飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌對半滑舌鰨生長、存活率、免疫反應和抗氧化能力的影響

張傳濤，趙炳然，孫祥山，黃經(jīng)獻，曹金鳳

(中國水產(chǎn)科學研究院下營增殖實驗站，山東 昌邑261300)

半滑舌鰨是我國特有的海水魚養(yǎng)殖品種，野生群體主要分布在黃渤海域。半滑舌鰨具有很高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值，是我國沿海地區(qū)重要的養(yǎng)殖對象，目前已經(jīng)實現(xiàn)工廠化養(yǎng)殖，前景廣闊。隨著工廠化養(yǎng)殖的不斷發(fā)展，高密度養(yǎng)殖導致養(yǎng)殖環(huán)境惡化，病害頻繁發(fā)生，嚴重制約了半滑舌鰨產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。大量使用抗生素來預防和治療半滑舌鰨疾病不僅導致養(yǎng)殖成本增加，而且還會導致環(huán)境污染和食品安全問題。合理有效地使用益生菌成為水產(chǎn)養(yǎng)殖綠色發(fā)展的重要保障。在水產(chǎn)養(yǎng)殖上，益生菌的使用可以通過向飼料或者養(yǎng)殖水體中進行添加。益生菌能夠抑制魚腸道中的有害微生物，調(diào)節(jié)水產(chǎn)動物體內(nèi)的微生態(tài)平衡，從而起到防治疾病和增進健康的作用。植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌作為水產(chǎn)養(yǎng)殖最常用的兩種益生菌，已經(jīng)得到了廣泛應用，并取得了很好的養(yǎng)殖效果。本文對飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌飼喂半滑舌鰨進行研究，對提高半滑舌鰨生長性能、存活率、免疫力和抗氧化能力有重要的意義。

益生菌作為天然無污染的新一代凈水和防病產(chǎn)品，仍有很大的發(fā)展前景。益生菌可以最大限度地提升水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量和綜合生產(chǎn)能力(韓卓然等，2016)。因此，在半滑舌鰨飼料中添加益生菌，能提高養(yǎng)殖經(jīng)濟效益。本試驗是在半滑舌鰨基礎飼料中添加益生菌，旨在探討其對半滑舌鰨生長性能、存活率、免疫反應和抗氧化能力的影響，為益生菌在半滑舌鰨苗種生產(chǎn)中的推廣應用提供依據(jù)。

本試驗利用半滑舌鰨幼魚為研究材料，在基礎飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌來提高半滑舌鰨生長性能和健康狀況。在工廠化養(yǎng)殖條件下進行了8周的飼養(yǎng)試驗，研究了兩種益生菌在生長參數(shù)、免疫指標和抗氧化能力等方面的作用。該研究為合理使用益生菌提供基礎資料，有利于提高半滑舌鰨的質(zhì)量和產(chǎn)量。

一、材料與方法

1.試驗飼料準備

將植物乳桿菌(粉末，約5.0×107CFU/克)和枯草芽孢桿菌(粉末，約2.0×1011CFU/克)產(chǎn)品分別添加到基礎日糧中?；A飼料主要成分為魚粉、蝦粉、魚油、豆粕、淀粉、維生素混合物和礦物質(zhì)混合物。然后通過商業(yè)化生產(chǎn)將所有原料制成不同大小的顆粒飼料。試驗組飼料基礎日糧中分別添加植物乳桿菌(1.0×1010CFU/克飼料)和枯草芽孢桿菌(1.0×108CFU/克飼料)，對照組飼喂基礎日糧，不添加益生菌。飼料生產(chǎn)商提供的基礎日糧干物質(zhì)水平為：粗蛋白質(zhì)≥45.0%，粗脂肪≥10.0%，粗纖維≤3.0%，粗灰分≤16.0%，鈣≤4.0%，賴氨酸≥2.5%，總磷1.5%～3.0%。

2.試驗動物與飼養(yǎng)管理

將2 160尾半滑舌鰨幼魚(約4月齡)隨機分為3組，每組720尾，放養(yǎng)在3個3米3玻璃鋼水缸中(每缸240尾)。在養(yǎng)殖期間，水溫控制在22～24℃，鹽度為28～32，日換水率300%～400%，日投餌兩次(08:00和18:00)，投食以喂飽為準，流水養(yǎng)殖，投喂1小時后清污。

3.生長性能和存活率

放養(yǎng)前，每組每缸隨機撈取30尾魚測量體重，作為初體重。在試驗結(jié)束時停食24小時，每組每缸隨機撈取30尾魚分別測量體重，作為終末體重，并統(tǒng)計每個缸的存活魚數(shù)量。

4.樣本采集

在飼養(yǎng)試驗結(jié)束時，每缸中隨機選取3尾魚，從尾靜脈抽取約1毫升全血樣本(n＝27)，然后用無菌離心管(1.5毫升)收集。血液樣品在室溫下凝集1小時，離心分離，在-80℃下保存?zhèn)溆?。然后在無菌條件下立即將魚解剖，取新鮮肝臟、胃和腸組織樣本(n＝27)，在-80℃下保存?zhèn)溆?。分析樣本前，將樣本解凍，稱取1克組織并添加9克磷酸鹽緩沖液進行勻漿，然后離心10分鐘，仔細分離上清液以進行后續(xù)分析。

5.免疫指標和抗氧化能力測定

采用血清測定其中溶菌酶(LZM)、免疫球蛋白M(IgM)、補體蛋白3(C3)和補體蛋白4(C4)的含量；采用肝臟勻漿上清液測定其抗氧化能力指標，包括過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力、總抗氧化物(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量。所有參數(shù)和指標使用魚用ELISA試劑盒(南京建成生物技術(shù)有限公司)進行測定。

6.統(tǒng)計分析

統(tǒng)計分析前，采用Shapiro-Wilk檢驗和Leave檢驗分別分析各組間存活率(經(jīng)過了平方根反正弦轉(zhuǎn)化)和所有數(shù)據(jù)的正態(tài)性和方差的均勻性。采用單因素方差分析(ANOVA)確定各參數(shù)指標的顯著性差異，其中顯著性水平設為P＜0.05。采用SPSS 25軟件進行統(tǒng)計學分析，結(jié)果表示為“平均值±標準誤”。

二、結(jié)果

1.生長性能參數(shù)與存活率

各組的半滑舌鰨初始平均體重、終末平均體重和存活率見表1。由表1可見，飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌后，半滑舌鰨的末體重均顯著高于對照組(P＜0.05)，并且飼料中添加枯草芽孢桿菌組的末體重顯著高于植物乳桿菌組(P＜0.05)，說明植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌能夠促進半滑舌鰨生長，并且枯草芽孢桿菌的效果更好。飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌后，半滑舌鰨的存活率均顯著提高(P＜0.05)，植物乳桿菌組存活率最高，并且顯著高于枯草芽孢桿菌組(P＜0.05)，說明飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌都能夠提高半滑舌鰨的養(yǎng)殖成活率，植物乳桿菌的效果更明顯。

表1 各組半滑舌鰨初始平均體重、終末平均體重和存活率

2.免疫學指標

血清中LZM的活力以及IgM、C3和C4的濃度見表2。整體上與對照組相比，飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌能夠顯著提高半滑舌鰨血清中LZM活力和IgM、C3和C4的濃度(P＜0.05)。其中添加植物乳桿菌的效果更明顯，植物乳桿菌組的4種免疫指標除了C4濃度，其他3種免疫指標均顯著高于枯草芽孢桿菌組(P＜0.05)。上述結(jié)果表明，飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌能夠提高血清的免疫水平，植物乳桿菌的效果優(yōu)于枯草芽孢桿菌。

表2 半滑舌鰨免疫指標

3.肝臟抗氧化能力

飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌后半滑舌鰨肝臟抗氧化指標見表3。與對照組相比，飼料中添加植物乳桿菌后，肝臟中SOD和CAT的活力顯著升高(P＜0.05)，并且MDA的含量顯著降低(P＜0.05)，但是T-AOC的活力只有略微升高(P＞0.05)；飼料中添加枯草芽孢桿菌后，肝臟中SOD、CAT和T-AOC的活力均顯著升高(P＜0.05)，MDA的含量顯著降低(P＜0.05)。植物乳桿菌組和枯草芽孢桿菌組相比，4種抗氧化指標上互有優(yōu)勢，枯草芽孢桿菌組的SOD和T-AOC活力顯著高于植物乳桿菌組(P＜0.05)，植物乳桿菌組的CAT活力略高于枯草芽孢桿菌組(P＞0.05)，植物乳桿菌組肝臟中MDA含量略低于枯草芽孢桿菌組(P＞0.05)。結(jié)果表明，這兩種益生菌對半滑舌鰨肝臟抗氧化能力具有很大的影響，整體上飼料中添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌后半滑舌鰨肝臟的抗氧化能力大大提高。

表3 半滑舌鰨肝臟抗氧化指標

三、小結(jié)與討論

益生菌作為飼料添加劑在養(yǎng)殖魚的疾病控制和促進生長方面具有很大的潛力，并且目前已經(jīng)在水產(chǎn)養(yǎng)殖上得到了廣泛應用。但是，在半滑舌鰨養(yǎng)殖方面，關(guān)于益生菌的報道很少。因此，為查明植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌對半滑舌鰨的影響，本文將這兩種益生菌分別添加到飼料中，并對其生長性能、存活率、免疫指標和抗氧化指標進行監(jiān)測。

在本試驗中，飼料中分別添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌后，半滑舌鰨的生長性能和存活率顯著提升。研究結(jié)果顯示，植物乳桿菌在促進半滑舌鰨存活率方面更有優(yōu)勢，因為添加植物乳桿菌組的存活率顯著高于添加枯草芽孢桿菌組，這一結(jié)論也可以從植物乳桿菌能夠顯著提高半滑舌鰨免疫指標方面得到印證，因為投喂植物乳桿菌組的多種免疫指標顯著高于枯草芽孢桿菌組。而枯草芽孢桿菌在提高生長速度方面相比植物乳桿菌具有更大的優(yōu)勢，因為投喂枯草芽孢桿菌組的半滑舌鰨末體重顯著高于植物乳桿菌組。這兩種益生菌都能顯著提高半滑舌鰨肝臟抗氧化能力。本文的研究結(jié)果表明，植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌能夠顯著提高半滑舌鰨的健康水平并促進其快速生長。

綜上所述，飼料中分別添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌可以提高半滑舌鰨的生長性能和健康水平，這些有益作用主要歸因于免疫指標和抗氧化能力的提高。在飼料中分別添加植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌可以提高半滑舌鰨的生長性能、抗病力(高存活率)、血清免疫指標和肝臟抗氧化能力。因此，在半滑舌鰨養(yǎng)殖中，建議將植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌復合使用。