正交試驗優(yōu)選金銀利咽顆粒提取工藝

受國徽 蘇會源逯珍花 程曉雪

1.天水市中西醫(yī)結合醫(yī)院，甘肅 天水741020；2.臨夏回族自治州人民醫(yī)院，甘肅 臨夏731100

金銀利咽顆粒是我院醫(yī)院制劑。由金銀花、牛蒡子、玄參、桔梗等七味中藥組成，主要用于治療咳嗽、咳白色黏痰、量少不易咳出、咽部不適或咽痛。在研制過程中，對水提工藝采用正交優(yōu)化試驗設計，以牛蒡苷含有量和干浸膏得率為考察評價指標，篩選最佳工藝［1-3］，為本制劑的提取工藝提供基礎可靠的試驗數(shù)據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 Aglient 1260高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；電子天平（上海民橋精密儀器有限公司）；十萬分之一天平（奧豪斯公司）；超聲清洗儀（上?？茖С晝x器有限公司）；電子恒溫不銹鋼水浴鍋（上海宜昌儀器紗篩廠）；調(diào)溫電熱套（北京科華實驗儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司）。

1.2 試藥 牛蒡苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110819-201611），金銀花、牛蒡子、玄參、桔梗等中藥材飲片（四川新荷花中藥飲片股份有限公司），乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 牛蒡苷含量測定［3-10］

2.1.1 色譜條件。Agilent 5 HC-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-水（25∶75）為流動相，檢測波長為280nm，流速為1.0mL/min，柱溫為25℃。進樣量為10μL。標準曲線為Y=249.8X+14.067（r=0.9995），表明牛蒡苷在0.5～3.0μg具有良好的線性關系。

2.1.2 對照品溶液的制備。取牛蒡苷適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.25mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備。稱取處方量藥材飲片，按提取次數(shù)試驗和正交試驗進行提取，提取液濾過，濃縮至一定體積后，取5mL置于10mL量瓶中，加甲醇定容，作為提取次數(shù)試驗的供試品溶液；取1mL置于10mL量瓶中，加甲醇定容，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為正交試驗的供試品溶液。

2.1.4 樣品的測定［11］。精密吸取供試品濃縮液適量，注入高效液相色譜儀進行測定，計算樣品中牛蒡苷的含量。

2.1.5 干浸膏得率測定［2-3，12］。精密量取濃縮液50mL，置于已干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，于105℃干燥3小時，置干燥器中冷卻至室溫，精密稱定，計算干浸膏得率［干浸膏得率=干浸膏質(zhì)量（g）/藥材總質(zhì)量（g）×100%］。

2.2 水提工藝考察

2.2.1 提取次數(shù)試驗。稱取處方量的藥材飲片，加水8倍量分別提取3次，每次1.5小時。按照“2.1.3”項下的方法制備供試品溶液，測定干浸膏得率、牛蒡苷提取率，結果見表1。根據(jù)表1結果分析：第2、3次干浸膏得率和牛蒡苷提取量與第1次相比差異明顯，第3次提取干膏得率和牛蒡苷提取量占各自總量的比例均小于10.0%，說明經(jīng)2次提取已基本提取完全，因此將提取次數(shù)定為2次。

表1 提取次數(shù)試驗結果

2.2.2 正交試驗優(yōu)選水提工藝。以干浸膏得率、牛蒡苷含有量為評價指標，按L9（34）正交表對水提取條件進行試驗，因素與水平見表2。

表2 因素水平

根據(jù)設計表，通過L9（34）正交試驗法，按處方量稱取藥材飲片9份，分別加水提取，濾過，合并濾液，定容至一定體積。測定干浸膏得率、牛蒡苷含有量，并進行多指標綜合評分［3，12-15］。評分時以牛蒡苷含有量60分，干浸膏得率40分進行評定，牛蒡苷評分=（牛蒡苷含有量/最高牛蒡苷含有量）×60，干浸膏得率評分=（干浸膏得率/最高干浸膏得率）×40。結果見表3和表4。

以牛蒡苷含有量和干浸膏得率為綜合評價指標進行考察，由表3和表4分析得出，影響水提取工藝的因素由強到弱依次為：煎煮時間（C）＞加水量（A）＞浸泡時間（B），其中煎煮時間的差異具有顯著性，因此最佳提取工藝為A2B2C2，即藥材飲片加水浸泡0.5小時，第一次加8倍量的水煎煮2.0小時，第二次加6倍量的水煎煮1.5小時。

表3 正交試驗結果

表4 方差分析結果

2.3 驗證試驗 按優(yōu)選的最佳工藝，取10倍于處方量的藥材飲片3批（批號分別為20170701、20170702、20170703）進行放大驗證試驗，結果測得牛蒡苷含有量分別為5.09%，5.16%，5.12%，RSD為0.70%，干浸膏得率分別為23.47%、23.54%、22.97%，RSD為1.30%，表明優(yōu)選的水提工藝合理、穩(wěn)定可行。

3 討論

金銀利咽顆粒組方中各中藥飲片有效成分大多易溶于水，且大部分中藥復方制劑以水煎為主，故采用性價比較高的水提法。牛蒡子作為君藥之一其主要成分為牛蒡苷，中藥干浸膏是中藥發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎，因此以牛蒡苷含有量及干浸膏得率為綜合評價指標，以正交試驗優(yōu)選提取工藝，根據(jù)試驗結果及制劑室實際配制情況，綜合分析，選出操作簡便、穩(wěn)定可行的最佳工藝。

試驗過程中發(fā)現(xiàn)，在純化工藝中先選用沉降分離法（靜置過夜），然后取上清液置管式離心機中離心濾過，得到的溶液澄明度好，便于后續(xù)操作。