基于HPLC多指標(biāo)成分測定及指紋圖譜多模式識(shí)別方法的北細(xì)辛質(zhì)量分析

李 妍，何文媛，王康宇，白羽辛，高文義，貢濟(jì)宇

基于HPLC多指標(biāo)成分測定及指紋圖譜多模式識(shí)別方法的北細(xì)辛質(zhì)量分析

李 妍，何文媛，王康宇，白羽辛，高文義*，貢濟(jì)宇*

長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130117

通過HPLC多成分含量測定與指紋圖譜的多模式化學(xué)識(shí)別方法對(duì)北細(xì)辛var.進(jìn)行不同產(chǎn)地質(zhì)量分析研究，為北細(xì)辛藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。收集了4個(gè)產(chǎn)區(qū)的18批細(xì)辛樣品，采集HPLC指紋圖譜并進(jìn)行3種有效成分的含量測定，通過聚類分析（cluster analysis，CA）、主成分分析（principal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘法判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）分別探討不同產(chǎn)區(qū)北細(xì)辛的質(zhì)量。建立了北細(xì)辛藥材的指紋圖譜，確定共有峰17個(gè)，指認(rèn)了3個(gè)共有峰。甲基丁香酚、芝麻脂素、細(xì)辛脂素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.76～32.98、1.03～6.05、1.59～6.91 mg/g。CA可將4個(gè)產(chǎn)地北細(xì)辛藥材聚為2類，PCA結(jié)果提取了2個(gè)主成分，OPLS-DA能有效地將2大產(chǎn)區(qū)藥材明顯地區(qū)分開。通過北細(xì)辛HPLC含量測定與指紋圖譜建立的多模式識(shí)別法全面評(píng)價(jià)了北細(xì)辛的質(zhì)量，為北細(xì)辛藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)，可作為北細(xì)辛質(zhì)量控制的有效方法。

細(xì)辛；HPLC；指紋圖譜；化學(xué)模式識(shí)別；質(zhì)量評(píng)價(jià)；甲基丁香酚；芝麻脂素；細(xì)辛脂素

細(xì)辛是一味臨床常用中藥，首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，《中國藥典》2020年版記載細(xì)辛為馬兜鈴科植物北細(xì)辛Fr. Schmidt var.(Maxim.) Kitag.、漢城細(xì)辛Miq. var.Nakai或華細(xì)辛Miq.的干燥根和根莖，其味辛、性溫、歸心、肺、腎經(jīng)，具有解表散寒、祛風(fēng)止痛、通竅、溫肺化飲的功效?？捎糜陲L(fēng)寒感冒、頭痛、牙痛、鼻塞流涕、鼻軌、鼻淵、風(fēng)濕痹痛、痰飲喘咳[2]。其中北細(xì)辛主要分布在吉林、遼寧、黑龍江一帶。根據(jù)細(xì)辛最新藥理研究進(jìn)展，細(xì)辛具有對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用，以及鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗病毒、抗衰老、保護(hù)心血管等作用，其臨床效果顯著，具有重要的研究價(jià)值。明代李時(shí)珍《本草綱目》[3]記載：“承曰：細(xì)辛···若單用末，不可過一錢，多則氣悶塞不通者死，雖死無傷?！ぁぁし潜居卸?，但有識(shí)多寡耳?！苯┠觋P(guān)于細(xì)辛中馬兜鈴酸致腎毒性的報(bào)道越來越多，在臨床上正確合理運(yùn)用細(xì)辛也越來越重要。

中藥材產(chǎn)區(qū)直接影響藥材的質(zhì)量以及有效成分的含量，也可能對(duì)其毒性有一定的影響，王志清等[4]通過對(duì)遼寧、吉林、黑龍江3個(gè)產(chǎn)地的北細(xì)辛進(jìn)行了含量測定，其結(jié)果顯示樣品間的有效成分含量差異主要是來自樣品自身光合產(chǎn)物次生代謝與合成的差異，其中細(xì)辛揮發(fā)油成分為苯丙烷類化合物，苯丙烷類化合物的次生代謝與光照強(qiáng)度強(qiáng)弱有關(guān)[5]，因此，細(xì)辛揮發(fā)油含量是受環(huán)境條件和遺傳基因雙重影響的。曹晨等[6]通過ICP-AES和ICP-MS測定不同產(chǎn)地的無機(jī)元素，表明不同產(chǎn)地的細(xì)辛藥材中無機(jī)元素差異較大。也進(jìn)一步闡明了不同產(chǎn)區(qū)對(duì)中藥材的影響差異較大。但目前沒有一種手段來全面而準(zhǔn)確地反映不同產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材的差異。

近年來，中藥指紋圖譜與化學(xué)模式識(shí)別相結(jié)合，已成為目前最常用最有效的控制天然藥材質(zhì)量的手段[7]。本研究收集遼寧、吉林2大主產(chǎn)區(qū)北細(xì)辛藥材，共計(jì)18批藥材樣品，通過指紋圖譜、有效成分的含量測定與聚類分析（cluster analysis，CA）、主成分分析（principal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘法（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）等化學(xué)模式識(shí)別法對(duì)北細(xì)辛不同產(chǎn)地進(jìn)行質(zhì)量分析研究，為多指標(biāo)的復(fù)雜含量測定與指紋圖譜相結(jié)合的方法評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地藥材質(zhì)量提供有效的參考，同時(shí)也為其他道地藥材產(chǎn)地質(zhì)量評(píng)價(jià)提供新思路。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC-2030型高效液相色譜儀（DGC-20A型在線脫氣系統(tǒng)，SIL-20A型自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，UV檢測器，日本島津公司），AB135-S型1/10萬電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司），AL204型1/1萬分之一電子天平型（瑞士梅特勒-托利多公司），KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），TGL16E型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（長沙英泰儀器有限公司），GR1508型粉碎機(jī)。

1.2 試劑

對(duì)照品細(xì)辛脂素（批號(hào)P11D8S50449，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、芝麻脂素（批號(hào)KS0927CB14，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）購買于上海源葉生物科技有限公司；甲基丁香酚對(duì)照品（供含量測定使用，批號(hào)111642-200301）購買于中國藥品生物制品檢定所；乙腈（Fisher公司，色譜純）；屈臣氏蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；其余試劑均為分析純。

收集4個(gè)不同產(chǎn)地的18批細(xì)辛藥材，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室蔡廣知副教授鑒定為馬兜鈴科植物北細(xì)辛Fr. Schmidt var.(Maxim.) Kitag.的干燥根和根莖。藥材信息見表1。

表1 北細(xì)辛藥材信息

Table 1 Information table of A. heterotropoides var. mandshuricum

編號(hào)產(chǎn)地批號(hào) S1遼寧新賓XX180321 S2遼寧新賓XX180323 S3遼寧新賓XX180325 S4遼寧新賓XX180324 S5遼寧鞍山1709062 S6遼寧鞍山1709063 S7遼寧鞍山1709061 S8遼寧鞍山1709064 S9吉林通化JLT20190803 S10吉林通化JLT20190802 S11吉林通化JLT20190804 S12吉林通化JLT20190801 S13吉林通化JLT20190805 S14吉林靖宇JLJ01 S15吉林靖宇JLJ02 S16吉林靖宇JLJ03 S17吉林靖宇JLJ04 S18吉林靖宇JLJ05

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

依利特C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈（A）-水（B）；梯度洗脫：0～10 min，5%～16% A；10～15 min，16%～27% A；15～35 min，27%～37% A；3～50 min，37%～43% A；50～60 min，43%～52% A；60～70 min，52%～54% A；柱溫為30 ℃；檢測波長為287 nm；進(jìn)樣量為10 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取各對(duì)照品細(xì)辛脂素、芝麻脂素、甲基丁香酚適量，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成分別含細(xì)辛脂素0.103 4 mg/mL、芝麻脂素0.102 0 mg/mL、甲基丁香酚0.100 0 mg/mL的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取細(xì)辛藥材粉末（三號(hào)篩）約1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率500 W、頻率40 kHz）45 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，13 000 r/min離心10 min，取上清液，即得。

2.3 細(xì)辛指紋圖譜的建立

2.3.1 精密度試驗(yàn) 取細(xì)辛藥材S9，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，以甲基丁香酚（12號(hào)色譜峰）為參照蜂，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積。結(jié)果表明各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD值均小于2.8%，相對(duì)峰面積的RSD值均小于4.0%。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取細(xì)辛藥材S9，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫下放置，分別在0、2、4、8、10、12 h后按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以甲基丁香酚（12號(hào)色譜峰）為參照蜂，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積。結(jié)果表明各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD值均小于1.8%，相對(duì)峰面積的RSD值均小于4.7%。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取細(xì)辛藥材S9，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，照上述“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC分析，以甲基丁香酚（12號(hào)色譜峰）為參照蜂，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積。結(jié)果表明各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD值均小于2.1%，相對(duì)峰面積的RSD值均小于4.9%。

2.3.4 HPLC指紋圖譜的建立 分別取18批樣品按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，得到18批細(xì)辛藥材的HPLC色譜圖。將18批樣品色譜圖導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》進(jìn)行分析，以S1為參照?qǐng)D譜，采用平均數(shù)法譜峰多點(diǎn)校正生成細(xì)辛圖譜，見圖1。其中確定共有峰有17個(gè)，通過與混合對(duì)照品溶液的色譜圖（圖2）比對(duì)，指認(rèn)出3個(gè)成分，分別為甲基丁香酚（12號(hào)峰）、芝麻脂素（13號(hào)峰）、細(xì)辛脂素（15號(hào)峰），18批細(xì)辛藥材HPLC指紋圖譜見圖1。

圖1 18批北細(xì)辛藥材HPLC指紋圖譜

12-甲基丁香酚 13-芝麻脂素 15-細(xì)辛脂素

2.4 相似度評(píng)價(jià)

將18批細(xì)辛樣品色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》進(jìn)行分析，計(jì)算相似度，結(jié)果見表2。18批細(xì)辛樣品色譜圖與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度為0.900～0.970，說明18批細(xì)辛樣品的整體質(zhì)量較穩(wěn)定。

表2 18批北細(xì)辛樣品指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)結(jié)果

Table 2 Similarity calculation results of 18 batches of A. heterotropoides var. mandshuricum

藥材編號(hào)相似度藥材編號(hào)相似度 S10.925S100.919 S20.900S110.933 S30.901S120.916 S40.934S130.925 S50.967S140.921 S60.965S150.903 S70.941S160.912 S80.970S170.903 S90.915S180.907

2.5 CA

采用SPSS 25統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)細(xì)辛進(jìn)行CA，將18批細(xì)辛的相對(duì)共有峰峰面積導(dǎo)入到SPSS 25統(tǒng)計(jì)軟件，以組間聯(lián)接法及皮爾遜相關(guān)性作為分類依據(jù)獲得分析結(jié)果，見圖3。當(dāng)分類距離為18時(shí)，18批細(xì)辛分為2類，第1類為S1～S8，其S1～S8均為遼寧地區(qū)的細(xì)辛藥材；第2類為S9～S18，這10批樣品均為吉林地區(qū)的細(xì)辛藥材；當(dāng)分類距離為8時(shí)，18批藥材可分為4類，第1類為S1～S4，這4批均為遼寧新賓產(chǎn)區(qū)的細(xì)辛藥材；第2類為S5～S7，均為遼寧鞍山產(chǎn)區(qū)的藥材；第3類為S14、S17、S18，均為吉林靖宇產(chǎn)區(qū)的細(xì)辛藥材；第4類為S9～S13、S15、S16，其中S9～S13為吉林通化產(chǎn)區(qū)的細(xì)辛藥材，S15、S16為吉林靖宇產(chǎn)區(qū)的細(xì)辛藥材。這說明遼寧產(chǎn)區(qū)和吉林產(chǎn)區(qū)的細(xì)辛藥材具有明顯的差異。

圖3 18批北細(xì)辛樣品CA圖

2.6 PCA

將18批細(xì)辛共有峰峰面積導(dǎo)入SIMCA 13.0軟件進(jìn)行PCA，得分矩陣圖（2為0.916，2為0.653）見圖4。從得分圖來看，18批樣品聚類效果不是很明顯，軸以上的10批藥材為吉林產(chǎn)區(qū)的細(xì)辛藥材；軸以下的8批藥材為遼寧產(chǎn)區(qū)的細(xì)辛藥材，其中位于第3象限的S5～S8為遼寧鞍山的細(xì)辛藥材，位于第4象限的S2～S4為遼寧新賓的細(xì)辛藥材，其中S1較為特殊。從整體來看說明18批細(xì)辛藥材存在一定的差異。

2.7 OPLS-DA

以18批細(xì)辛樣品共有峰峰面積為變量，導(dǎo)入SIMCA13.0軟件進(jìn)行OPLS-DA，得分矩陣圖見圖5。該OPLS-DA模型，2＝0.905，2＝0.813，均大于0.5，說明模型穩(wěn)定可靠，可用于不同產(chǎn)區(qū)樣品的分析。從得分圖來看，2類樣本點(diǎn)完全被分開，樣本點(diǎn)之間沒有交叉。18批樣品分為2類，S1～S8號(hào)樣品聚為一類均為遼寧產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材，S9～S18號(hào)樣品聚為一類均為吉林產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材。

結(jié)合變量重要性投影值（variable importance in the projection，VIP）見圖6，采用VIP值的判定方法篩選差異組分，以VIP＞1.0作為標(biāo)準(zhǔn)篩選出對(duì)模型上2組間分類貢獻(xiàn)較大的8個(gè)變量，依次為1號(hào)峰、12號(hào)峰（細(xì)辛脂素）、2號(hào)峰、5號(hào)峰、8號(hào)峰、6號(hào)峰、7號(hào)峰、13號(hào)峰（芝麻脂素）是引起細(xì)辛不同產(chǎn)區(qū)間成分差異的主要標(biāo)志性成分，其余峰VIP值小于1，對(duì)樣品的區(qū)分影響較小。

圖4 18批細(xì)辛藥材PCA得分

圖5 18批細(xì)辛藥材OPLS-DA得分圖

F1～17-峰1～17

2.8 HPLC測定細(xì)辛中3種有效成分的含量

2.8.1 線性關(guān)系考察 精密移取“2.2.1”項(xiàng)下各對(duì)照品溶液適量，稀釋成一系列不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液（＝6），按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到3種成分的回歸方程，結(jié)果見表3。

表3 3種成分線性關(guān)系結(jié)果

Table 3 Result of linear-regression analysis of three constituents

成分回歸方程線性范圍/(μg·mL?1)R2 甲基丁香酚Y＝5 679.4 X＋4 697.666.700～400.0000.999 8 芝麻脂素Y＝12 160 X－23 32457.000～342.0000.999 3 細(xì)辛脂素Y＝10 147 X－11 40335.700～214.0000.999 6

2.8.2 精密度試驗(yàn) 取細(xì)辛藥材（S9），按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各成分峰面積，結(jié)果甲基丁香酚、芝麻脂素、細(xì)辛脂素峰面積RSD依次分別為2.14%、1.27%、1.37%，均小于3%，表明儀器精密度良好。

2.8.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取細(xì)辛藥材（S9），按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫下放置，分別在0、2、4、8、12、24 h后按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄各成分峰面積，結(jié)果甲基丁香酚、芝麻脂素、細(xì)辛脂素峰面積RSD依次分別為0.32%、0.2%、0.2%，均小于3%，表明樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取細(xì)辛藥材（S9），按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，照上述“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC分析，記錄色譜峰面積，測得各成分含量，結(jié)果甲基丁香酚、芝麻脂素、細(xì)辛脂素峰面積RSD依次分別為1.16%、0.59%、0.3%，均小于3%，表明此方法重復(fù)性良好。

2.8.5 加樣回收率試驗(yàn) 取細(xì)辛藥材（S9），共9份，每份1 g，加入混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜峰峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，甲基丁香酚、芝麻脂素、細(xì)辛脂素峰面積的平均回收率分別為100.18%、100.94%、101.81%，均符合《中國藥典》2015年版規(guī)定，RSD值分別為3.00%、2.21%、2.57%，結(jié)果表明方法準(zhǔn)確可靠。

2.8.6 樣品測定 取18批細(xì)辛藥材按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算各成分含量，結(jié)果見表4。通過結(jié)果可知不同產(chǎn)區(qū)之間含量差異較大，遼寧產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材中甲基丁香酚和細(xì)辛脂素的含量較高，吉林地區(qū)細(xì)辛藥材中芝麻脂素的含量較高。

3 討論

中藥藥性是中藥理論的核心，是根據(jù)中醫(yī)傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)，與療效有關(guān)的藥物的性質(zhì)或?qū)傩訹8]。其藥材質(zhì)量問題會(huì)直接影響制劑的療效和質(zhì)量?！侗静菥V目》也記載“性從地變，質(zhì)與物遷，未嘗同也。”藥材的形成受地理位置以及環(huán)境條件，例如溫度、濕度、光照、土壤等條件，繼而影響其藥物的有效物質(zhì)的變化。

表4 18批細(xì)辛樣品中3個(gè)成分含量測定結(jié)果

Table 4 Content determination results of three components from 18 batches of A. heterotropoides var. mandshuricum

編號(hào)質(zhì)量分?jǐn)?shù)/(mg·g?1) 甲基丁香酚芝麻脂素細(xì)辛脂素 S1 9.89 1.03 2.65 S232.98 2.82 6.63 S327.54 2.71 6.66 S422.86 2.58 6.91 S5 8.17 1.92 3.87 S6 8.41 1.69 3.85 S7 7.45 1.36 2.63 S8 7.58 1.73 4.00 S9 3.70 3.92 2.74 S10 1.94 2.04 1.61 S11 7.18 5.90 4.64 S12 6.92 6.05 4.45 S13 6.71 6.01 4.87 S14 3.55 2.96 3.00 S15 3.17 3.25 4.32 S16 3.22 2.52 3.33 S17 2.46 2.29 2.93 S18 1.76 1.29 1.59

本實(shí)驗(yàn)對(duì)色譜條件進(jìn)行了系統(tǒng)考察，包括不同流動(dòng)相系統(tǒng)（乙腈-0.05%磷酸水溶液、甲醇-0.05%磷酸和乙腈-水）、不同柱溫（25、30、35 ℃），不同體積流量（0.8、1.0和1.2 mL/min）、不同進(jìn)樣量（5、10、15 μL）的考察，最終確定了北細(xì)辛分析的最佳色譜條件，通過線性關(guān)系考察、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性以及加樣回收率等一系列的方法學(xué)考察，可驗(yàn)證該方法可行。

本研究通過收集18批不同產(chǎn)區(qū)的細(xì)辛藥材進(jìn)行HPLC指紋圖譜研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)18批藥材相似度良好，其中共確定了17個(gè)共有峰，并指認(rèn)了3個(gè)色譜峰，分別為甲基丁香酚（12號(hào)峰）、芝麻脂素（13號(hào)峰）、細(xì)辛脂素（15號(hào)峰）。從圖1指紋圖譜中可以看出遼寧產(chǎn)區(qū)的12號(hào)色譜峰（甲基丁香酚）峰面積大于吉林產(chǎn)區(qū)，而吉林產(chǎn)區(qū)的13號(hào)色譜峰（芝麻脂素）峰面積明顯大于遼寧產(chǎn)區(qū)。

通過含量測定的結(jié)果可知不同產(chǎn)區(qū)之間含量差異較大，遼寧產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材中甲基丁香酚和細(xì)辛脂素的含量較高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為7.45～32.98、2.63～6.91 mg/g，其中遼寧新賓產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材中的甲基丁香酚和細(xì)辛脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，平均含量分別為23.32 mg/g、5.71 mg/g；吉林地區(qū)細(xì)辛藥材中芝麻脂素的含量較高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.29～6.05 mg/g，其中吉林通化產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材中芝麻脂素含量最高，平均含量為4.78 mg/g。

通過運(yùn)用CA和PCA對(duì)其進(jìn)行綜合的質(zhì)量評(píng)價(jià)，結(jié)果表明CA能將18批藥材清晰地分為2類，即遼寧產(chǎn)地和吉林產(chǎn)地，在分類距離為8時(shí)，可以將遼寧產(chǎn)地細(xì)分為2類，即S1～S4為遼寧新賓產(chǎn)區(qū)和S5～S8為遼寧鞍山產(chǎn)區(qū)藥材，但不能將吉林產(chǎn)地的藥材清晰地分離出來，可能原因是吉林靖宇和吉林通化2個(gè)產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材的化學(xué)成分很相似，因此造成這2類數(shù)據(jù)差異性小，所以不容分開。PCA是一個(gè)無監(jiān)督的學(xué)習(xí)方法，其依靠樣品間的相似性進(jìn)行分析[9]。通過PCA得分圖，可以看出以軸為標(biāo)準(zhǔn)，軸上下可分為2大類，即遼寧和吉林2大產(chǎn)區(qū)，結(jié)果與聚類分析相同，可將遼寧產(chǎn)區(qū)的藥材細(xì)分為遼寧新賓和遼寧鞍山產(chǎn)區(qū)，但S1藥材特殊，但考慮到S1藥材與S2～S4藥材屬于同一產(chǎn)地，可能由個(gè)體差異所引起。

通過OPLS-DA分析結(jié)果顯示，遼寧產(chǎn)區(qū)和吉林產(chǎn)區(qū)分布距離較遠(yuǎn)，說明遼寧產(chǎn)區(qū)和吉林產(chǎn)區(qū)樣品差異較大，并分析出了影響遼寧產(chǎn)區(qū)和吉林產(chǎn)區(qū)細(xì)辛藥材差異的8種主要成分。

綜上所述，CA、PCA、OPLS-DA是中藥指紋圖譜結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別手段應(yīng)用最普遍的分析方法，清晰地表明了不同產(chǎn)地細(xì)辛藥材的差異。本研究通過細(xì)辛的指紋圖譜與含量測定相結(jié)合的方法，全面反映了細(xì)辛樣品的整體質(zhì)量信息，并進(jìn)一步運(yùn)用化學(xué)模式識(shí)別方法對(duì)其信息作進(jìn)一步綜合分析，實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)辛的全面綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)，為多指標(biāo)的復(fù)雜指紋圖譜與含量測定相結(jié)合的方法評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地藥材質(zhì)量提供有效的參考，也為今后其他道地藥材產(chǎn)地質(zhì)量評(píng)價(jià)提供新思路。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quality assessment ofvar.based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint

LI Yan, HE Wen-yuan, WANG Kang-yu, BAI Yu-xin, GAO Wen-yi, GONG Ji-yu

College of Pharmacy, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China

To analyze the quality ofvar.from different areas by multiple chemical pattern recognition based on HPLC fingerprint and multi-component content, so as to provide a reference for the quality evaluation ofvar..A total of 18 batches ofvar.samples from four producing areas were collected, HPLC fingerprints were collected and the content of three active ingredients was determined. The quality ofvar.in different areas was explored through CA, PCA and OPLS-DA methods.The fingerprint ofvar.was established, and three common peaks were identified. The mass fractions of methyl eugenol, sesamin and asarinin were 1.76—32.98, 1.03—6.05 and 1.59—6.91 mg/g, respectively. CA method could group the four origins ofvar.medicinal materials into two categories. PCA results extracted two principal components. The medicinal materials of the two major producing areas were clearly distinguished by OPLS-DA.The multi-pattern recognition method based on the establishment of the HPLC fingerprint and the determination of the content comprehensively evaluates the quality ofvar.. It provides a basis for the quality evaluation of medicinal materials and can be used as an effective method for quality control ofvar..

Fr. Schmidt var.(Maxim.) Kitag.; HPLC; fingerprint; chemical pattern recognition; quality assessment; methyl eugenol; sesamin; asarinin

R286.2

A

0253 - 2670(2022)01 - 0238 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.01.027

2021-06-06

國家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目（ZYBZH-Y-JL-25）；古代經(jīng)典名方顆粒劑的開發(fā)研究（SW-KF105）；吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（20170204028YY）

李 妍（1997—），女，碩士研究生，從事中藥分析學(xué)研究。E-mail: liyan1234512345@163.com

高文義，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥分析學(xué)研究。E-mail: 565882264@qq.com

貢濟(jì)宇，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥分析學(xué)研究。E-mail: gjy0431@126.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]