早期胃癌和癌前病變病人血清胃泌素-17的表達(dá)及其與微血管密度和臨床病理特征的關(guān)系

荊文斌 高辛 劉紅軍

胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，近年來我國胃癌發(fā)病率逐年升高，很多病人初次確診時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，失去最佳治療時(shí)機(jī)[1]。胃癌的發(fā)生是由正常黏膜-慢性炎癥-萎縮-腸化生-異型增生-癌變的逐漸進(jìn)展的過程，因此尋找到一種可監(jiān)測胃癌進(jìn)展的生物標(biāo)志物，及時(shí)干預(yù)成為胃癌防治迫在眉睫的問題。胃泌素-17(gastrin-17，G-17)是反應(yīng)胃黏膜病變狀態(tài)的敏感指標(biāo)，多項(xiàng)研究表明，G-17在早期胃癌和癌前病變病人血清中差異表達(dá)，可用于診斷早期胃癌[2]。腫瘤血管形成是腫瘤細(xì)胞存活及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的基本條件，與腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，腫瘤微血管密度(microvascular density，MVD)被當(dāng)作判斷腫瘤侵襲性和轉(zhuǎn)移潛能的指標(biāo)[3]。本研究觀察了早期胃癌、癌前病變及正常胃黏膜組織病人血清G-17的表達(dá)，組織MVD值。

對象與方法

一、對象

2019年5月～2020年5月我院接受胃鏡檢查的胃部不適病人187例。年齡37～71歲，平均年齡(56.8±10.6)歲，男117例，女70例。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)術(shù)后或胃鏡下切除的胃組織病理診斷；(2)檢查前均未接受放化療等治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠、哺乳婦女；嚴(yán)重心腦肝腎等疾?。缓喜⑵渌麗盒阅[瘤；免疫系統(tǒng)疾?。唤诮邮苊庖咭种苿?、質(zhì)子泵抑制劑治療；中晚期胃癌。根據(jù)病理結(jié)果，將研究對象分為對健康照組(43例)、萎縮性胃炎組(28例)、中低級別上皮內(nèi)瘤變(LGIN)組(25例)、高級別上皮內(nèi)瘤變(HGIN)組(21例)和早期胃癌組(70例)。所有標(biāo)本均在胃鏡下或手術(shù)取材獲得，病人知情同意并簽訂知情同意書，醫(yī)院倫理道德委員會備案。各組病人一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組一般資料比較

二、方法

1.組織中CD34表達(dá)的檢測：采用免疫組織化學(xué)法。制備4 μm厚連續(xù)切片，脫蠟并修復(fù)抗原，采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法檢測CD34的表達(dá)，加入鼠抗人CD34單克隆抗體(1∶100)，4 ℃冰箱過夜，PBS洗滌后加入二抗，PBS洗滌，DAB顯色，水洗，蘇木素復(fù)染，脫水，二甲苯透明，封片。免疫組化染色采用Envision二步法。

2.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定：CD34陽性呈棕褐色，定位于細(xì)胞漿，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，記錄陽性細(xì)胞比例：無表達(dá)定義為0分；<10%定義為1分；10%～49%定義為2分；50%～89%定義為3分；≥90%定義為4分。染色強(qiáng)度：0分為無著色，1分為淡黃色，2分棕黃色，3分為棕褐色或黑色。以兩項(xiàng)乘積為最終評分，<2分定義為陽性表達(dá)，≥2分定義為陰性表達(dá)。MVD判斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：CD34陽性細(xì)胞代表血管內(nèi)皮細(xì)胞，陽性內(nèi)皮細(xì)胞形成的管腔定義為獨(dú)立的一個(gè)微血管，高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算單位面積中的微血管數(shù)，取平均值即為MVD值。計(jì)算所有早期胃癌樣本MVD值的中位數(shù)，大于中位數(shù)定義為高M(jìn)VD，小于中位數(shù)定義為低MVD。

3.血清G-17檢測：治療前空腹?fàn)顟B(tài)下采肘靜脈血2 ml置于肝素抗凝管中，3 000 r/min離心20分鐘，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定G-17水平。

三、 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果

1.各組病人血清G-17水平、組織MVD比較：對照組、萎縮性胃炎組、LGIN組、HGIN組和早期胃癌組病人血清血清G-17水平、組織MVD逐漸升高，早期胃癌組病人血清G-17水平、組織MVD高于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2、圖1。

表2 各組血清G-17水平、組織MVD比較

A對照組；B萎縮性胃炎組；C中低級別上皮內(nèi)瘤變組；D高級別上皮內(nèi)瘤變組；E早期胃癌組圖1 各組組織中CD34的表達(dá)水平(免疫組化染色×400)

2.血清G-17水平、組織MVD對早期胃癌的診斷價(jià)值:早期胃癌組作為陽性組，對照組和萎縮性胃炎組作為陰性組，繪制血清G-17水平、組織MVD的ROC曲線。血清G-17水平、組織MVD和兩者聯(lián)合檢測的AUC分別為0.616、0.636、0.650，可知血清G-17水平、組織MVD對早期胃癌的診斷價(jià)值良好，最佳臨界值分別為19.3 pmol/L、29.7。見圖2。

圖2 血清G-17水平、組織MVD對早期胃癌診斷的ROC曲線圖3 早期胃癌病人血清G-17水平與組織MVD相關(guān)性分析

3.血清G-17水平、組織MVD與早期胃癌病人臨床病理特征的關(guān)系:早期胃癌病人血清G-17水平、組織MVD與腫瘤直徑、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、性別、解剖部位和浸潤范圍無關(guān)。見表3。

表3 血清G-17水平、MVD與早期胃癌病人臨床病理特征的關(guān)系

4.早期胃癌病人血清G-17水平與組織MVD相關(guān)性:早期胃癌病人血清G-17水平與組織MVD值呈正相關(guān)(r=0.791，P=0.000)。見圖3。

討論

癌基因、抑癌基因的差異表達(dá)是影響胃黏膜惡變的重要因素[5]。本研究選擇健康人群、萎縮性胃炎、上皮內(nèi)瘤變及早期胃癌病人進(jìn)行研究，希望為胃癌的癌變監(jiān)測和干預(yù)提供了新的靶點(diǎn)。

G-17是由胃G細(xì)胞分泌的多肽激素，與膽囊收縮素受體結(jié)合后促進(jìn)胃酸的合成，從而保護(hù)胃腸黏膜及促進(jìn)食物的分解[6]。血清G-17水平可在一定程度上反應(yīng)胃黏膜病變的狀況，可作為胃癌和癌前疾病的篩查指標(biāo)[7]。張琳等[8]研究發(fā)現(xiàn)，早期胃癌病人血清G-17水平高于健康人群，且隨著腸化生、惡變程度的加劇，G-17水平逐漸升高。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從健康人群、萎縮性胃炎、低級別上皮內(nèi)瘤變、高級別上皮內(nèi)瘤變、早期胃癌的發(fā)展過程中，G-17水平呈上升趨勢，早期胃癌與健康人群、癌前病變、萎縮性胃炎的G-17水平兩兩之間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]。檢測G-17對臨床診斷和篩查早期胃癌及癌前病變有重要作用。本研究結(jié)果顯示，腫瘤直徑≥2 cm的早期胃癌病人血清G-17水平高于腫瘤直徑<2 cm病人，表明G-17水平與腫瘤負(fù)荷有關(guān)。中低分化程度、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期胃癌病人血清G-17水平高于高分化程度及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人，表明G-17水平與早期胃癌的嚴(yán)重程度有關(guān)。

MVD的計(jì)算需要利用免疫組化方法對內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行染色，然后計(jì)算單位面積微血管數(shù)量。CD34是目前標(biāo)志血管內(nèi)皮細(xì)胞常用的標(biāo)志物，在正常組織及腫瘤組織中穩(wěn)定表達(dá)，對微小血管及不完整血管標(biāo)記靈敏度、特異度。本實(shí)驗(yàn)采用CD34對微血管進(jìn)行標(biāo)記計(jì)數(shù)。目前，有關(guān)MVD在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的變化及其與早期胃癌病人G-17水平相關(guān)性的研究報(bào)道較少[10]。本研究結(jié)果顯示，從健康人群、萎縮性胃炎、低級別上皮內(nèi)瘤變、高級別上皮內(nèi)瘤變、早期胃癌的發(fā)展過程中，MVD逐漸上升，兩兩之間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，腫瘤直徑<2 cm、中低分化程度、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期胃癌組織MVD值更高，提示血管浸潤在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起促進(jìn)作用。

Tang等[11研究發(fā)現(xiàn)，G-17可通過HIF-1α/β-catenin/VEGF通路促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展。這些結(jié)果提示G-17可通過促進(jìn)血管的生存進(jìn)而促進(jìn)胃癌的進(jìn)展，本研究結(jié)果顯示，早期胃癌血清G-17水平與組織MVD呈正相關(guān)，提示兩者可能在早期胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到了相互協(xié)調(diào)的作用。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了G-17、MVD在胃癌發(fā)生發(fā)展及惡變過程中的作用，該分子差異性表達(dá)推測可能是胃癌早期的潛在靶點(diǎn)，但本研究入選病例較少，G-17、MVD在胃癌中的作用機(jī)制及其與胃癌預(yù)后的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。