山東省部分地區(qū)水貂養(yǎng)殖場戶貂源冠狀病毒和新型冠狀病毒認知調查及病原檢測

劉硯涵，黨安坤，徐 鴻，張 棟，李玉杰，藺曉月，蘭鄒然，王貴升

（山東省動物疫病預防與控制中心，山東濟南 250100）

2019 年底至今，新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）引起的新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）疫情（以下簡稱新冠疫情）在世界范圍內大流行，不僅導致全球多數(shù)國家和地區(qū)人員的嚴重感染和死亡，還影響了全球人民的工作和生活，更是給全球經(jīng)濟發(fā)展和公共衛(wèi)生帶了巨大挑戰(zhàn)，也給經(jīng)濟動物養(yǎng)殖和畜牧業(yè)健康發(fā)展帶來了巨大威脅。

近幾年，我國水貂、狐貍等毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)處于谷底，很多養(yǎng)殖場戶喪失信心放棄飼養(yǎng)[1]。雪上加霜的是，新冠疫情初期，《新京報》報道了北京大學朱懷球團隊的研究成果，認為蝙蝠和水貂可能是SARS-CoV-2 的潛在宿主，而水貂可能是潛在中間宿主，從而引發(fā)了水貂養(yǎng)殖者的巨大恐慌。2020 年4 月，荷蘭首次報道在一家水貂養(yǎng)殖場發(fā)現(xiàn)水貂感染SARS-CoV-2，隨后丹麥、波蘭等多個國家相繼報道水貂及其雇員出現(xiàn)SARS-CoV-2 陽性，甚至出現(xiàn)了“人—水貂—人”的跨種傳播鏈條。為此，丹麥、荷蘭政府撲殺了近270 萬只水貂，荷蘭還出臺了禁止飼養(yǎng)水貂的法律[2-4]。截至目前，我國雖然尚未報道有水貂或其養(yǎng)殖戶感染SARSCoV-2，但丹麥、荷蘭等國家撲殺或禁飼水貂的情況引起了大多數(shù)養(yǎng)殖場戶的擔憂，這將直接影響到水貂養(yǎng)殖業(yè)的生存。

水貂冠狀病毒（mink coronavirus，MCoV）主要引起水貂的卡他性腹瀉（也稱水貂流行性卡他性胃腸炎），導致感染水貂出現(xiàn)精神萎靡、食欲不振、被毛無光澤、腹瀉以及排綠色、灰白色及粉黃色黏液狀稀便等臨床癥狀[5]。1987 年我國從丹麥、美國等國家引進種貂時引入MCoV。近年來，山東省水貂養(yǎng)殖場戶偶有MCoV 感染發(fā)生，感染率不高，引起的死亡率通常也較低[6]。目前的研究[7]表明，SARS-CoV-2 由貂源冠狀病毒重組而來的可能性較小，但水貂養(yǎng)殖戶對MCoV 和SARS-CoV-2的區(qū)別及其關聯(lián)性的認知程度以及基層養(yǎng)殖場戶是否受到國外撲殺水貂事件的影響尚不清楚。同時，為證實水貂是否感染或攜帶SARS-CoV-2，本研究對表現(xiàn)腹瀉癥狀的水貂采集糞便進行了MCoV 和SARS-CoV-2 檢測，以期為新冠疫情的聯(lián)防聯(lián)控以及水貂養(yǎng)殖業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 認識調查

2021 年5—7 月，在山東省部分水貂養(yǎng)殖密集地區(qū)（威海、青島、煙臺、濰坊、臨沂、日照、菏澤和泰安），對養(yǎng)殖場戶開展MCoV 和SARSCoV-2 相關性認知調查。采用問卷調查方式，題型以單選和多選為主，內容涉及養(yǎng)殖場戶基本情況以及水貂感染MCoV 和SARS-CoV-2 的認知情況等。問卷設計完成后，利用專家咨詢法進行修改完善，最后使用“問卷星”平臺生成問卷二維碼，發(fā)放問卷，回收調查結果。

1.2 樣品采集

采集來自19 個水貂養(yǎng)殖場戶中有腹瀉癥狀的水貂糞便樣品310 份，其中菏澤30 份、臨沂30 份、青島40 份、日照30 份、濰坊30 份、煙臺30 份、威海30 份、泰安90 份。

1.3 病原檢測

將新鮮糞便置于1.5 mL 離心管中用PBS 溶解，震蕩混勻，8 000 r/min 離心5 min，取上清液200 μL，用羅氏全自動核酸提取儀提取核酸，然后將提取的核酸使用MCoV 和SARS-CoV-2 雙重熒光RT-PCR 檢測試劑盒（購自北京森康生物技術開發(fā)有限公司）按照說明書進行檢測。

選定FAM 檢測通道讀取SARS-CoV-2 檢測結果，選定VIC 檢測通道讀取MCoV 檢測結果。當兩個檢測通道均無Ct 值，且無特征性擴增曲線，陽性對照Ct 值均≤32，并出現(xiàn)典型的擴增曲線，表明樣品為陰性。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

原始數(shù)據(jù)使用Excel 軟件進行統(tǒng)計，計數(shù)資料用率（%）表示。

2 結果與分析

2.1 養(yǎng)殖情況

此次認知調查共收到問卷207 份，經(jīng)核驗全部有效。統(tǒng)計結果（圖1）顯示：山東省水貂養(yǎng)殖模式以散養(yǎng)戶（63.77%）為主，其次是商品代場（33.82%）；養(yǎng)殖種類以僅養(yǎng)水貂一種（44.93%）為主，其次是水貂和貉子混養(yǎng)（29.47%）以及水貂和犬混養(yǎng)（17.39%）。

2.2 認知情況

調查結果（圖2～3）顯示：47.83%的養(yǎng)殖場戶對荷蘭、丹麥水貂因感染SARS-CoV-2 被撲殺事件較為了解，且36.23%的養(yǎng)殖場戶認為該事件會對水貂養(yǎng)殖業(yè)帶來影響；33.33%的養(yǎng)殖場戶進行過養(yǎng)殖人員SARS-CoV-2 核酸檢測，其中10.14%的養(yǎng)殖場戶進行過水貂SARS-CoV-2 核酸檢測；84.06%的養(yǎng)殖場戶認為，MCoV 不感染人；57.94%的養(yǎng)殖場戶認為，荷蘭、丹麥等國家水貂感染SARS-CoV-2 的途徑是通過養(yǎng)殖場內的其他動物（如犬貓等），37.68%認為是通過人傳染給水貂的，37.68%認為是水貂自身攜帶病毒；0.97%的養(yǎng)殖場戶認為，MCoV 和SARS-CoV-2 有關系，更多的（52.17%）是不清楚。

2.3 實驗室檢測

檢測結果顯示，310 水貂糞便樣品兩個檢測通道均無Ct 值，且無特征性擴增曲線，均為陰性，說明均未感染MCoV 和SARS-CoV-2。

3 討論

新冠疫情流行至今，全球已有多個國家和地區(qū)報道多種動物感染SARS-CoV-2，涉及貓、犬、雪貂、水貂、大熊貓等[8]，其中水貂報道出現(xiàn)了與人的互相傳播，導致荷蘭、丹麥、美國等國家撲殺水貂超過270 萬只，使水貂養(yǎng)殖業(yè)幾乎瀕臨絕境[3]。山東作為水貂養(yǎng)殖大省，養(yǎng)殖戶對于國外水貂遭到撲殺事件的認知程度對其養(yǎng)殖信心十分重要。本次調查發(fā)現(xiàn)，山東省近半數(shù)的養(yǎng)殖場戶對荷蘭、丹麥水貂因感染SARS-CoV-2 被撲殺事件有所了解，有10.14%的養(yǎng)殖場戶給自家水貂也進行過SARS-CoV-2 核酸檢測，可見國外撲殺染水貂事件引發(fā)了養(yǎng)殖戶的擔憂，或擔心水貂感染SARSCoV-2 后傳染給人。此外，絕大多數(shù)養(yǎng)殖戶認為撲殺水貂事件對水貂養(yǎng)殖業(yè)影響甚微，且84.06%的養(yǎng)殖戶認為MCoV 不會感染人，僅有0.97%認為MCoV 和SARS-CoV-2 可能存在一定關系，可見養(yǎng)殖戶們對于水貂養(yǎng)殖依然持樂觀態(tài)度，這對于水貂養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展十分重要。此外，大多數(shù)養(yǎng)殖戶認為荷蘭、丹麥等國家的水貂感染SARS-CoV-2 的主要途徑是通過水貂養(yǎng)殖場其他動物（如犬貓）感染，這可能是受到家養(yǎng)貓出現(xiàn)SARS-CoV-2 核酸陽性報道的影響。

在病毒學分類上，SARS-CoV-2 與MCoV 不是同一屬的冠狀病毒[9-10]。本研究中310 份來自山東省8 個水貂養(yǎng)殖密集市的腹瀉樣品中均未檢測到MCoV 與SARS-CoV-2，說明目前水貂中并未發(fā)現(xiàn)MCoV 和SARS-CoV-2 感染。然而，動物冠狀病毒具有遺傳多樣性，容易發(fā)生變異和重組，且人工感染試驗證實雪貂對SARS-CoV-2 易感[11-12]。水貂、狐貍和貉等特種經(jīng)濟動物養(yǎng)殖近年來在山東省得到了長足發(fā)展，已經(jīng)成為全省畜牧業(yè)養(yǎng)殖的重要組成部分，基于全球同一健康的防控理念，要繼續(xù)加強毛皮動物的MCoV 和SARS-CoV-2 監(jiān)測工作，重視養(yǎng)殖場生物安全水平的提升。

4 結論

山東省水貂養(yǎng)殖場戶普遍認為MCoV 和SARS-CoV-2 相關性較小，對水貂養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展影響不大，但鑒于其對水貂的潛在危害和公共衛(wèi)生威脅以及部分場戶對其不了解，需要繼續(xù)對水貂養(yǎng)殖場戶開展MCoV和SARS-CoV-2認知宣傳和監(jiān)測。