311300)

七葉一枝花[Smith var.(Franch.) Hara]為百合科(Liliaceae)重樓屬藥用植物,又名重樓、蚤休、燈臺(tái)七等,收錄在《中華人民共和國藥典》中,與云南重樓[Smith var.(Franch.) Hand.-Mazz.]共同列為藥材重樓的基源植物,以地下根莖入藥,具有清熱解毒、消腫止痛等藥效,可用于驚風(fēng)抽搐、蛇蟲咬傷等癥,是云南白藥、宮血寧、季德勝蛇藥片等多種中成藥的重要原料之一; 其入藥部位含有多種甾體皂苷,具有抗腫瘤、抗心肌缺血、止血等藥理作用。七葉一枝花分布于我國浙江、云南、四川、湖南等地,原生在海拔1800～3200 m林下; 近年來,由于價(jià)格攀升,野生七葉一枝花資源逐漸稀少,急需提升人工種植技術(shù)緩解醫(yī)藥需求壓力。

在七葉一枝花生長發(fā)育過程中,適宜的光照是必不可少的條件之一。事實(shí)上,光照是影響植物生長發(fā)育的重要環(huán)境因子,光強(qiáng)能夠影響光合色素含量,改變?nèi)~綠體結(jié)構(gòu)和光合速率,對可溶性物質(zhì)含量產(chǎn)生顯著影響; 并且,適宜的光強(qiáng)可以提高某些次生代謝物質(zhì)的含量。當(dāng)植物遭受光強(qiáng)脅迫時(shí),其生理生化進(jìn)程隨之發(fā)生改變,產(chǎn)生大量活性氧,引起保護(hù)酶系統(tǒng)反應(yīng),直接或間接促進(jìn)某些次生代謝產(chǎn)物生成。例如,賈兵等研究表明,外源過氧化氫可以提高三七[(Burkill) F.H.Chen ex C.Chow & W.G.Huang]皂苷含量; 同時(shí),保護(hù)酶活性增加,清除過多氧化產(chǎn)物帶來的毒性。影響皂苷類化合物合成的因素很多,光照也是影響皂苷合成的重要環(huán)境因子之一,光反應(yīng)產(chǎn)物是皂苷類合成過程中的必需物質(zhì),在適宜光強(qiáng)范圍內(nèi),皂苷含量隨處理時(shí)間增加而提高,超過范圍后,則隨之下降。鄭順林等研究表明,光強(qiáng)可影響七葉一枝花的光合特性,在四川地區(qū),40%和60%左右遮光度下光合效率較高,遮光度大于80%會(huì)造成弱光脅迫; 梁娟等研究發(fā)現(xiàn),光強(qiáng)能夠影響湖南地區(qū)七葉一枝花的重樓皂苷含量,以70%遮陰度含量最高。以上研究表明,光強(qiáng)是影響七葉一枝花光合特性、重樓皂苷含量的關(guān)鍵生態(tài)因子; 同時(shí),因地域差異,七葉一枝花對遮陰程度的要求不同,且重樓皂苷的積累存在差異。但是在以往研究中與重樓皂苷積累可能有關(guān)的生理指標(biāo)并未同步檢測,同時(shí)浙北地區(qū)七葉一枝花研究尚較少。

本文基于“光照是否調(diào)控七葉一枝花重樓皂苷積累”的問題思考,以6年生七葉一枝花為試驗(yàn)材料,研究了不同遮陰條件對其重樓皂苷含量變化的影響,同時(shí)明晰抗逆保護(hù)酶活性指標(biāo)、可溶性滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量指標(biāo)、光合色素含量指標(biāo)的變化規(guī)律,從而篩選適宜浙北地區(qū)七葉一枝花生長和皂苷含量提高的光照條件,為實(shí)現(xiàn)七葉一枝花大面積林下仿生種植或大田人工栽培提供參考,為光調(diào)控提升藥材品質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試驗(yàn)地點(diǎn)概況

供試材料采自浙江農(nóng)林大學(xué)(浙江臨安,30°15′30″N,119°43′27″E)植物園,地處浙江省西北部,屬亞熱帶季風(fēng)氣候,溫暖濕潤,光照充足,雨量充沛,四季分明; 全年降雨量約1600 mm,無霜期年平均為237 d,年平均氣溫16.4 ℃。試驗(yàn)材料采用田間試驗(yàn)方式,種植于透氣、透水性良好的砂質(zhì)壤土,經(jīng)浙江農(nóng)林大學(xué)植物學(xué)科夏國華博士鑒定為百合科重樓屬植物七葉一枝花。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)材料分別栽培于以下3種遮陰梯度環(huán)境下:70%、80%和90%,利用調(diào)整遮陽網(wǎng)層數(shù)和剪洞法控制遮陰程度。透氣遮陽棚高約2 m,下邊緣距離地面0.2 m,使試驗(yàn)苗不受早晚陽光直射; 使用照度計(jì)(勝利電子儀器有限公司,中國杭州)于晴天正午12:00定期監(jiān)測,確保遮陰度準(zhǔn)確。七葉一枝花的株行距0.5 m×0.5 m,每種植穴種植1株。處理時(shí)間為2019年6—9月; 3種遮陰梯度溫度條件、水肥管理一致。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 重樓皂苷含量測定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí),每個(gè)處理選取長勢基本一致的試驗(yàn)苗3株,整株挖取七葉一枝花試驗(yàn)苗,去除地上部分、雜質(zhì)、泥土,洗凈,凍干,制備樣品粉末,過50目篩,備用。

采用高效液相色譜法(HPLC)測定重樓皂含量。測定指標(biāo)和條件參照中華人民共和國藥典(2015版),計(jì)算線性回歸方程; 同時(shí)根據(jù)藥典要求,進(jìn)行方法學(xué)考察,包括精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)及加樣回收試驗(yàn),并計(jì)算相關(guān)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值。

色譜柱: 天津萬象恒遠(yuǎn)科技有限公司C色譜柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm),以乙腈為流動(dòng)相A,水為流動(dòng) 相B進(jìn)行梯度洗脫(0～40 min,30%～60% A,70%～40% B; 40～50 min,60%～30% A,40%～70% B)。流速為0.8 mL·min,進(jìn)樣量10 μL,檢測波長為203 nm,柱溫30 ℃。

1.3.2 生理生化指標(biāo)測定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí),每個(gè)處理隨機(jī)采集長勢相近似、健康無蟲害的七葉一枝花新鮮葉片,每個(gè)處理設(shè)5次生物學(xué)重復(fù),根據(jù)李合生方法測定以下指標(biāo): 采用乙醇浸提法測定葉綠素a (chla)、葉綠素b (chlb)和類胡蘿卜素(Car)含量(mg·g),采用愈創(chuàng)木酚法測定過氧化物酶(POD)活性(U·g·min),采用氮藍(lán)四唑光還原法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性(U·g·min),采用紫外吸收法測定過氧化氫酶(CAT)活性(U·g·min),采用硫代巴比妥酸比色法測定丙二醛(MDA)含量(μmol·g),采用磺基水楊酸法測定脯氨酸(FP)含量(mg·g),采用考馬斯亮藍(lán)法測定可溶性蛋白質(zhì)(SP)含量(mg·g),采用茚三酮法測定游離氨基酸(FAA)含量(mg·g)?？扇苄蕴?SS)含量(mg·g)測定采用蒽酮法。

1.4 數(shù)據(jù)分析

利用Origin 2018和SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 遮陰處理對七葉一枝花重樓皂苷含量的影響

2.1.1 線性回歸關(guān)系結(jié)果

重樓皂苷Ⅰ、重樓皂苷Ⅱ、重樓皂苷Ⅵ、重樓皂苷Ⅶ標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的HPLC圖譜見圖1。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的出峰圖(圖1A)計(jì)算線性回歸方程(表1),值均大于0.999,線性關(guān)系良好; 將各樣品峰面積帶入方程,計(jì)算樣品含量。

表1 重樓皂苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液線性回歸方程Table 1 HPLC regression equation of reference solution of four authentic saponins

圖1 重樓皂苷標(biāo)準(zhǔn)品（A）和樣品（B）的HPLC色譜圖（1: 重樓皂苷Ⅶ; 2: 重樓皂苷Ⅵ; 3: 重樓皂苷Ⅱ; 4: 重樓皂苷Ⅰ）Fig.1 HPLC chromatograms of polyphyllin standards and samples (1: polyphyllin Ⅶ; 2: polyphyllin Ⅵ; 3: polyphyllin Ⅱ; 4: polyphyllin Ⅰ)

2.1.2 方法學(xué)考察結(jié)果

方法學(xué)考察結(jié)果顯示該測定條件穩(wěn)定且良好:精密度考察試驗(yàn)計(jì)算得RSD范圍為0.27%～2.56%,表明儀器精密度良好; 穩(wěn)定性考察試驗(yàn)計(jì)算得RSD范圍為0.81%～0.95%,表明樣品溶液在16 h內(nèi)檢測對結(jié)果無影響,穩(wěn)定性良好; 重復(fù)性試驗(yàn)計(jì)算峰面積RSD范圍為1.44%～2.97%,表明該方法重現(xiàn)性良好;加樣回收試驗(yàn)計(jì)算得回收率在95.49%～98.17%,計(jì)算峰面積RSD范圍為0.14%～2.62%,表明回收情況良好。

2.1.3 樣品測定結(jié)果

對各遮陰處理下七葉一枝花根莖進(jìn)行重樓皂苷含量測定,并根據(jù)回歸方程計(jì)算結(jié)果。如表2所示,在80%遮陰處理?xiàng)l件下,重樓皂苷Ⅰ、重樓皂苷Ⅵ和重樓皂苷Ⅶ均最高; 且含量總和仍為最高(7.19 mg·g),分別比70%和90%處理的重樓皂苷含量高89.71%和284.49%,該結(jié)果符合2015版藥典規(guī)定(重樓皂苷Ⅰ、重樓皂苷Ⅱ、重樓皂苷Ⅵ和重樓皂苷Ⅶ總量在0.6%以上); 但是未達(dá)到現(xiàn)行2020版藥典的規(guī)定(重樓皂苷Ⅰ、重樓皂苷Ⅱ和重樓皂苷Ⅶ總量在0.6%以上)。3種處理中,重樓皂苷Ⅵ和重樓皂苷Ⅶ含量、皂苷總含量表現(xiàn)出顯著性差異,而重樓皂苷Ⅰ含量差異并不顯著。此外,在本試驗(yàn)所有處理樣品中均未檢出重樓皂苷Ⅱ。

表2 不同程度遮陰對七葉一枝花根莖中重樓皂苷含量的影響Table 2 Saponins contents of Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara under different shading treatments mg·g—1

2.2 遮陰處理對七葉一枝花抗氧化酶活性及氧化產(chǎn)物含量的影響

2.2.1 遮陰處理對抗氧化酶活性的影響

不同遮陰處理七葉一枝花抗氧化酶活性結(jié)果如表3所示,SOD和POD活性變化趨勢一致,均以遮陰80%處理最低,分別為105.00 U·g·min和2.89 U·g·min; 遮陰度為90%時(shí),SOD和POD活性急劇上升(165.09 U·g·min、4.90 U·g·min),增幅分別為57.23% (＜0.05)和69.55% (＜0.05)。CAT活性隨遮陰度上升而逐漸下降,以70%處理最高,為21.43 U·g·min,遮陰度為90%時(shí),CAT活性顯著低于其他處理,為5.74 U·g·min。以上結(jié)果表明,與其他處理相比,80%遮陰處理下的七葉一枝花受到光脅迫較小,而70%和90%處理下七葉一枝花的保護(hù)酶系統(tǒng)響應(yīng)更強(qiáng)烈,同時(shí),90%處理下七葉一枝花對于過氧化氫的清除能力低于70%處理。CAT位于活性氧清除系統(tǒng)的下游,將SOD和POD分解活性氧時(shí)產(chǎn)生的過氧化氫轉(zhuǎn)化為無害的水和氧,90%處理后的SOD和POD活性最高、CAT活性最低,表明其生理狀態(tài)并不樂觀,無法將植物體內(nèi)的有害物質(zhì)完全分解掉; 70%和80%處理則相反,表明其生理狀態(tài)好于90%處理。

表3 不同遮陰處理下七葉一枝花的抗氧化酶活性變化Table 3 Antioxidative enzymes activities of Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara under different shading treatments U·g—1·min—1

2.2.2 遮陰處理對MDA積累的影響

氧化產(chǎn)物MDA含量隨遮陰度的變化而變化(圖2),其中,以80%遮陰處理下含量最低,為11.90 μmol·g,較數(shù)值最高的90%處理(15.46 μmol·g)低23.03% (＜0.05)。該結(jié)果進(jìn)一步佐證,80%遮陰環(huán)境下七葉一枝花膜脂過氧化程度更低,遭受的逆境傷害較小,而90%遮陰已對七葉一枝花產(chǎn)生弱光脅迫,遭受損傷較大。結(jié)合MDA含量和保護(hù)酶活性分析認(rèn)為,90%遮陰不利于七葉一枝花的生存,80%遮陰對七葉一枝花的生存是有利的,70%遮陰僅次于80%遮陰。

圖2 不同遮陰條件下七葉一枝花的丙二醛（MDA）含量變化Fig.2 Malondialdehyde (MDA) contents of Paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.) Hara under different shading treatments

2.3 遮陰處理對七葉一枝花光合色素含量的影響

由表4可以看出,遮陰70%處理葉綠素a、b,類胡蘿卜素含量,葉綠素a/b以及葉綠素總量均為最低,80%遮陰處理顯著提高了光合色素含量,較70%遮陰處理,葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素含量、葉綠素a/b和葉綠素總量分別提高70.83%、30.38%、85.85%、32.72%和60.54%,差異均達(dá)顯著水平(＜0.05),并且80%和90%遮陰處理的葉綠素a、葉綠素b和葉綠素總量顯著高于70%處理。說明80%遮陰能夠促進(jìn)光合色素的合成,并且遮陰程度的提升能夠提高葉綠素a和葉綠素b含量。

表4 不同遮陰條件下七葉一枝花的光合色素含量變化Table 4 Photosynthetic pigment contents of Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara under different shading

2.4 遮陰處理對七葉一枝花可溶性物質(zhì)含量的影響

各處理之間可溶性物質(zhì)的含量存在顯著差異,并且隨著遮陰程度的增加,可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)、游離氨基酸和脯氨酸含量變化不同。如表5所示,與90%遮陰處理相比,70%和80%遮陰處理的可溶性糖含量增幅分別為246.43% (＜0.05)和207.14% (＜0.05),說明隨著遮陰程度的升高,可溶性糖含量逐漸下降。各處理的可溶性蛋白質(zhì)含量隨遮陰度變化呈先上升后下降的趨勢,且差異顯著,其中,80%處理可溶性蛋白質(zhì)含量最高,為11.28 mg·g,較90%處理提高46.11% (＜0.05)。游離氨基酸含量隨著遮陰度上升而顯著增加,90%處理下游離氨基酸含量最高,為7.54 mg·g,較70%處理增加56.11%(＜0.05)。脯氨酸含量隨遮陰度變化呈先下降后上升趨勢,80%處理下脯氨酸含量最低,為8.88 mg·g,較70%處理和90%處理分別降低22.64%和29.97%(＜0.05)。

表5 不同遮陰處理下七葉一株花的可溶性物質(zhì)含量變化Table 5 Soluble substances contents of Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara under different shading treatments mg·g—1

由此可見,七葉一枝花的初生代謝是復(fù)雜的內(nèi)在聯(lián)系,光強(qiáng)對其影響不是簡單、線性的,但仍然存在一定規(guī)律,綜合分析以上數(shù)據(jù)認(rèn)為,80%遮陰處理有利于七葉一枝花生長。

2.5 七葉一枝花重樓皂苷含量與生化指標(biāo)的相關(guān)性分析

重樓皂苷含量與生化指標(biāo)的相關(guān)性分析如表6所示,其含量與SOD活性、POD活性、MDA含量之間存在極顯著的負(fù)相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)分別為—0.90、—0.89和—0.95; 與CAT活性存在顯著正相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)為0.79。本結(jié)果說明在一定光強(qiáng)范圍內(nèi),當(dāng)SOD活性和POD活性越低、MDA含量越低、CAT活性越高時(shí),七葉一枝花中重樓皂苷的含量越高,即適宜的光照強(qiáng)度或較小的光照脅迫,有利于重樓皂苷含量的提升。

表6 七葉一枝花重樓皂苷含量及各生化指標(biāo)的相關(guān)性分析Table 6 Correlation analysis of polyphyllin content with biochemical indexes of Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.)

此外,重樓皂苷含量與可溶性蛋白質(zhì)含量存在極顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.99; 與葉綠素a/b存在顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.70,與其他光合色素和可溶性物質(zhì)含量間無顯著相關(guān)性,說明在代謝過程中,可溶性蛋白質(zhì)含量和葉綠素a/b的比值越高,重樓皂苷含量有可能越高。

3 討論

七葉一枝花在我國分布范圍較廣,但是由于其生長緩慢、易休眠、難繁殖、且產(chǎn)量低,無法滿足醫(yī)藥需求,致使無序采挖,其野生資源日漸瀕危。人工種植可緩解七葉一枝花資源匱乏的現(xiàn)狀,不過,我國幅員遼闊,不同產(chǎn)地光照條件差異明顯,采取的遮陰度也不盡相同。例如,梁娟等研究表明,在湖南地區(qū),七葉一枝花在遮光70%條件下光合速率、皂苷含量最高,遮陰程度過高或過低不利于七葉一枝花的光合作用和皂苷積累; 鄭順林等在四川省寶興縣地區(qū)開展研究,發(fā)現(xiàn)七葉一枝花在遮光40%或60%條件下光合速率最高,并提出遮陰在40%～60%范圍內(nèi),有利于提高七葉一枝花的光飽和點(diǎn)、降低光補(bǔ)償點(diǎn)和干物質(zhì)的積累。本文結(jié)果表明,80%的遮陰處理,可使七葉一枝花根莖中重樓皂苷含量最高; 結(jié)合各項(xiàng)生化指標(biāo),說明在浙北地區(qū)的夏季,該遮陰條件有利于七葉一枝花有效成分合成。其次,與80%遮陽相比,70%和90%遮陰處理對皂苷類化合物積累不利?？镫p便等研究結(jié)果表明,三七總皂苷在8.4%透光條件下最高,并且極顯著高于2.9%透光條件,22.0%和11.0%透光條件結(jié)果僅次于8.4%處理,且彼此間相差不大,而1.1%透光率下生物量和總皂苷含量均最低,可以推測,三七總皂苷的積累需要至少8.4%的光照強(qiáng)度。這提示我們,七葉一枝花中重樓皂苷的積累需要適宜的光照。此外,本研究中并未測得重樓皂苷Ⅱ,可能與七葉一枝花的產(chǎn)地有關(guān),相關(guān)原因和機(jī)理有待進(jìn)一步研究解析。

在重樓皂苷的合成途徑中,糖類化合物廣泛存在并參與其中,如前體物質(zhì)薯蕷皂苷元經(jīng)糖苷化合成重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ,經(jīng)羥化、糖苷化合成重樓皂苷Ⅵ和重樓皂苷Ⅶ。在本研究中,可溶性糖含量以70%處理最高,與Li等對魚腥草(Thunb.)和郭品湘等對木番茄(Benth)的研究相近,即可溶性糖含量會(huì)隨著光照強(qiáng)度的下降而降低,這可能與植物光合效率有關(guān),遮陰降低了植物的光合效率,減少了光合產(chǎn)物的積累。

但是,次生代謝是一個(gè)極復(fù)雜的過程,單一的可溶性糖含量變化不足以直接影響重樓皂苷的積累。蘇文華等和Kouki等的研究結(jié)果指出,一定程度的脅迫可使植物生長減慢,促使物質(zhì)合成更多地流向次生代謝,并且影響次生代謝物種類。本文中,重樓皂苷含量與SOD活性、POD活性、MDA含量之間存在極顯著的負(fù)相關(guān),表明在適宜的光照條件下,七葉一枝花會(huì)合成和積累較多的皂苷類物質(zhì)。70%處理后的CAT活性、MDA和脯氨酸含量也較高,說明該遮陰條件對于七葉一枝花會(huì)造成一定程度強(qiáng)光脅迫,刺激POD和SOD活性增加,進(jìn)而有助于將超氧陰離子轉(zhuǎn)化為過氧化氫; 同時(shí),較高的CAT活性有助于過氧化氫的分解,間接促進(jìn)可溶性糖的合成與積累。而90%遮陰條件下POD和SOD活性最高、CAT活性最低,表明該條件下七葉一枝花不能夠及時(shí)清除細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的過氧化氫,導(dǎo)致了MDA

的大量積累,結(jié)合重樓皂苷測定結(jié)果,說明90%遮陰對七葉一枝花傷害更強(qiáng),并且不利于皂苷的積累。

重樓皂苷與可溶性蛋白質(zhì)含量存在顯著正相關(guān),而可溶性蛋白質(zhì)包含著參與光合作用各反應(yīng)階段的大量酶,其含量高,有利于植物在遮蔭下維持光合作用,為次生代謝提供必要的前體物質(zhì)。例如孫克香等研究表明,強(qiáng)光脅迫下可溶性蛋白質(zhì)含量較高的甜椒(L.)幼苗具有更低的MDA含量,與本研究中可溶性蛋白質(zhì)含量以遮陰80%時(shí)最高的結(jié)果相似。

重樓皂苷與其他可溶性物質(zhì)相關(guān)性不大,但是可溶性物質(zhì)既是植物的光合產(chǎn)物,又是重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),能夠提高細(xì)胞保水能力,保證細(xì)胞的正常生理功能。其中,脯氨酸含量與植物所處光環(huán)境有關(guān),在逆境時(shí)其含量上升,通過增加細(xì)胞滲透勢,對植物起到保護(hù)作用,并進(jìn)一步維持細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)。例如,黃河騰等研究指出,當(dāng)光照條件相對于木奶果(Lour.)幼苗而言偏高或偏低時(shí),脯氨酸含量會(huì)增加,與本研究結(jié)果是相同的。此外,游離氨基酸含量以90%遮陰處理后最高,應(yīng)與光強(qiáng)過低有關(guān)。吳能表等研究結(jié)果表明,較高的遮陰條件可導(dǎo)致長春花[(L.) G.Don]葉片的碳同化率降低,繼而引起氨基酸同化速率降低,進(jìn)一步導(dǎo)致游離氨基酸的積累。結(jié)合SOD、POD活性和MDA、脯氨酸含量均最高,90%遮陰已引起七葉一枝花抗氧化系統(tǒng)的響應(yīng),即該條件對七葉一枝花造成了弱光脅迫。陶巧靜等發(fā)現(xiàn)西洋杜鵑(Ker Gawl.)在弱光脅迫條件下,葉片超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,細(xì)胞結(jié)構(gòu)存在破損缺失,可溶性蛋白質(zhì)含量降低。據(jù)此分析,本文90%遮陰處理下游離氨基酸含量較高、可溶性蛋白質(zhì)含量較低可能與細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞、蛋白質(zhì)降解有關(guān)。

重樓皂苷與葉綠素a/b存在顯著正相關(guān)。七葉一枝花光合色素的含量和比例變化與光照強(qiáng)度有關(guān),在適宜遮陰條件(80%)顯著高于其他處理,與王宇等在黃芪(Bunge.)的結(jié)果相似,即光合作用隨著光照強(qiáng)度的增加先增強(qiáng)后減弱,而葉綠素含量隨著遮陰程度增加呈先升高后降低的趨勢。分析認(rèn)為,這與植物光反應(yīng)中心的結(jié)構(gòu)有關(guān),過低或過高的光照強(qiáng)度都會(huì)損傷植物的葉綠體類囊體結(jié)構(gòu),降低氣孔導(dǎo)度,抑制光合作用,尤其是高光強(qiáng)會(huì)加劇植物光氧化現(xiàn)象,引起葉片失綠,使葉綠素含量降低。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明,適宜的遮陰度有助于提高七葉一枝花重樓皂苷的含量,提高光合色素含量,降低過氧化物含量,過低或過高的遮陰程度均會(huì)產(chǎn)生不利影響。綜合各項(xiàng)指標(biāo)得出本文結(jié)論,80%的遮陰度較適合浙北地區(qū)七葉一枝花的人工種植。同時(shí),結(jié)合前人研究結(jié)果可知,在生產(chǎn)中應(yīng)注意因地制宜、因時(shí)制宜,結(jié)合本地條件,選擇適宜七葉一枝花生長和重樓皂苷合成的遮光梯度,進(jìn)一步滿足醫(yī)藥需求。