石生茶藨莖段快繁體系的建立

高 林，馮琳驕，褚佳瑤，由佳輝，艾克熱木·伊力哈木，周 龍，陸 彪

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.新疆維吾爾自治區(qū)伊犁哈薩克自治州特克斯縣林業(yè)和草原局，新疆 伊犁 835500）

石生茶藨Ribes SaxatilePall.是茶藨子科Grossulariaceae茶藨子屬Ribes的一種落葉低矮灌木，在我國(guó)僅分布于新疆的阿爾泰山及特克斯北山等區(qū)域，其果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1-2]。組織培養(yǎng)是快速繁殖種苗的有效途徑，具有取材少、能保持良種優(yōu)勢(shì)、全年都可生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)[3]。目前有關(guān)茶藨子屬植物組織培養(yǎng)的研究報(bào)道較多：方鵬等[4]在研究華茶藨組培繁殖體系時(shí)發(fā)現(xiàn)，最適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+0.40 mg·L-1NAA+0.40 mg·L-1ZT+1.80 mg·L-12,4-D+35 g·L-1蔗糖，最適宜的不定芽增殖培養(yǎng)基是MS+0.50 mg·L-1ZT+0.10 mg·L-1NAA；焦薈穎等[5]研究發(fā)現(xiàn)，黑穗醋栗‘布勞德’組培苗經(jīng)過1～2 d的暗培養(yǎng)后其生根率可達(dá)95%。然而，前人有關(guān)茶藨子屬植物組培快繁體系的研究對(duì)象多為栽培種，而關(guān)于石生茶藨組培體系的研究卻尚未見諸報(bào)道。石生茶藨作為西天山野果林中極具特色的伴生種，其對(duì)西天山野果林的生態(tài)穩(wěn)定具有重要作用。但是，旅游和放牧等人為活動(dòng)使得石生茶藨的自然生境受到了嚴(yán)重破壞，其生存現(xiàn)狀不容樂觀。為給石生茶藨的引種與繁殖提供技術(shù)支持，以石生茶藨的帶腋芽莖段為試材，采用不同配方的培養(yǎng)基、不同濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑進(jìn)行組培試驗(yàn)，以篩選出最適宜石生茶藨腋芽萌發(fā)的培養(yǎng)基及其生根培養(yǎng)基配方，從而建立一套較為成熟的石生茶藨組織培養(yǎng)體系。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

將2019年采集于特克斯北山的石生茶藨種子，經(jīng)4 ℃低溫河沙層積處理后，于2020年3月播種培育于新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹種質(zhì)資源實(shí)驗(yàn)室中，以其3月齡幼苗的帶腋芽莖段為接種材料。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的消毒

選擇生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗，采集帶腋芽的莖段，將所采莖段修剪為長(zhǎng)約2 cm的外植體，然后用流水沖洗30 min，清洗掉其表面污物。將清洗好的外植體置于超凈工作臺(tái)上進(jìn)一步消毒處理，先用75%的乙醇浸泡30 s，再用0.10%的升汞消毒10 min，最后用無菌水沖洗干凈，置于接種盤中以備用。

1.2.2 初代培養(yǎng)試驗(yàn)

分別選擇MS、B5和WPM培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，再在其中分別添加0.50 mg·L-1的IBA、1.50 mg·L-1的6-BA進(jìn)行初代培養(yǎng)試驗(yàn)，以篩選出最適宜的初代培養(yǎng)基。初代培養(yǎng)基中的蔗糖濃度為30 g·L-1、瓊脂濃度為7 g·L-1，pH值為5.8。接種時(shí)，將受損的外植體組織去除掉，保留長(zhǎng)為1.50 cm的帶芽莖段進(jìn)行接種，每種培養(yǎng)基各接種15瓶，每瓶各接種3個(gè)外植體。初代培養(yǎng)期間，培養(yǎng)溫度保持為（24±2）℃，光照強(qiáng)度保持為1 500～2 000 Lx，光照周期為12 h·d-1[6]。培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)污染率和萌發(fā)率。

腋芽萌發(fā)率=(萌芽數(shù)/接種數(shù))×100%；

污染率=(污染數(shù)/接種數(shù))×100%。

1.2.3 基于二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)的增殖培養(yǎng)試驗(yàn)

選用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合方法設(shè)計(jì)增殖培養(yǎng)方案，增殖培養(yǎng)試驗(yàn)因素分別為6-芐基腺嘌呤（6-BA）、吲哚丁酸（IBA）和赤霉素（GA3）這3種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，增殖培養(yǎng)試驗(yàn)共設(shè)23個(gè)處理組。參照董瑞等[7]的二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合方法進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，建立的二次回歸方程為：式中：Y代表增殖系數(shù)；X代表增殖培養(yǎng)中每個(gè)處理各種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的處理濃度，X1、X2、X3分別代表6-BA、IBA、GA3的處理濃度；B0為常數(shù)項(xiàng)，B1、B2、B3分別為X1、X2、X3濃度一次方項(xiàng)的回歸系數(shù)，B12、B13、B23分別為X1X2、X1X3、X2X3交互項(xiàng)的回歸系數(shù)，B11、B22、B33分別為X1、X2、X3濃度二次方項(xiàng)的回歸系數(shù)。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑6-BA、IBA、GA3的處理濃度范圍分別設(shè)定為1.00～3.00、0.00～1.00、0.00～1.50 mg·L-1。采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合方法設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案時(shí)，要求每個(gè)因素各取5個(gè)水平進(jìn)行組合設(shè)計(jì)，其中，最高濃度水平記為Z2j，其編碼值為γ（1.682）；最低濃度水平記為Z1j，其編碼值為-γ（-1.682）；中間濃度水平記為Z0j，其編碼值為0，中間濃度水平（Z0j）的計(jì)算公式為：Z0j=(Z1j+Z2j)/2；其他2個(gè)水平分別記作上濃度水平和下濃度水平，其數(shù)值根據(jù)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度的范圍來計(jì)算，將從Z2j到Z0j的單位編碼值的連續(xù)變化區(qū)間記作Δj，其計(jì)算公式為：Δj＝(Z2j-Z0j)/γ。上濃度水平為Z0j+Δj，其編碼值為1；下濃度水平為Z0j-Δj，其編碼值為-1。3種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的5個(gè)濃度水平的編碼值與其對(duì)應(yīng)的處理濃度詳見表1。

表1 基于二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)的6-BA、IBA和GA3的各個(gè)濃度水平的編碼值及其對(duì)應(yīng)的處理濃度Table 1 The coded values at each concentration level of 6-BA, IBA and GA3 and their corresponding treatment concentrations based on quadratic regression orthogonal rotation combination design

增殖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，蔗糖濃度為30 g·L-1，瓊脂濃度為7 g·L-1，pH值均調(diào)至5.8，23個(gè)處理組的3種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的濃度組合詳見表2。

表2 增殖培養(yǎng)的試驗(yàn)方案Table 2 Experimental scheme of proliferation culture

增殖系數(shù)=總芽數(shù)/接種芽數(shù)。

1.2.4 生根培養(yǎng)試驗(yàn)

生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為1/2 MS培養(yǎng)基，蔗糖濃度為30 g·L-1，瓊脂深度為7 g·L-1，pH值為5.8，在生根培養(yǎng)基中不添加細(xì)胞分裂素，只添加濃度分別為0.50、1.00、1.50 mg·L-1的IBA；分別進(jìn)行0、1、3、5、7 d的暗培養(yǎng)。選擇株高在1.5 cm以上、帶有4個(gè)以上葉片的無根壯苗為試驗(yàn)材料，將其轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每處理各接種3瓶，每瓶各接種組培苗1株，重復(fù)3次，接種40 d后統(tǒng)計(jì)生根率。生根培養(yǎng)條件與初代培養(yǎng)條件相同。

生根率=(生根苗數(shù)／接種苗數(shù))×100%。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Excel 2010、SPSS軟件及DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與單因素方差分析和回歸分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)基對(duì)石生茶藨莖段萌發(fā)率的影響

不同培養(yǎng)基處理對(duì)石生茶藨莖段萌發(fā)的影響情況見表3。從表3中可以看出，3種培養(yǎng)基處理的腋芽萌發(fā)率存在顯著性差異（P＜0.05）。以MS培養(yǎng)基處理的腋芽萌發(fā)率最高，為91.11%，且無污染；其次是WPM培養(yǎng)基處理的腋芽萌發(fā)率，為80.00%，污染率為2.22%；腋芽萌發(fā)率最低的是B5培養(yǎng)基處理的，其腋芽萌發(fā)率僅為73.34%。MS培養(yǎng)基中外植體的叢生芽粗壯，B5培養(yǎng)基中外植體的叢生芽弱小，WPM培養(yǎng)基中外植體的叢生芽質(zhì)量處于前兩者之間。因此，MS培養(yǎng)基是促使石生茶藨莖段萌發(fā)的最適宜的初代培養(yǎng)基。

表3 不同培養(yǎng)基處理對(duì)石生茶藨莖段萌發(fā)的影響?Table 3 Effects of different media on germination rate of R.Saxatile Pall.

2.2 基于二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)的增殖培養(yǎng)效果

2.2.1 回歸方程的確立

增殖培養(yǎng)的試驗(yàn)結(jié)果見表4，對(duì)增殖培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果的方差分析結(jié)果見表5。

根據(jù)表4的數(shù)據(jù)，采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)方法進(jìn)行擬合，得到的回歸方程為：

表4 增殖培養(yǎng)的試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Test results of proliferation culture

為了檢驗(yàn)回歸方程的有效性，結(jié)合表5的方差分析結(jié)果及查詢F分布臨界值表可以得知：

F1=0.44＜F0.05(5,8)=3.69。

這一計(jì)算結(jié)果說明，回歸方程的失擬性不顯著，因此可以認(rèn)為，所選用的數(shù)學(xué)模型是適當(dāng)?shù)模Ｐ臀词艿狡渌蜃拥挠绊?。方程回歸顯著性檢驗(yàn)結(jié)果為：

F2=5.60＞F0.05(9,13)=2.71。這一計(jì)算結(jié)果說明，回歸方程的回歸性顯著。增殖系數(shù)和6-BA、IBA、GA3的相關(guān)系數(shù)的計(jì)算式為：

R2=回歸平方和/總平方和=0.80。

這一相關(guān)系數(shù)說明根據(jù)該模型預(yù)測(cè)的結(jié)果其準(zhǔn)確度可達(dá)80%。因此，剔除α=0.10時(shí)的不顯著項(xiàng)，得到優(yōu)化后的方程為：

2.2.2 單種激素的影響效應(yīng)與兩種激素交互作用的影響效應(yīng)的比較分析

由表5的均方值可知，影響石生茶藨莖段增殖培養(yǎng)效果的3種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的主次順序是：IBA＞6-BA＞GA3。由于二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)具有正交性，各變異來源之間相互獨(dú)立，所以可采用“降維法”將任意2種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的濃度水平固定為零，得到第3種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度與增殖系數(shù)的關(guān)系，結(jié)果如圖1所示。圖1顯示了3種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)石生茶藨莖段增殖培養(yǎng)效果的影響趨勢(shì)，其中IBA和6-BA對(duì)石生茶藨莖段的增殖培養(yǎng)效果均呈現(xiàn)先降低后上升的變化趨勢(shì)。當(dāng)IBA和6-BA的濃度低于中間濃度水平（即IBA為0.50 mg·L-1、6-BA為2.00 mg·L-1）時(shí)，6-BA的增殖效果高于IBA的增殖效果；而當(dāng)IBA和6-BA濃度高于中間濃度水平時(shí)，IBA的增殖效果高于6-BA的增殖效果；且兩者在最高濃度水平時(shí)的增殖效果均最好。GA3的增殖效果呈現(xiàn)先上升后降低的變化趨勢(shì)，其在中間濃度水平（即0.75 mg·L-1）時(shí)的增殖效果最好。

圖1 單種激素試驗(yàn)效果的比較Fig.1 Comparison of effects of single hormone test

由表5可知，回歸方程中X1X2的交互作用在α=0.1時(shí)顯著，而X1X3和X2X3的交互作用在α=0.1時(shí)不顯著。對(duì)3組激素交互作用的影響效果進(jìn)行比較分析，結(jié)果如圖2～4所示。從圖2中可以看出，在6-BA最低濃度水平與IBA最高濃度水平處，增殖系數(shù)達(dá)到最高。從圖3中可以看出，增殖系數(shù)最大值出現(xiàn)在GA3中間濃度水平與6-BA最高和最低濃度水平處。從圖4中可以看出，增殖系數(shù)在GA3中間濃度水平與IBA最高濃度水平處達(dá)到最大值。

圖2 6-BA與IBA的交互作用對(duì)增殖系數(shù)的影響Fig.2 The effect of interaction between 6-BA and IBA on proliferation coefficient

圖3 6-BA與GA3的交互作用對(duì)增殖系數(shù)的影響Fig.3 The effect of interaction between 6-BA and GA3 on proliferation coefficient

圖4 IBA與GA3的交互作用對(duì)增殖系數(shù)的影響Fig.4 The effect of interaction between IBA and GA3 on proliferation coefficient

表5 對(duì)增殖培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果的方差分析結(jié)果Table 5 Analysis of variance on results of proliferation culture test

2.2.3 以頻率分析法模擬增殖培養(yǎng)效果最優(yōu)值

優(yōu)化方案中各變量取值的頻率分布情況見表6。由表6可知，增殖系數(shù)大于2.04的處理方案有70個(gè)，在其95%的試驗(yàn)方案中，6-BA、IBA、GA3的適宜濃度范圍分別為1.93～2.31、0.54～0.71、0.45～0.87 mg·L-1，取其平均值為最適濃度，即當(dāng)6-BA、IBA、GA3的濃度分別為2.12、0.63、0.66 mg·L-1時(shí)，增殖培養(yǎng)的效果最佳。

表6 優(yōu)化方案中各變量取值的頻率分布情況Table 6 Frequency distribution of variable value in optimization scheme

2.3 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度及暗處理時(shí)間對(duì)石生茶藨組培苗生根效果的影響

不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的處理濃度及暗處理時(shí)間對(duì)石生茶藨生根率的影響情況見表7。由表7可知，不同濃度的IBA和暗處理時(shí)間對(duì)石生茶藨組培苗生根的影響程度不同，各處理間存在顯著性差異（P＜0.05）。從IBA的濃度來看，添加有1 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基處理的生根效果最好，其次是添加有1.50 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基處理的，生根效果最差的是添加有0.50 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基處理的；從暗處理時(shí)間來看，暗處理3 d的生根效果最好。由此得出，最適宜石生茶藨生根的培養(yǎng)基為1/2 MS+1 mg·L-1的IBA，以此培養(yǎng)基暗培養(yǎng)3 d的生根效果最好，其生根率為86.67%。

表7 不同濃度的吲哚丁酸及暗處理時(shí)間對(duì)石生茶藨生根率的影響Table 7 Effects of different IBA concentrations and dark treatment time on rooting rate of R.Saxatile Pall.

3 討 論

3.1 初代培養(yǎng)基對(duì)腋芽萌發(fā)效果的影響

在植物的組織培養(yǎng)中，外植體生長(zhǎng)發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來源于基本培養(yǎng)基[8]，因此選擇適宜的基本培養(yǎng)基進(jìn)行初代培養(yǎng)，這對(duì)植物組織培養(yǎng)的成敗至關(guān)重要。在木本植物的組織培養(yǎng)中，常常選用MS、B5和WPM培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基[9-10]。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，石生茶藨最適宜的初代培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其腋芽萌發(fā)率比B5與WPM培養(yǎng)基處理的分別高17.77%和11.11%。這一試驗(yàn)結(jié)果與前人的相關(guān)研究結(jié)果相似：鄒薇薇等[11]使用MS、1/2MS、B5和WPM培養(yǎng)基進(jìn)行香茶藨組織培養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MS培養(yǎng)基是最適宜于香茶藨組培快繁的基本培養(yǎng)基；張馥茜[12]研究發(fā)現(xiàn)，適于穗醋栗‘黑金星’‘早生黑’和‘大粒甜’誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基。作為同科同屬的石生茶藨、香茶藨和穗醋栗（‘黑金星’‘早生黑’和‘大粒甜’）在MS培養(yǎng)基中均表現(xiàn)出較好的狀態(tài)，這可能與MS培養(yǎng)基無機(jī)鹽含量較高而微量元素及有機(jī)成分齊全有關(guān)[13]，其能較好地滿足茶藨子屬植物在組培時(shí)對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)元素的需求。李金英等[14]研究發(fā)現(xiàn)，黑穗醋栗‘寒豐’的組培苗在含有全量大量元素的MS培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較好；除此之外，武愛龍等[15]在對(duì)珍珠相思不定芽的誘導(dǎo)時(shí)發(fā)現(xiàn)，在相同的激素配比下，MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效果最好，顯著優(yōu)于1/2MS和1/4MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效果。

3.2 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度對(duì)腋芽增殖的影響

增殖培養(yǎng)是組培過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其效果主要受植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類與濃度的影響[16-17]。研究中發(fā)現(xiàn)，3種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)石生茶藨莖段增殖培養(yǎng)效果的影響的主次順序是IBA＞6-BA＞GA3，其中IBA的使用對(duì)增殖培養(yǎng)效果的影響顯著，IBA與6-BA的交互作用對(duì)增殖培養(yǎng)效果的影響也顯著。分析IBA與6-BA的交互作用后發(fā)現(xiàn)，當(dāng)IBA濃度為1.00 mg·L-1、6-BA濃度為1.00 mg·L-1時(shí)，其增殖效果最好。采用頻率分析法分析得知，MS+2.12 mg·L-16-BA+ 0.63 mg·L-1IBA+0.66 mg·L-1GA3是石生茶藨莖段增殖培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基。這一研究結(jié)果與前人的相關(guān)研究結(jié)果也相似：李金英等[18]在研究楔葉茶藨組培繁殖體系中發(fā)現(xiàn)，適宜于楔葉茶藨繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基是MS+1 mg·L-1BA+0.10～0.20 mg·L-1IBA+0.25～0.50 mg·L-1GA3；趙錦等[19]在對(duì)黑穗醋栗Ceres品種的組織培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，MS+0.50 mg·L-16-BA+0.50 mg·L-1IBA是最適宜的增殖培養(yǎng)基；葉景豐[20]研究發(fā)現(xiàn)，‘墜玉’的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+0.50～0.80 mg·L-16-BA+0.20～0.50 mg·L-1IBA，以此培養(yǎng)基進(jìn)行組培，組培苗的增殖倍數(shù)可達(dá)5～6倍。在增殖培養(yǎng)階段，選用適宜的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和配比對(duì)組培苗的增殖具有重要作用，通常會(huì)在增殖階段選擇2種或3種培養(yǎng)基配合使用，其配方因植物品種及生長(zhǎng)環(huán)境的不同而有差異[21]。

3.3 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度及暗處理時(shí)間對(duì)生根誘導(dǎo)的影響

組培苗的生根效果對(duì)組培苗的質(zhì)量與移栽的成活率均有決定性作用[22]，一般采用添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和暗處理的方法來提高組培苗的生根效果。研究中發(fā)現(xiàn)，最適于石生茶藨組培苗生根的培養(yǎng)基為1/2MS+1 mg·L-1IBA?，F(xiàn)有研究結(jié)果表明，生長(zhǎng)素是植物不定根誘導(dǎo)與發(fā)育過程中的關(guān)鍵影響因素之一[23-24]。IBA對(duì)植物根系的發(fā)育具有調(diào)節(jié)作用，對(duì)不定根的形成具有促進(jìn)作用，其使用濃度因品種而異[25]。李金英等[26]在對(duì)黑穗醋栗‘寒豐’和楔葉茶藨的生根培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，適于黑穗醋栗‘寒豐’和楔葉茶藨的生根培養(yǎng)基是1/2 MS+1 mg·L-1IBA，且根的質(zhì)量較好；劉丹等[27]研究發(fā)現(xiàn)，適于附子組培苗的生根培養(yǎng)基為1/2 MS + 0.50 mg·L-1IBA，以此培養(yǎng)基處理的生根率可達(dá)100%；王晨等[28]研究發(fā)現(xiàn)，在生根培養(yǎng)基中添加0.10 mg·L-1IBA，對(duì)提高柳杉組培苗的生根率具有顯著效果；王躍華等[29]研究發(fā)現(xiàn)，在對(duì)杜鵑蘭無根苗不定根進(jìn)行誘導(dǎo)時(shí)，IBA的最佳濃度為0.30 mg·L-1。試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，在使用1/2 MS+1 mg·L-1IBA培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上再進(jìn)行3 d的暗處理后，石生茶藨組培苗的生根效果最好，其生根率為86.67%。在組培苗的生根培養(yǎng)階段，對(duì)組培苗進(jìn)行暗處理，可以促使傷口部位的細(xì)胞黃化，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為生根細(xì)胞，有利于根系的萌發(fā)與生長(zhǎng)。這一研究結(jié)果與馬鳳桐等[30]對(duì)黑穗醋栗的組培試驗(yàn)結(jié)果相似。馬鳳桐等[30]應(yīng)用暗培養(yǎng)技術(shù)對(duì)黑穗醋栗進(jìn)行生根培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，暗培養(yǎng)1～3 d的試管苗其生根率可達(dá)83.30%～95.60%，且此方法具有簡(jiǎn)單、高效、穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)。

3.4 本研究存在的局限性與下一步研究的方向

隨著植株的生長(zhǎng)發(fā)育，植株自身各部分的狀態(tài)和各種內(nèi)源激素含量均會(huì)發(fā)生不同程度的改變。本研究?jī)H采用3月齡幼苗的帶芽莖段為試驗(yàn)材料，按照試驗(yàn)結(jié)果僅能建立起初步的石生茶藨組培快繁體系。因此，若要建立完善的石生茶藨組培快繁體系，還應(yīng)采用不同年齡段的石生茶藨植株上的不同部位作為試驗(yàn)材料，進(jìn)一步開展組培快繁試驗(yàn)，以便建立更加完善的石生茶藨組培快繁體系，為實(shí)際生產(chǎn)提供更加可靠的理論依據(jù)與技術(shù)支持。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)以石生茶藨帶腋芽莖段為材料，研究了基本培養(yǎng)基的種類和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的使用對(duì)石生茶藨莖段快繁體系的影響情況，并采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合進(jìn)行增殖培養(yǎng)方案的設(shè)計(jì)。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，最適于石生茶藨初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，在初代培養(yǎng)基MS+0.50 mg·L-1IBA+1.50 mg·L-16-BA中，其腋芽萌發(fā)率可達(dá)91.11%；經(jīng)二次多項(xiàng)式回歸分析及以頻率分析法模擬其最優(yōu)值后發(fā)現(xiàn)，影響石生茶藨莖段增殖培養(yǎng)效果的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的主次順序是IBA＞6-BA＞GA3，其中IBA的使用對(duì)其增殖效果的影響顯著，且IBA與6-BA的交互作用對(duì)其增殖效果的影響也顯著，最適宜的增殖培養(yǎng)基為MS+2.12 mg·L-16-BA+0.63 mg·L-1IBA+0.66 mg·L-1GA3，以此培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，可以獲得最大的增殖率；其最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS + 1 mg·L-1IBA，以此培養(yǎng)基先暗處理3 d，其生根率可達(dá)86.67%。