基于分子對(duì)接和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制

涂澤松 羅漢文 譚志韻 岑景盛 （佛山市中醫(yī)院骨科,廣東 佛山 528000）

骨關(guān)節(jié)炎（OA）是一種以關(guān)節(jié)和骨骼結(jié)構(gòu)呈進(jìn)行性損傷為主要病理特征的慢性疾病，其中主要以關(guān)節(jié)軟骨受損最嚴(yán)重，如病情持續(xù)進(jìn)展后期可逐漸出現(xiàn)關(guān)節(jié)僵硬、疼痛、畸形等癥狀〔1～3〕。此病好發(fā)于中老年患者，但也有研究證實(shí)青少年發(fā)病率也呈現(xiàn)上漲趨勢(shì)〔4，5〕。OA 的發(fā)病與年齡、肥胖、創(chuàng)傷、炎癥、過度運(yùn)動(dòng)、遺傳等多種因素關(guān)系密切，但其中復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制仍無明確闡述〔6〕。目前OA 的治療方案主要以緩解疼痛、改善關(guān)節(jié)活動(dòng)度為主要治療目標(biāo)，多采用口服非甾體抗炎藥及關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射玻璃酸鈉等對(duì)癥治療為主〔7，8〕。雖然上述治療策略對(duì)OA 癥狀緩解療效明顯，但對(duì)延緩關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)展進(jìn)程作用有限，且長期服用常引起胃腸道損害、耐藥等較大不良反應(yīng)〔9，10〕。因此，尋求高效低毒的治療藥物對(duì)OA 患者具有重要意義。

許多臨床文獻(xiàn)報(bào)道已證實(shí)中醫(yī)藥治療OA 的有效性〔11，12〕。其中中藥對(duì)是古今醫(yī)家在與疾病抗衡中運(yùn)用中醫(yī)學(xué)理論辨證施方的“配伍”核心，雖組成簡(jiǎn)單但在減毒增效方面又強(qiáng)于單味中藥〔13〕。黃芪、桑寄生及木瓜三藥常相互配伍為治療OA 的古今經(jīng)典方劑所用，如麻黃溫痹湯、西藏雪蓮藥酒?！睹t(yī)別錄》中記載，桑寄生有“去痹”奇效，《日華子本草》原文表明桑寄生有“助筋骨，益血脈”諸功，而《本草綱目》也表明木瓜主治“轉(zhuǎn)筋及腰膝”。此外，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為OA 患者病程綿長難愈的特點(diǎn)與人體體質(zhì)狀況及正氣休戚關(guān)系密切，如《素問遺篇.剌法》認(rèn)為此病發(fā)生責(zé)之于正虛:“正氣存內(nèi)，邪不可干；邪之所湊，其氣必虛”。故筆者認(rèn)為OA 治療應(yīng)以補(bǔ)益正氣為主，正虛得糾則血瘀絡(luò)阻自解，疾病漸愈。故臨床施方多配于有“補(bǔ)氣諸藥之最”之美稱的黃芪，《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》中曰:“黃芪能補(bǔ)氣，兼能升氣，善治胸中大氣下陷”，三者配伍合用優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，具補(bǔ)氣生血、舒筋活絡(luò)、強(qiáng)筋健骨之功，黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)成分眾多，致使其中抗骨關(guān)節(jié)炎機(jī)制過于復(fù)雜，難以闡明。本研究擬通過此藥對(duì)為著眼點(diǎn)，結(jié)合藥對(duì)中所含化學(xué)成分、作用靶點(diǎn)和分子對(duì)接方面探究其分子機(jī)制，進(jìn)而開展網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，為黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)治療OA 的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與分子層面相關(guān)作用機(jī)制的充分明確給予科學(xué)依據(jù)。

1 材料及方法

1.1 材料 藥物中重要化合物數(shù)據(jù)源自中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析（簡(jiǎn)稱為“TCMSP”）數(shù)據(jù)庫，源自數(shù)據(jù)庫GeneCards 與OMIM 的疾病相關(guān)靶點(diǎn)。PPI 網(wǎng)絡(luò)互作關(guān)系來源于STRING 數(shù)據(jù)庫。David6.8 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行共同靶點(diǎn)GO 富集和Kegg 代謝通路富集。

1.2 黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)活性成分篩選 通過使用TCMSP 數(shù)據(jù)庫對(duì)黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)重要活性成分及藥物作用潛在靶點(diǎn)進(jìn)行篩選。以下為藥物篩選條件:口服利用度（OB）及類藥性（DL）分別為30%、0.18 及以上水平。部分化合物的DL 值雖然偏低，然而已有研究結(jié)果證實(shí)此類化合物切實(shí)具備一定活性，因此將其作為納入對(duì)象〔7〕。通過獲得的活性成分及其對(duì)應(yīng)的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行成分-靶點(diǎn)作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖，篩選出藥對(duì)中作用最強(qiáng)的化合物。

1.3 疾病相關(guān)靶點(diǎn)的收集 借助數(shù)據(jù)庫GeneCards（https://www.genecards.org/）及OMIM 數(shù)據(jù)庫（http:// www.omim.org/）分別搜集OA 疾病相關(guān)靶點(diǎn)，取并集，表示可能為OA 潛在靶點(diǎn)。

1.4 藥物與疾病共同作用靶點(diǎn) 將1.3 中獲取的疾病相關(guān)靶點(diǎn)與1.2 中收集的藥對(duì)化合物潛在作用靶點(diǎn)通過Venny 系統(tǒng)平臺(tái)進(jìn)行映射，取兩者交集，此可能為藥物與疾病共同作用靶點(diǎn)，將這些靶點(diǎn)向數(shù)據(jù)庫STRING 內(nèi)導(dǎo)入，獲取蛋白靶點(diǎn)之間的互作關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖（PPI 圖），使用Cytoscape3.7.0 軟件將其相關(guān)信息進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，以2～3 倍中位數(shù)為篩選條件，篩選出關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。借助MCODE 插件分析PPI，通過所得模塊，完成化合物靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建。

1.5 交集基因GO 富集及KEGG 通路富集研究 針對(duì)所得交集基因，借助數(shù)據(jù)庫David6.8 開展GO與KEGG 代謝通路這兩項(xiàng)富集分析，進(jìn)一步剖析黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)治療OA 潛在作用機(jī)制。

1.6 分子對(duì)接 使用ChemOffice 軟件將重要化合物的3D 結(jié)構(gòu)進(jìn)行構(gòu)建，為了使能量最小化，以mol2格式存儲(chǔ)。借助PDB 獲取相互作用最密切的幾個(gè)靶點(diǎn)的3D 結(jié)構(gòu)*PDB 格式，借用PyMOL 軟件對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行去水、加氫等操作，利用Auto Dock Tools 軟件將化合物及靶點(diǎn)蛋白格式均轉(zhuǎn)換為*pdbqt 格式，最后通過運(yùn)行Vina.exe 軟件進(jìn)行對(duì)接。若結(jié)合能＜0，說明配體與受體之間可以自發(fā)結(jié)合，由于目前對(duì)于活性分子靶點(diǎn)的篩選尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，本研究選取結(jié)合能≤-5.0 kJ/mol 的活性成分作為黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)治療OA 靶點(diǎn)的篩選依據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)重要化合物成分 在TCMSP 中數(shù)據(jù)中檢索找到化合物:黃芪87 個(gè)，桑寄生46 個(gè)，木瓜80 個(gè)。通過1.2 的嚴(yán)格篩選進(jìn)一步剔除重復(fù)化合物的化合物，共獲得化合物23 個(gè)，見表1。進(jìn)一步剔除無對(duì)應(yīng)作用蛋白靶點(diǎn)的化合物，共有重要化合物19 個(gè)。

表1 黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)化合物信息

2.2 黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)重要化合物-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖分析 分析藥對(duì)內(nèi)的19 個(gè)關(guān)鍵化合物及98個(gè)靶點(diǎn)基因后，借助Cytoscape3.7.1，完成這些化合物與相應(yīng)靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，同時(shí)開展拓?fù)鋵W(xué)研究。在拓?fù)鋵W(xué)分析方面，所借助的工具為軟件Cytoscape3.7.1 配備的分析工具Network Analyzer，經(jīng)由網(wǎng)絡(luò)內(nèi)各節(jié)點(diǎn)的度值（degree），對(duì)此節(jié)點(diǎn)的關(guān)鍵性展開評(píng)估，見圖1。經(jīng)拓?fù)鋵W(xué)分析能夠明確，該網(wǎng)絡(luò)圖中有120 個(gè)節(jié)點(diǎn)，470 條邊，以節(jié)點(diǎn)度由大到小排序，化合物中排名靠前的有:槲皮素（MOL000098）度值79，山奈酚（MOL000422）度值34，7-O-甲基異丁香酚（MOL000378 ）度值 19，異鼠李素（MOL000354）、（6aR，11ar）-9，10-二甲氧基-6a，11a-二氫-6h-苯并呋喃〔3，2-c〕鉻-3-醇（MOL000380）等重要化合物。作用靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)度靠前的有:NCOA2（12）、PTGS1（12）、PRSS1（10）。通過重要化合物與作用靶點(diǎn)之間的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖可知，一個(gè)化合物可以作用于多個(gè)靶點(diǎn)，同時(shí)多個(gè)化合物也可以共同作用于一個(gè)靶點(diǎn)，說明黃芪-熟地-山茱萸藥對(duì)可能是通過多成分、多途徑、多靶點(diǎn)共同起效作用于疾病。

2.3 OA 疾病靶點(diǎn)及交集基因分析 GeneCards 數(shù)據(jù)中按照Relevance score≥4 檢索獲得OA 疾病靶點(diǎn)527 個(gè)，檢索OMIM 數(shù)據(jù)庫獲得29 個(gè)疾病有關(guān)靶點(diǎn)，對(duì)重復(fù)靶點(diǎn)匯總刪除處理后，最后所得強(qiáng)直性脊柱炎（AS）靶點(diǎn)為549 個(gè)。對(duì)于全部OA 靶點(diǎn)和藥物關(guān)鍵化合物靶點(diǎn)，借助在線分析軟件Draw Venn Diagrams 實(shí)施映射取交集處理，得到26 個(gè)共同作用靶點(diǎn)基因。

2.4 OA 疾病與黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)化合物共同作用靶點(diǎn)交集蛋白基因分析 將共同作用基因?qū)隨TRING 數(shù)據(jù)庫及與Cytoscape3.7.0 相結(jié)合通過拓?fù)鋵W(xué)分析得到，該網(wǎng)絡(luò)圖中聚類系數(shù)為0.735，節(jié)點(diǎn)為26，特征路徑長度為1.457，平均節(jié)點(diǎn)度為13.615，以靶點(diǎn)基因度值大于1.5 倍的平均節(jié)點(diǎn)度為篩選條件，篩選出白細(xì)胞介素（IL）-6（23）、胱天蛋白酶（CASP）3（22）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）A（22）、絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）8（21）靶點(diǎn)，說明這些基因靶點(diǎn)與OA 的發(fā)病與治療存在密切的聯(lián)系，蛋白互相作用見表2、圖2。

圖2 共同作用蛋白靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)(作用越密切,連線越粗,相互作用越多,點(diǎn)越大)

表2 OA 疾病與黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)共同作用靶點(diǎn)的度值和介數(shù)

2.5 OA 疾病與黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)共同作用靶點(diǎn)的生物信息學(xué)分析 通過David 數(shù)據(jù)庫對(duì)映射出的26 個(gè)共同作用靶點(diǎn)GO 富集及KEGG 代謝通路富集分析，通過Bonferroni 校正，P＜0.05，GO 富集出生物過程（BP）39 個(gè)，主要為:凋亡過程的負(fù)調(diào)控、巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞分化的負(fù)調(diào)控、對(duì)肌肉伸展的反應(yīng)、對(duì)藥物的反應(yīng)、RNA 聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控等生物過程。分子功能（MF）4 個(gè)，主要為:轉(zhuǎn)錄激活子（ATF）活性，RNA 聚合酶（pol）Ⅱ核心啟動(dòng)子近端部位序列特異性結(jié)合、纖連蛋白結(jié)合、染色質(zhì)結(jié)合、天冬氨酸型內(nèi)肽酶活性。細(xì)胞成分（CC）5 個(gè)，主要為:細(xì)胞外空間、核、胞質(zhì)溶膠、質(zhì)膜的外側(cè)、RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物。通過使用GraphPad Prism8.0.1 軟件將GO 富集可視化條形圖（圖3）。KEGG 代謝通路富集出62 條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。其中P值大小進(jìn)行排序，發(fā)現(xiàn)17 條代謝通路與膝關(guān)節(jié)OA 關(guān)系最為密切，其中涉及腫瘤壞死因子（TNF）信號(hào)通路、催乳素（PRL）信號(hào)通路、核因子（NF）-κB 信號(hào)通路、NLR 信號(hào)通路、TLR 信號(hào)通路、HIF 信號(hào)通路，使用OmicShare 數(shù)據(jù)庫將KEGG 通路內(nèi)富集所得靶點(diǎn)數(shù)與P值，進(jìn)行氣泡圖（如圖4）的繪制。通過此圖能夠發(fā)現(xiàn)，1 條KEGG 通路通常富集至若干個(gè)靶點(diǎn)基因，而1 個(gè)靶點(diǎn)基因又可同時(shí)見于若干條通路內(nèi)。

圖3 作用靶點(diǎn)的GO 富集分析(橙色為生物過程BP；綠色為細(xì)胞組成CC；藍(lán)色為MF)

圖4 作用靶點(diǎn)的KEGG 通路分析的氣泡圖(前40 條)

2.6 黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)中核心化合物及與OA重要靶點(diǎn)蛋白分子對(duì)接研究 現(xiàn)已明確，配體結(jié)合受體環(huán)節(jié)，能量愈弱，構(gòu)象穩(wěn)定性愈強(qiáng)，愈易于發(fā)生作用，此項(xiàng)研究中，將結(jié)合能≤-5.0 kJ/mol 作為其對(duì)接的篩選標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示OA 疾病與黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)中重要活性化合物與其共同作用的重要靶點(diǎn)分子對(duì)接親和力均遠(yuǎn)遠(yuǎn)＜-5.0 kJ/mol，因此，可以很好表明黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)中重要活性化合物與OA 疾病的重要作用靶點(diǎn)有較好的結(jié)合活性，亦證明黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)治療OA 具有良好的作用。分子對(duì)接結(jié)果見表3、圖5、圖6。

圖5 CASP3 靶點(diǎn)蛋白與重要化合物分子對(duì)接結(jié)果

圖6 IL6 靶點(diǎn)蛋白與重要化合物分子對(duì)接結(jié)果

表3 黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)中核心化合物及與OA 重要靶點(diǎn)蛋白的結(jié)合能

3 討論

OA 是一種以關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性損傷合并關(guān)節(jié)周圍骨質(zhì)增生為典型病理表現(xiàn)的慢性疾病〔14〕。目前多以老年群體常見，西醫(yī)治療方案多以對(duì)癥治療為主，而尚無遏制病源的方案〔15〕。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為OA 屬“骨痹”“痹病”范疇，屬本虛標(biāo)實(shí)之證〔16，17〕，補(bǔ)益肝腎，舒筋活絡(luò)，精血充實(shí)，則筋骨得養(yǎng)，病漸痊。黃芪、桑寄生及木瓜三藥屬補(bǔ)益肝腎，強(qiáng)壯筋骨，舒筋活絡(luò)之品，且臨床配伍運(yùn)用于中藥復(fù)方多具備價(jià)廉、低毒及劑型豐富等優(yōu)點(diǎn)，值得推薦。

槲皮素是類黃酮家族的成員，在退行性疾病中具有抗氧化和抗炎特性。Feng 等〔18〕通過研究發(fā)現(xiàn)槲皮素可減輕氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及相關(guān)細(xì)胞凋亡水平。此外，槲皮素通過激活sirtuin1/腺苷單磷酸激活的蛋白激酶（SIRT1/AMPK）信號(hào)通路來抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，側(cè)面印證了槲皮素可以保護(hù)SD 大鼠的OA 表現(xiàn)。Zhang 等〔19〕通過使用木瓜蛋白酶注射入關(guān)節(jié)腔來誘導(dǎo)OA 模型大鼠，結(jié)果表明，加入槲皮素治療的大鼠，TLR-4/NF-κB 信號(hào)傳導(dǎo)明顯受到抑制，而模型組大鼠的TLR-4/NF-κB 途徑受到刺激，說明槲皮素可以抑制這些OA 大鼠中炎癥因子（IL-1b 和TNF-α）的分泌，改善OA 癥狀（關(guān)節(jié)直徑和腳趾體積）。Noriyuki 等〔20〕觀察到槲皮素能有效改善中老年OA 患者Ⅱ型膠原的合成/降解平衡。Hiroaki 等〔21〕研究也證明槲皮素對(duì)改善老年OA 患者滑液特性有特殊作用。

眾所周知，山奈酚及其糖苷均具有藥理活性，包括有抗炎、抗癌、抗微生物、抗糖尿病、抗過敏、鎮(zhèn)痛、心臟保護(hù)和神經(jīng)保護(hù)作用〔22～24〕。研究表明〔25，26〕，山奈酚在大鼠OA 中具有重要的抗炎和保護(hù)作用，其作用原理可能是通過IL-1β 刺激大鼠軟骨細(xì)胞中的NF-κB 途徑，可顯著降低在IL-1β 刺激的大鼠軟骨細(xì)胞中NO 和PGE2 水平及iNOS 和Cox-2 活動(dòng)。異鼠李素是銀杏葉提取物之一，具有顯著抗炎、抗氧化、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性〔27〕，研究顯示〔28〕，異鼠李素可以顯著抑制iNOS 和PGE2 的產(chǎn)生及iNOS 和COX-2 的表達(dá)，從而使MIA 誘導(dǎo)的OA 大鼠體內(nèi)的炎癥因子水平降低，軟骨細(xì)胞的丟失和軟骨結(jié)構(gòu)的破壞都得到了明顯改善。在化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中，作用靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)度靠前的為:NCOA2（12）、PTGS1（12）、PRSS1（10），亦說明這些靶點(diǎn)可能是化合物作用最多的靶點(diǎn)。研究表 明〔29〕核受體 共激活因子（NCOA）2 在許多生理和病理過程（包括發(fā)育，內(nèi)分泌調(diào)節(jié)和腫瘤發(fā)生）中起重要作用。研究表明〔30〕，通過抑制老年OA 患者中滑膜細(xì)胞PTGS1 的表達(dá)，可以抑制OA 滑膜細(xì)胞的遷移/侵襲能力，并促進(jìn)OA 滑膜細(xì)胞的凋亡率，改善OA 癥狀。

本研究結(jié)果說明IL-6、CASP3、VEGFA、MAPK8基因靶點(diǎn)與OA 的發(fā)病與治療存在密切聯(lián)系。研究表明〔31〕，通過敲低OA 大鼠模型的IL-6 基因，可以導(dǎo)致基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-13 的表達(dá)和分泌受到抑制，可能與其抑制OA 軟骨細(xì)胞中c-FOS/AP-1 活性介導(dǎo)的炎癥刺激而發(fā)揮重要的抗炎作用有關(guān)。Cheng 等〔32〕研究提示miR-103a-3p 的上調(diào)可以顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制凋亡和炎癥，可能是與其抑制半胱氨酸（caspase）-3 的表達(dá)降低有關(guān)。研究表明〔33〕，中老年OA 患者的關(guān)節(jié)軟骨、滑膜和軟骨下骨中的VEGFA 上調(diào)，可以導(dǎo)致軟骨變性、滑膜炎和骨贅形成，通過降低小鼠原代軟骨細(xì)胞中VEGFA的表達(dá)，可以顯著抑制OA 的進(jìn)展。以上均表明，通過干預(yù)這些靶點(diǎn)，可以從分子機(jī)制角度出發(fā)，有效改善老年OA 患者的臨床癥狀。該P(yáng)PI 的分析中呈現(xiàn)出較其他基因聯(lián)系較為密切的靶點(diǎn)基因，亦是疾病發(fā)生發(fā)展最重要的基因。

本研究結(jié)果表明TNF 信號(hào)通路、HIF 信號(hào)通路、NF-κB 信號(hào)通路、TLR 信號(hào)通路、PRL 信號(hào)通路、NLR 信號(hào)通路均與炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、免疫調(diào)控等反應(yīng)相關(guān)，研究表明〔34〕紅花素通過促進(jìn)AMPK 磷酸化和SIRT1 表達(dá)來抑制TNF 誘導(dǎo)的NF-κB 活化和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，從而保護(hù)老年OA 患者的軟骨細(xì)胞并抑制炎癥，防止了OA 中的軟骨變性。研究證明〔35，36〕，炎性細(xì)胞因子、活性氧（ROS）和NO 也可能導(dǎo)致HIF-1α 的過度表達(dá)，臨床數(shù)據(jù)表明，中老年OA 患者中HIF-1α 表達(dá)上調(diào)，HIF-1α 水平升高與OA 的發(fā)展有關(guān)。Yang 等〔37〕研究證實(shí)了抑制HIF-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，對(duì)老年OA 患者軟骨細(xì)胞具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能是抑制IL-1β 誘導(dǎo)的老年OA患者軟骨細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，降低IL-1β 刺激的軟骨細(xì)胞中IL-6、TNF-α、MMP-1、MMP-3 和MMP-13 的促炎細(xì)胞因子水平。NF-κB 途徑是涉及OA 發(fā)病機(jī)制的主要分解代謝途徑之一，在與OA 相關(guān)的炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用〔38，39〕，Chen 等〔40〕研究證明CA 顯著抑制LPS 誘導(dǎo)的人OA 軟骨細(xì)胞中NFκB 信號(hào)通路的活性，可以有效防治OA，其作用機(jī)制可能是通過抑制LPS 誘導(dǎo)的OA 軟骨細(xì)胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-13 和ADAMTS-5 的表達(dá)。先天免疫系統(tǒng)是OA 炎癥周期的主要貢獻(xiàn)者〔41〕，有研究表明〔42〕，TOLL 樣受體（TLR）和NOD 型受體（NLR）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在調(diào)節(jié)OA 患者組織穩(wěn)態(tài)方面也起至關(guān)重要的作用，在OA 中，TLR 具有啟動(dòng)細(xì)胞防御和細(xì)胞死亡的雙重能力，Barreto 等〔43〕研究亦證明TLR激活可以導(dǎo)致存活信號(hào)和凋亡信號(hào)，這可能會(huì)對(duì)健康細(xì)胞和患病細(xì)胞產(chǎn)生不同的相對(duì)影響，并增加OA 細(xì)胞死亡的趨勢(shì)。

綜上，黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)中的重要化合物與OA 重要作用靶點(diǎn)蛋白結(jié)合能非常接近，從分子角度亦可以說明其化合物可以很好與疾病的靶點(diǎn)蛋白結(jié)合，從而產(chǎn)生治療作用，且對(duì)多種生物學(xué)功能與多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行調(diào)節(jié)以達(dá)到治療的作用。側(cè)面也驗(yàn)證了黃芪-桑寄生-木瓜藥對(duì)具備多化合物、多代謝渠道、多作用靶點(diǎn)的作用特征。