蔊菜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究

肖丹，孔毅，劉星，李松，高源，周映佑

(1.貴州省食品檢驗(yàn)檢測院，貴州 貴陽 550004；2.貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽 550004)

0 引言

本品為十字花科植物蔊菜Rorippa indica(L.)Hiern或無瓣蔊菜 Rorippa dubia(Pers.)Hara 的干燥全草。夏、秋二季花期采挖，除去雜質(zhì)，干燥。本品亦為我省少數(shù)民族用藥。蔊菜又名辣米菜(《綱目》)，野油菜(《分類草藥性》)，塘葛菜(《嶺南采藥錄》)，干油菜(《民間常用草藥匯編》)，石豇豆(《貴陽民間藥草》)，雞肉菜、田葛菜(廣州部隊(duì)《常用中草藥手冊》)，江剪刀草、野雪里蕻、野芥草、野菜花(《上海常用中草藥》)，山芥菜、獨(dú)根菜、山蘿卜、金絲莢(《福建中草藥》)?！侗静菥V目拾遺》：《字林》云，蔊、辛菜，南人食之，去冷氣?！毒V目》中描述蔊菜，生南地，田園間小草也。冬月布地叢生，長二、三寸，柔梗細(xì)葉，二月開細(xì)花，黃色，結(jié)細(xì)角長一、二分，角內(nèi)有細(xì)子。南人連根葉拔而食之，味極辛辣，呼為辣米菜。沙地生者尤伶仃。在貴州民間應(yīng)用廣泛，收載于2003版《中藥材，民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》。目前蔊菜已被廣泛作為蔬菜食用。關(guān)于蔊菜的藥用研究較少有見文獻(xiàn)記載。

目前蔊菜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善，僅見收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003版)，標(biāo)準(zhǔn)滯后，難以保證藥材的質(zhì)量與臨床用藥的安全性，本研究的宗旨是為完善并提升該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。為推進(jìn)貴州省中藥、民族藥創(chuàng)新與大健康產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，蔊菜作為民間廣泛使用的藥物，無疑具有很大的開發(fā)利用價(jià)值和市場潛力，對其進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 儀器、試劑與樣品

1.1 儀器

電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司 MS204S/01 MS105DU)、數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市江南儀器廠 HH-2)、回旋震蕩器(上海一恒科學(xué)儀器有限公司 WSZ-200A)、純水儀(倍捷科技有限公司 Mili-Q)、電熱鼓風(fēng)干燥箱。

(上海一恒科學(xué)儀器有限公司 DHG-9240A)、箱式電阻爐(馬弗爐)(天津市泰斯特儀器有限公司 SX-4-10)、三用紫外儀(上海安亭電子儀器廠 ZF-2)。

1.2 試劑及對照

鹽酸(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 優(yōu)級純)；乙醇(天津市鑫鉑特化工有限公司 分析純)；石油醚(天津市富宇精細(xì)化工有限公司 分析純)；甲醇(淮安科儀化玻有限公司 色譜純)；乙酸乙酯(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 優(yōu)級純)；甲酸(分析純 成都金山化學(xué)試劑有限公司)；三氯化鋁(天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司 分析純)；硅膠板(青島海洋化工有限公司)；蘆丁對照(中國食品藥品檢定研究院)。

1.3 樣品收集

本實(shí)驗(yàn)共收集蔊菜樣品3批，涉及貴州省貴陽市不同行政區(qū)域。樣品來源見表1。

表1 蔊菜供試樣品來源

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 性狀

本實(shí)驗(yàn)蔊菜3個(gè)樣品經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)吳之坤教授鑒定為十字花科植物蔊菜 Rorippa indica(L.)Hiern 或無瓣蔊菜 Rorippa dubia(Pers.)Hara 的干燥全草。

2.1.1 蔊菜性狀

蔊菜全草長15～35cm。表面淡黃綠色至淺黃褐色。莖近基部分枝或單一，淡黃綠色，偶有帶淺紫色，具有細(xì)縱溝。根彎曲，細(xì)長，主根直徑約為0.2cm，具有不規(guī)則縱皺及須根痕，質(zhì)地較脆且易折斷，斷面皮部為類白色，木部為淡黃色。葉片呈黃綠色，完整葉片展平后呈長橢圓形或?qū)捙樞?，呈頭狀羽裂，邊緣有疏齒，葉多卷縮或破碎。總狀花序頂生或側(cè)生，黃色，花小。果呈長角細(xì)圓柱形，短而粗。氣微，味淡。

無瓣蔊菜全草長10～30cm，表面淡綠色。莖直立或鋪散狀分枝。葉生于莖下部和基部，具長柄，兩側(cè)具狹翅，完整葉片展平后呈卵形，大頭羽裂，先端裂片具鈍鋸齒緣。種子每室1行，數(shù)多，細(xì)小，種子褐色，近卵形。

圖1 蔊菜生景照片及藥材圖片

2.2 鑒別

2.2.1 顯微鑒別

參照2020年版《中國藥典》第四部通則2001顯微鑒別法的粉末制片方法，將蔊菜樣品粉碎過四號篩，取少量粉末與干凈的載玻片上，加水合氨醛1-2滴，置于酒精燈上微微加熱透化，重復(fù)2-3次，冷卻，滴加稀甘油1-2滴，蓋上蓋玻片，顯微鏡下觀察蔊菜顯微特征，結(jié)果見圖2。原標(biāo)準(zhǔn)未對粉末鑒別項(xiàng)進(jìn)行描述，本實(shí)驗(yàn)通過對不同產(chǎn)地焊材藥材樣品的粉末進(jìn)行觀察、測量，其顯微鑒別特征總結(jié)如下：本品粉末呈棕灰色，表皮或下皮細(xì)胞呈棕色，排列緊密；主要為梯紋導(dǎo)管，網(wǎng)紋導(dǎo)管，排列比較緊密，導(dǎo)管直徑為22～56μm；淀粉粒較多，常為類圓形、半圓形或圓多角形；復(fù)粒由2～6分粒組成；氣孔主要為平軸式；纖維眾多，散在，平直或微彎曲，無分叉，壁較厚，胞腔線性；非腺毛平直或先端彎曲常彎曲，壁厚，微具疣突。

圖2 粉末顯微圖

2.2.2 薄層鑒別

原標(biāo)準(zhǔn)有薄層鑒別項(xiàng)，但以原標(biāo)準(zhǔn)的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，樣品不能被分離，需重新進(jìn)行色譜條件的選擇。原標(biāo)準(zhǔn)以蔊菜素作為對照品進(jìn)行薄層鑒別，但由于蔊菜素對照品市場上無法購買到，實(shí)驗(yàn)選擇了取蔊菜對照藥材進(jìn)行薄層鑒別。取焊材藥材細(xì)粉(過四號篩)10g，加入100mL水，煮沸15min，濾過，濾液濃縮至約3mL，加入無水乙醇7mL，濾過，濾液蒸干，加入氯仿1mL使殘?jiān)芙?，作為薄層鑒別供試品溶液。另取蔊菜對照藥材，按照上述步驟進(jìn)行提取，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2020年版四部通則0502)進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-氯仿-甲醇-甲酸(1.5 mL：1 mL：0.4 mL：0.1 mL)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果見附圖3，供試品色譜圖與對照藥材色譜圖在相同的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。T1；3：藥材T2；4：藥材T3。

圖3 不同產(chǎn)地顯微圖

2.3 檢查

原標(biāo)準(zhǔn)無此項(xiàng)目，實(shí)驗(yàn)按《中國藥典》2020版通則項(xiàng)下規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.3.1 水分

按照2020年《中國藥典》第四部通則0832水分測定法的第二法烘干法測定不同產(chǎn)地蔊菜樣品水分含量。取不同產(chǎn)地蔊菜粉末(過四號篩)2g，平鋪于預(yù)先105℃干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，精密稱定，開啟瓶蓋在105℃干燥5h，蓋好瓶蓋，移置干燥器中，放冷30min，精密稱定，再在105℃溫度干燥1h，重復(fù)上述操作，直至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為恒重。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量(%)。3批蔊菜水分含量值為13.1%、10.8、13.0%，平均值為12.3%。

2.3.2 酸不溶性灰分

按照2020年《中國藥典》第四部通則2302測定不同產(chǎn)地蔊菜樣品酸不溶性灰分含量?？偦曳郑簩③釄逯糜?50℃馬弗爐中熾灼至恒重，準(zhǔn)確至0.0lg稱定蔊菜粉末(過40目)2g，置于馬弗爐中緩緩熾熱，溫度逐漸升高至550℃，注意避免燃燒，完全灰化并至恒重，計(jì)算供試品中總灰分的含量(%)。酸不溶性灰分：直接在上述恒重好的灰分坩堝中小心加入稀鹽酸15mL，坩堝用表面皿覆蓋，并置于沸水浴上加熱10分鐘，用5mL熱水分多次沖洗表面皿，洗液全部并入坩堝中，使用定量濾紙(灰分≤0.01%)濾過，殘?jiān)盟啻螞_洗于濾紙上，直至洗液不顯氯化物反應(yīng)。濾渣連同濾紙同一移置于坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算供試品中酸不溶性灰分的含量(%)。

各批蔊菜酸不溶性灰分分別為0.53%、0.52%、0.56%，平均含量分別為0.54%。

2.4 浸出物

原標(biāo)準(zhǔn)無此項(xiàng)目，對所有藥材試樣，分別考查水冷浸法、水熱浸法和30%，50%，70%，100%濃度醇溶性浸出物，通過結(jié)果比較可知，熱浸法的水溶性浸出物含量高于其他溶劑，故實(shí)驗(yàn)選擇水熱浸法。根據(jù)測定結(jié)果，檢測值分別為36.96%、38.94%、40.59%，平均值38.83，暫定浸出物標(biāo)準(zhǔn)不得少于30.0%。

3 討論

3.1 薄層鑒別

本實(shí)驗(yàn)考查了供試品制備方法、薄層色譜條件的展開系統(tǒng)和溫濕度，建立了以蘆丁為對照的薄層色譜方法。本方法簡單、重現(xiàn)性好、薄層色譜斑點(diǎn)清晰，可對蔊菜藥材進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的定性鑒別，有助于豬鬃草標(biāo)準(zhǔn)的提高優(yōu)化。

3.2 檢查項(xiàng)

經(jīng)測定3批蔊菜水分藥材平均值為12.3%，建議蔊菜藥材中水分不得過15.0%；測定蔊菜總灰分平均值為14.2%，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，草類樣本由于采集時(shí)根莖泥沙較多，導(dǎo)致灰分?jǐn)?shù)據(jù)不好控制，從而進(jìn)一步針對酸不溶性灰分情況進(jìn)行考察；蔊菜酸不溶性灰分平均值為0.54%，建議蔊菜酸不溶性灰分不得過3.0%。根據(jù)提取溶劑和提取條件的考查，確定了蔊菜的浸出物測定方法，測試蔊菜的浸出物含量，結(jié)果蔊菜藥材水溶熱浸出物平均值為38.83%，建議蔊菜水溶性熱浸出物不得少于30.0%。

由于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版中僅有鑒別項(xiàng)，未見檢查項(xiàng)。本文建立的顯微、薄層色譜鑒別方法和檢查項(xiàng)限值建議，能更加系統(tǒng)地控制蔊菜藥材的質(zhì)量，為完善蔊菜藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠的方法和依據(jù)參考文獻(xiàn)。