基于微透析技術(shù)的丹參酮IIA微針皮膚局部藥動學(xué)研究

林宇建，賴建輝，韓 兵，時 軍, 4*，麥鈺儀

基于微透析技術(shù)的丹參酮IIA微針皮膚局部藥動學(xué)研究

林宇建1，賴建輝2，韓 兵3，時 軍1, 4*，麥鈺儀1

1. 廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006 2. 云浮市中醫(yī)藥局，廣東 云浮 527300 3. 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形外科醫(yī)院 整形九科，北京 100144 4. 廣東省局部精準(zhǔn)遞藥制劑工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510006

建立丹參酮IIA（tanshinone IIA，TSA）微透析取樣方法，探究TSA微針皮膚藥動學(xué)特征。建立TSA分析方法，確定內(nèi)標(biāo)物吉非羅齊（gemfibrozil，GEM）分析方法的可行性。采用增量法和減量法，考察TSA回收率、GEM釋放率以及值穩(wěn)定性，建立體外微透析取樣系統(tǒng)。兔耳經(jīng)皮給予丹參酮IIA微針，GEM作為微透析采樣的內(nèi)標(biāo)物，測定TSA皮膚藥物濃度，采用DSA 2.0軟件對藥動學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，繪制藥物濃度-時間曲線。藥物回收率與灌流體積流量呈反比，與溫度呈正比，不受探針外液濃度的影響，值可保持良好穩(wěn)定性。GEM對TSA無干擾，值在體校正后均值為（60.04±1.90）%。在TSA微針的藥動學(xué)參數(shù)和藥時曲線中，TSA微針組的藥物濃度明顯高于TSA藥液組，且曲線平緩，藥物平均滯留時間（MRT0→12）為（5.1±1.3）h。TSA微針給藥后，皮膚組織中濃度較為穩(wěn)定，有明顯的緩釋效果。

丹參酮IIA；可溶性微針；微透析；皮膚；藥動學(xué)

丹參為活血祛瘀、涼血消癰的常用中藥，臨床上常用于治療胸痹心痛、癥瘕積聚、瘡瘍腫痛等，在抗炎、抗纖維化等方面有顯著的藥理作用[1]。丹參酮IIA（tanshinone IIA，TSA）是丹參主要的脂溶性有效成分，具有抗急性缺氧、抗心律失常、抗動脈粥樣硬化、抗炎、抗纖維化等作用，對肺、腎、皮膚纖維化具有明顯的抑制作用[2-4]。目前國內(nèi)外尚未在臨床中使用TSA制劑防治增生性瘢痕，故研究TSA的透皮制劑可為增生性瘢痕的臨床用藥提供新的思路。

傳統(tǒng)外用制劑由于皮膚角質(zhì)層的屏障作用，通常會阻礙藥物的經(jīng)皮傳遞[5]。而微針能夠突破角質(zhì)層屏障，使藥物快速、有效地發(fā)揮作用。微針還具有能夠遞送大分子藥物和讓藥物在靶部位蓄積的特點(diǎn)，方便使用，微創(chuàng)無痛，提高了患者依從性，為傳統(tǒng)藥物劑型改進(jìn)提供了全新的解決辦法[6-7]。將TSA制備成微針，可結(jié)合TSA抗纖維化的作用以及微針良好的釋藥性能，突破外用涂抹給藥的局限性，使藥物能直達(dá)瘢痕病灶部位，提高生物利用度。本研究利用微透析技術(shù)（micro-dialysis，MD）考察透皮制劑對TSA微針在皮膚的代謝情況及在體藥動學(xué)研究，估算相應(yīng)的藥動學(xué)參數(shù)，為TSA皮膚給藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 動物

SPF級新西蘭兔10只，雌雄各半，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，購自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，動物許可證號SCXK（粵）2019-0015。動物飼養(yǎng)于SPF級動物房，動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)廣東藥科大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號gdpulac2020184）。

1.2 藥品與試劑

對照品TSA（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，批號Y27M19C37812）、吉非羅齊（gemfibrozil，GEM，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%，批號Y07N7C24310）購自上海源葉生物科技有限公司；PVP K30（批號12162-100G）、PVP K90購自美國Fluka公司；硫酸軟骨素（chondroitinsulfate，CS，批號MB2743）購自大連美侖生物技術(shù)有限公司

1.3 儀器

Dionex UltiMate 3000高效液相色譜儀（HPLC，美國Thermo Fisher Scientific公司）；TS-2000A型搖床（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；MD1001型灌注器推進(jìn)泵、MD0100型灌注器、MD1002型灌注器架、MD1000型流速控制器、MD1020型線性探針（美國BAS公司）；SC-04型低速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）；KQ-300DE型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；BSA124S型萬分之一天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；TP-6型透皮擴(kuò)散儀（天津市精拓儀器科技有限公司）；聚四氟乙烯微孔陣列模具（廣州萊客模具）。

2 方法與結(jié)果

2.1 TSA微針的制備[8]

2.1.1 TSA固體分散體（TSA-PVP）的制備 按1∶8精密稱取TSA和PVP K30，混合后用足量的無水乙醇溶解，旋蒸回收乙醇至黏稠狀，取出干燥，粉碎過120目篩，得TSA-PVP，備用。

2.1.2 基質(zhì)溶液的配制 按1∶1精密稱取PVP K30和CS，混合，加入純水溶解，得到基質(zhì)溶液，備用。

2.1.3 TSA藥液的配制 稱取適量TSA-PVP，溶于基質(zhì)溶液，即得。

2.1.4 背襯層溶液的配制 稱取PVP K90適量，加3倍量水溶解，即得。

2.1.5 TSA微針的制備 將TSA藥液澆注于模具上，1500 r/min離心10 min；再將模具旋轉(zhuǎn)180°，1500 r/min離心10 min，重復(fù)2次；取出模具，去掉多余藥液，待干燥后，在模具上加入背襯層溶液，1500 r/min離心10 min；取出模具于避光干燥器中，干燥后即得TSA微針。

2.2 TSA和GEM的測定

2.2.1 色譜條件 Cosmosil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.5%甲酸溶液（86∶14）；體積流量為0.8 mL/min；檢測波長為270 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取TSA對照品，以甲醇為溶劑定容，得到質(zhì)量濃度為770 μg/mL的TSA儲備液；取GEM對照品，以無水乙醇-PEG400-0.9%氯化鈉溶液（2∶1∶2）灌流液為溶劑定容，得到質(zhì)量濃度為840 μg/mL的GEM儲備液。

2.2.3 混合對照品儲備液的制備 取TSA儲備液和GEM儲備液適量，混合，以無水乙醇-PEG400-0.9%氯化鈉溶液（2∶1∶2）灌流液定容，得到TSA、GEM質(zhì)量濃度分別為92.4、336.0 μg/mL的混合對照品儲備液。

2.2.4 線性方程的繪制 取混合對照品儲備液及GEM儲備液，按一定濃度梯度稀釋并進(jìn)行測定，以峰面積（）對進(jìn)樣的質(zhì)量濃度（）進(jìn)行線性回歸，分別繪制TSA和GEM標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到TSA回歸方程為：＝1.308 9－0.100 1，2=0.999 9，質(zhì)量濃度為0.92～92.40 μg/mL時線性關(guān)系良好；得到GEM回歸方程為：＝0.086－0.032 7，2＝0.999 9，質(zhì)量濃度為3.36～336.00 μg/mL時線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 配制3份不同質(zhì)量濃度的混合儲備液，同一份樣品連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。經(jīng)計(jì)算，GEM質(zhì)量濃度RSD分別為0.21%、0.64%、0.48%；TSA質(zhì)量濃度RSD分別為0.89%、0.45%、0.26%，均小于2%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取混合儲備液分別于2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣檢測，記錄峰面積。經(jīng)計(jì)算，GEM質(zhì)量濃度RSD為0.75%，TSA質(zhì)量濃度RSD為0.57%，均小于2%，表明TSA和GEM在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 專屬性試驗(yàn) 分別取TSA儲備液、GEM儲備液、混合儲備液以及空白溶劑（灌流溶液）適量，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，進(jìn)樣檢測。如圖1所示，GEM和TSA峰形良好，無干擾峰，表明方法可行且專屬性強(qiáng)。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批樣品6份，進(jìn)樣檢測，記錄峰面積，TSA、GEM的RSD分別為1.27%、1.36%，均小于2%，表明該方法的重復(fù)性良好。

A-空白灌流液 B-GEM儲備液 C-TSA儲備液 D-混合對照品儲備液

2.3 微透析灌流液的篩選[9]

取過量的TSA分別加入適量不同灌流液[10]，測定TSA和GEM在不同溶液中的溶解度。結(jié)果見表1，TSA在S1中溶解度極低，無法檢測，而在S5溶液中溶解度最大。

表1 TSA和GEM在不同灌流液介質(zhì)中的溶解度

Table 1 Solubility of TSA and GEM in different perfusion solution

灌流液編號無水乙醇-PEG400-0.9%氯化鈉溶液比例TSA溶解度/(μg·mL?1)GEM溶解度/(μg·mL?1) S11∶2∶7—187.321 S21∶1∶32.179917.608 S33∶2∶540.3973 508.430 S42∶1∶296.6667 153.965 S55∶2∶3 169.4767 806.724

根據(jù)溶解度實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用增量法考察S3、S4和S5這3種灌流溶液中的藥物回收率，確定合適的微透析灌流液。按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件測定樣品，按公式（1）計(jì)算TSA回收率（R,T），按公式（2）計(jì)算GEM回收率（R,G）。

R,T＝d,T/ecf,T（1）

R,G＝d,G/ecf,G（2）

d,T、d,G分別為透析液中TSA和GEM的質(zhì)量濃度；ecf,T、ecf,G分別為探針外液中TSA和GEM的質(zhì)量濃度

如表2所示，以S5作為灌流液時，TSA的回收率最高；而在3種灌流液中，GEM的回收率無明顯區(qū)別。

2.4 回收率、釋放率及P值影響因素考察

2.4.1 灌流體積流量對回收率、釋放率及值的影響 將微透析探針半透膜完全浸泡于含TSA的S4溶液中，灌流液為含GEM（8.383 μg/mL）的S4溶液，控制透皮擴(kuò)散儀溫度37 ℃，轉(zhuǎn)速為350 r/min；分別以0.5、0.8、1.5 μL/min體積流量灌流，平衡60 min后開始收集透析液，每份20 μL，各體積流量收集5份。通過HPLC測定樣品，按公式（1）計(jì)算R,T，按公式（3）計(jì)算GEM釋放率（D,G），按公式（4）計(jì)算R,T與D,G比值（）。

表2 TSA和GEM在不同灌流液中的回收率

Table 2 Recoveries of TSA and GEM in different perfusates

灌流液GEM回收率/%TSA回收率/% S325.45±0.2931.63±0.60 S425.64±0.2940.76±0.68 S527.78±0.3541.20±0.76

D,G＝(p,G－d,G)/p,G（3）

＝D,G/R,T（4）

d,G為透析液中GEM的質(zhì)量濃度，p,G為灌流液中GEM的質(zhì)量濃度，R,T為TSA回收率，D,G為GEM釋放率

如表3所示，R,T與D,G隨體積流量的增大而降低，但R,T和D,G兩者變化幅度基本一致，在不同體積流量下，值為（50.65±0.56）%，表明值穩(wěn)定，不受灌流體積流量影響。

表3 灌流體積流量對回收率、釋放率及P值的影響

Table 3 Effects of different perfusion rates on recovery rate, delivery rate and P value

灌流體積流量/(μL·min?1)Cecf,T/(μg·mL?1)`RD,G`RR,T`P/%RSD/% 0.55.87537.0072.4550.65±0.561.11 0.85.81525.9651.42 1.55.85319.2438.16

2.4.2 溫度對回收率、釋放率及值的影響 將微透析探針半透膜完全浸泡于含TSA的S4溶液中，灌流液為含GEM（8.383 μg/mL）的S4溶液，轉(zhuǎn)速為350 r/min；灌流體積流量為0.8 μL/min，分別于25、32、37 ℃收集3組透析液，平衡60 min后開始收集透析液，每份20 μL，各體積流量收集5份。通過HPLC進(jìn)樣測定，計(jì)算R,T、D,G和值。

如表4所示，R,T與D,G隨微透析環(huán)境溫度的增大而提高，在25～37 ℃溫度，值為（50.89±0.56）%，表明值穩(wěn)定，不受溫度影響。

表4 溫度對回收率、釋放率及P值的影響

Table 4 Effects of different temperatures on recovery rate, delivery rate and P value

T/℃Cecf,T/(μg·mL?1)`RD,G`RR,T`P/%RSD/% 255.86518.4336.2450.89±0.561.85 325.85421.9842.93 375.81526.0151.38

2.4.3 質(zhì)量濃度對回收率、釋放率及值的影響 以S4為溶劑，配制低、中、高3種不同質(zhì)量濃度（2.740、5.719、28.827 μg/mL）的TSA溶液作為探針外液，灌流液為含GEM（8.109 μg/mL）的S4溶液。微透析探針半透膜分別浸泡于3種探針外液中，控制透皮擴(kuò)散儀實(shí)驗(yàn)溫度為（37.0±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為350 r/min；灌流體積流量0.8 μL/min，平衡60 min后開始收集透析液，各濃度收集5份樣品，每份20 μL，計(jì)算R,T、D,G和值。

如表5所示，藥物質(zhì)量濃度對R,T與D,G無顯著影響，值穩(wěn)定，值為（50.52±0.98）%。

表5 質(zhì)量濃度對回收率、釋放率及P值的影響

Table 5 Effects of different concentration on recovery rate, delivery rate and P value

Cecf,T/(μg·mL?1)`RD,G`RR,T`P/%RSD/% 2.74025.0949.5250.52±0.981.95 5.71925.5050.25 28.82725.8851.61

2.4.4 內(nèi)標(biāo)物GEM對TSA回收率、釋放率的影響以及MD取樣穩(wěn)定性考察

（1）增量法：將微透析探針半透膜完全浸泡于含TSA的S4溶液中，控制透皮擴(kuò)散儀溫度為（37.0±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為350 r/min，灌流體積流量為0.8 μL/min。先用空白S4做灌流液，平衡60 min后收集透析液5份，每份20 μL。收集完后，將灌流液更換為含GEM的S4溶液，重新平衡60 min后開始收集，每份收集量為20 μL，共收集透析樣品30份，收集時間12 h。通過HPLC進(jìn)樣測定，計(jì)算R,T、D,G和值。

如圖2所示，用空白灌流液灌流時，TSA平均回收率為（51.06±0.11）%，更換含GEM的灌流液后，R,T為（50.73±0.27）%，無顯著變化，表明GEM并不會對TSA回收產(chǎn)生干擾，TSA在12 h回收率穩(wěn)定；D,G為（26.25±0.46）%，表明GEM探針釋放率穩(wěn)定；值為（51.74±0.95）%，表明值穩(wěn)定。

（2）減量法：將微透析探針半透膜完全浸泡于空白S4溶液中，控制透皮擴(kuò)散儀溫度為（37.0±0.5）℃，磁力攪拌子轉(zhuǎn)速為350 r/min，灌流體積流量為0.8 μL/min。先用含TSA的S4做灌流液，平衡60 min后收集透析液5份，每份20 μL；收集完前5份透析液后，將灌流液更換為含TSA和GEM的S4溶液，其余同增量法。通過HPLC進(jìn)樣測定，按公式（5）計(jì)算D,T，按公式（3）計(jì)算D,G，按公式（6）計(jì)算D,G與D,T比值（）。

D,T＝(p,T－d,T)/p,T（5）

＝D,G/D,T（6）

p,T為灌流液中TSA的質(zhì)量濃度，d,T為透析液中TSA的質(zhì)量濃度，D,T為TSA釋放率，D,G為GEM釋放率

如圖3所示，用TSA灌流液時，D,T為（48.84±0.46）%，更換含TSA和GEM的混合灌流液后，D,T為（48.08±0.62）%，無顯著變化，表明GEM并不會對TSA釋放產(chǎn)生干擾，TSA在12 h釋放率穩(wěn)定；D,G為（25.26±0.45）%，表明GEM探針釋放率穩(wěn)定；值為（52.55±0.99）%，表明值穩(wěn)定。

2.5 在體TSA和GEM的測定

2.5.1 色譜條件 Cosmosil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A）-0.5%甲酸水溶液（B），梯度洗脫：0～3 min，30% B；3～13 min，20% B；體積流量為0.8 mL/min；檢測波長為270 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。

2.5.2 專屬性試驗(yàn) 將TSA儲備液、GEM儲備液、混合儲備液以及空白溶劑（S4溶液）進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，GEM和TSA峰形良好，無雜峰干擾，分離度和對稱因子均符合要求。

2.5.3 線性關(guān)系考察 分別取TSA儲備液和GEM儲備液，按一定濃度梯度用S4稀釋，以峰面積（）對進(jìn)樣的濃度（）進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。TSA回歸方程為：＝1.004 5－0.007 9，2＝0.999 6，表明質(zhì)量濃度為18.12～362.40 ng/mL時線性關(guān)系良好；GEM回歸方程為：＝0.064 7－0.008 5，2＝0.999 9，表明質(zhì)量濃度為1.768～17.680 μg/mL時線性關(guān)系良好。

2.5.4 精密度試驗(yàn) 取TSA儲備液和GEM儲備液，配制低、中、高3個質(zhì)量濃度混合對照品溶液，同一份樣品連續(xù)進(jìn)樣6次，得到GEM質(zhì)量濃度RSD分別為1.18%、0.69%、1.36%；TSA質(zhì)量濃度RSD分別為0.37%、0.53%、0.35%，均小于2%，表明儀器精密度良好，檢測方法精密度良好。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述混合對照品溶液分別于2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣檢測，記錄峰面積。得到GEM、TSA的RSD分別為0.69%、0.38%，均小于2%，表明TSA和GEM在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批樣品6份，進(jìn)樣檢測，記錄峰面積，TSA、GEM的RSD分別為1.14%、1.25%，均小于2%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.6 P值的在體校正

將線性探針植入兔子耳腹，以0.8 μL/min體積流量灌流0.9%氯化鈉溶液1 h，使植入部位皮膚組織損傷消退，機(jī)能恢復(fù)。然后更換S4溶液灌流1 h，收集1份空白透析液。更換含TSA和GEM的混合S4溶液灌流，平衡1 h后收集樣品，每20分鐘收集1份，共收集12 h。另取2組實(shí)驗(yàn)白兔，重復(fù)上述操作。

通過HPLC測定d,T、d,G、p,G、p,T。計(jì)算D,T、D,G和值。如圖4所示，值為（60.04±1.90）%，RSD為3.16%，符合生物樣品分析誤差范圍，值穩(wěn)定性良好。

2.7 給藥及微透析取樣

2.7.1 藥液組藥動學(xué)考察 配制TSA藥液（632.44 μg/g），其中包合2%丙酮和10%丙二醇作為促滲劑。植入線性探針后，以0.8 μL/min體積流量灌流0.9%氯化鈉溶液1 h，使植入部位皮膚組織機(jī)能恢復(fù)。然后更換GEM的S4溶液灌流，平衡1 h后，在正對著微透析探針透析膜的皮膚上粘上1個給藥池，在池內(nèi)涂抹藥物（約1 g）。隨后開始收集樣品，記為0時。此后每20分鐘收集1份樣品，共收集12 h。通過HPLC測定透析樣品、灌流液中藥物質(zhì)量濃度（d,T、d,G、p,G），實(shí)驗(yàn)平行3次。

圖4 TSA和GEM在體微透析取樣情況(n = 3)

2.7.2 微針組藥動學(xué)考察 實(shí)驗(yàn)兔子除去耳腹毛發(fā)并麻醉，取TSA微針[載藥量為（619.40±12.38）μg/片]按壓兔耳耳腹處給藥，垂直于皮膚按壓，按壓時間15 min后取下微針。然后立刻使用18 G穿刺針在給藥處皮下穿刺，引導(dǎo)線性微透析探針平行植入，后抽回引導(dǎo)針，使探針半透膜管部位留在微針給藥組織皮下。其余操作同均與“2.7.1”項(xiàng)下方法一致，實(shí)驗(yàn)平行3次，取樣流程見圖5。

圖5 微透析取樣示意圖

2.8 藥動學(xué)數(shù)據(jù)處理

按公式（3）計(jì)算每個取樣點(diǎn)D,G，基于在體值的校正結(jié)果為60.04%，結(jié)合公式（1）、（4）計(jì)算組織中理論TSA游離藥物質(zhì)量濃度（TSA）。采用DSA2.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，使用非房室模型對皮膚組織中TSA與時間（）數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合。主要藥動學(xué)參數(shù)見表6，藥物濃度-時間曲線見圖6。給藥后，TSA微針組組織藥物濃度明顯高于TSA藥液組；與TSA藥液組相比，微針組的藥時濃度曲線相對平緩，表明TSA微針釋藥速率平穩(wěn)；微針組平均滯留時間（MRT）明顯比藥液組延長，給藥12 h仍能在組織中檢測到游離藥物，表明TSA微針?biāo)幬锬茉谄つw中有一定濃度蓄積，形成儲庫效應(yīng)，可持續(xù)作用于病灶部位真皮層發(fā)揮藥效。

表6 藥動學(xué)參數(shù)

Table 6 Pharmacokinetic parameters

參數(shù)單位TSA藥液組TSA微針組 Tmaxh1.556±0.1932.111±0.962 Cmaxng·mL?185.533±11.541112.776±15.822 MRT0→12h3.285±0.0904.854±0.048 MRT0→∞h5.198±0.3617.527±0.494 AUC0→12ng·mL?1·h347.399±37.005842.377±44.045 AUC0→∞ng·mL?1·h425.562±44.0091 043.856±44.966 VdmL?1·h0.758±0.0270.114±0.021 CLmL?1·h0.027±00.016±0

圖6 TSA藥物濃度-時間曲線

3 討論

施用于皮膚的藥物在血液中的濃度往往很低，血藥濃度并不能準(zhǔn)確反映皮膚組織中真實(shí)的藥物代謝特征[11-12]。經(jīng)皮微透析直接對靶部位皮膚組織液進(jìn)行采樣分析，得到的藥動學(xué)參數(shù)可更真實(shí)地反映藥物透皮性能及其在皮膚的代謝情況，而且微透析取樣能更好地維持實(shí)驗(yàn)動物生理功能，具有實(shí)時、連續(xù)、方便檢測等優(yōu)勢[13]。

研究發(fā)現(xiàn)，微透析對TSA這類脂溶性藥物取樣以及后續(xù)檢測的難度較大，與其水溶性差、蛋白結(jié)合率高等理化性質(zhì)有關(guān)[14]。目前改善脂溶性藥物回收的方法主要是優(yōu)化灌流介質(zhì)，使得更多脂溶性物質(zhì)溶解并進(jìn)入探針，以提高回收率[15]。在進(jìn)行微透析取樣前需要對TSA微透析灌流液進(jìn)行優(yōu)化篩選，選擇出溶解度較優(yōu)的灌流液組分，以便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)開展。結(jié)果表明，無水乙醇、PEG400和0.9%氯化鈉溶液三者的混合溶液對TSA和GEM的溶解性能良好，并隨著無水乙醇的含量越多溶解性越好。但考慮到無水乙醇可能會對皮膚組織產(chǎn)生刺激，在保證藥物回收率的前提下，理應(yīng)減少無水乙醇的用量，所以最終選擇無水乙醇-PEG400-0.9%氯化鈉溶液（2∶1∶2）作為灌流液，用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，探針回收率（釋放率）與灌流體積流量呈反比，但對微透析樣品進(jìn)行分析時，必須要滿足分析方法所需要的樣品量，體積流量越低，取樣間隔越長，便會帶來時滯，無法實(shí)時、準(zhǔn)確反映藥動變化規(guī)律；在相同取樣間隔內(nèi)，雖然較高體積流量能提供更多樣品體積，但同時藥物的濃度也會降低，對分析方法的靈敏度要求更高。結(jié)合多方面因素的考慮，最終選擇灌流體積流量為0.8 μL/min，取樣間隔20 min。

采用增量法和減量法分別考察體外實(shí)驗(yàn)中內(nèi)標(biāo)物與藥物的回收率、釋放率，共同驗(yàn)證了藥物回收率和釋放率的一致性，表明了內(nèi)標(biāo)物的穩(wěn)定性，為體內(nèi)回收率的計(jì)算提供了有力的基礎(chǔ)。內(nèi)標(biāo)物釋放率與待測藥物回收率比值在體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)中有較大差異，體外實(shí)驗(yàn)無法絕對模擬體內(nèi)過程，因此需要對值進(jìn)行體內(nèi)校正[16]。在體內(nèi)校正時在體內(nèi)微透析過程中，藥物釋放率會隨著實(shí)驗(yàn)時間的延長而呈下降趨勢或是出現(xiàn)波動。與反透析法等始終以不變的回收率進(jìn)行組織游離藥物濃度推算的方法相較，內(nèi)標(biāo)法的實(shí)時動態(tài)校正可克服實(shí)驗(yàn)動物生理因素及探針自身損耗的影響，更具有準(zhǔn)確性和可靠性[17-18]。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Research of transdermal pharmacokinetics of tanshinoneⅡAmicroneedles based on microdialysis technique

LIN Yu-jian1, LAI Jian-hui2, HAN Bing3, SHI Jun1, 4, MAI Yu-yi1

1. College of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China 2. Traditional Chinese Medicine Bureau of Yunfu, Yunfu 527300, China 3. The Ninth Department of Plastic Surgery, Plastic Surgery Hospital of Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100144, China 4. Guangdong Local Precision Drug Delivery Engineering and Technology Research Center, Guangzhou 510006, China

To establish the tanshinone ⅡA(TSA) microdialysis sampling method and explore the skin pharmacokinetic characteristics of TSA microneedles.A TSA analysis method was established to determine the feasibility of internal standard gemfibrozil (GEM) analysis method. The incremental method and decrement method were used to investigate TSA recovery rate, GEM release rate and stability ofvalue, and anmicrodialysis sampling system was established. TSA microneedle was administered transdermally to rabbit ears, GEM was used as internal standard for microdialysis sampling to determine the TSA skin drug concentration. DSA 2.0 software was used to process the pharmacokinetic data and draw the drug concentration-time curve.The recovery rate of drug was inversely proportional to perfusion speed, and was positively proportional to temperature without being affected by the concentration of outer liquid of probe, andvalue could maintain a good stability. GEM had no interference to TSA, and the averagevalue after body correction was (60.04 ± 1.90) %. In pharmacokinetic parameters and drug-time curve of TSA microneedle, the drug concentration of TSA microneedle group was significantly higher than that of TSA liquid group, and the curve was flat. The average drug retention time (MRT0→12) was (5.1 ± 1.3) h.After TSA microneedles is administered, the concentration in skin tissue is relatively stable and has obvious sustained-release effect.

tanshinone ⅡA; soluble microneedles; micro dialysis; skin; pharmacokinetics

R285.61

A

0253 - 2670(2022)01 - 0126 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.01.016

2021-09-18

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（82173982）；廣東省高等學(xué)校優(yōu)秀青年教師培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目（YQ2015099）

林宇建（1996—），男，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幹苿┭芯颗c開發(fā)。Tel: 13539730978 E-mail: 1049445880@qq.com

時 軍（1980—），男，博士，副教授，主要從事中藥經(jīng)皮給藥技術(shù)研究與增生性瘢痕防治研究。E-mail: shijun8008@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]