腹型過(guò)敏性紫癜發(fā)生消化道出血患兒HP感染及免疫反應(yīng)分析

張 強(qiáng)， 田文朋

(1.山東省立第三醫(yī)院消化內(nèi)科，山東省濟(jì)南市250031；2.青島市市立醫(yī)院兒科，山東省青島市266000)

過(guò)敏性紫癜(henoch-schonlein purpura，HSP)是一類兒童常見(jiàn)的彌漫性血管炎性變態(tài)反應(yīng)性疾病，患兒的主要表現(xiàn)為皮膚紫癜、腹痛、關(guān)節(jié)痛和腎臟損害等[1]。隨著過(guò)敏性紫癜疾病發(fā)展可造成消化道出血，且病情容易反復(fù)發(fā)作，甚至出現(xiàn)胃腸穿孔、壞死，導(dǎo)致出血性休克，給患兒及家屬帶來(lái)重大痛苦和負(fù)擔(dān)。研究顯示，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，HP)感染率在兒童中較高，而腹型過(guò)敏性紫癜(AHSP)所導(dǎo)致的腸胃損傷與幽門螺桿菌感染癥狀相似[2]。腸道黏膜病變使腸道內(nèi)菌群生長(zhǎng)的環(huán)境被破壞，導(dǎo)致菌群失調(diào)，腸道免疫發(fā)生紊亂。目前，關(guān)于AHSP的發(fā)病機(jī)制尚不明確，多數(shù)研究認(rèn)為AHSP與免疫異常有關(guān)[3-4]。因此，本文對(duì)AHSP發(fā)生消化道出血患兒幽門螺桿菌感染情況及免疫功能進(jìn)行研究，以期為AHSP并發(fā)消化道出血的預(yù)防、治療和改善預(yù)后提供參考。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2017年3月—2020年3月收治的AHSP患兒80例，按是否消化道出血分為出血組(n=33)和非出血組(n=47)；出血組男18例，女15例，年齡2～14歲，平均(8.0±1.7)歲；非出血組男26例，女21例，年齡2～13歲，平均(8.1±1.5)歲；另選擇同期40例健康小兒作為健康組，男22例，女18例。3組小兒性別、年齡比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，患兒家屬知情同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合AHSP的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②患兒年齡2～14歲；③均為初診病例。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他系統(tǒng)基礎(chǔ)疾?。虎诖嬖贏HSP腎病綜合征；③近期服用抗生素、微生態(tài)制劑；④依從性差，無(wú)法配合完成研究。

1.2 HP檢測(cè)及分型

所有小兒均行血清抗HP抗體檢測(cè)，HP抗體分型試劑盒購(gòu)自深圳伯勞特生物制品有限公司。均取10 μL血清，加入抗體室溫孵育30 min，充分洗滌后加入底物靜置5 min顯色?？贵w分型檢測(cè)結(jié)果判斷：HP細(xì)胞毒素CagA(116 kDa區(qū)帶)、空泡毒素VacA(91 kDa與95 kDa區(qū)帶)、尿素酶UreA(30 kDa區(qū)帶)和尿素酶UreB(66 kDa區(qū)帶)，有CagA區(qū)帶或VacA區(qū)帶的定義為Ⅰ型，無(wú)CagA區(qū)帶或VacA區(qū)帶的定義為Ⅱ型，Ⅰ型、Ⅱ型符合其一即為陽(yáng)性；無(wú)CagA區(qū)帶、VacA區(qū)帶及UreA、UreB區(qū)帶的定義為陰性[6]。

1.3 腸道菌群檢測(cè)

入院后留取糞便樣本，用無(wú)菌棉簽剝開(kāi)糞便表層，避免有雜物、尿液混入，棉簽挑取約1 g糞便置入無(wú)菌凍存管中-70 ℃保存待測(cè)。

取70 mg冷凍樣本糞便采用QIAamp DNA Stool試劑盒(QIAGEN公司)提取樣本總DNA，并行16S rDNA高通量測(cè)序，由北京安諾優(yōu)達(dá)基因科技有限公司完成。檢測(cè)結(jié)果以2 μL DNA中細(xì)菌量×357.14作為每克糞便樣本中細(xì)菌含量[5]。

1.4 炎癥細(xì)胞因子水平測(cè)定

入院后抽取3 mL空腹靜脈血，3 000 r/min離心10 min分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、IL-17、IL-23、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平，試劑盒購(gòu)自上海生工生物工程有限公司。

1.5 免疫功能測(cè)定

入院后抽取3 mL空腹靜脈血，3 000 r/min離心10 min分離血清，采用ARRAY 360蛋白分析儀(美國(guó)貝克曼公司)及散色比濁法測(cè)定IgA、IgG、IgM水平。取小兒1 mL全血采用FCM流式細(xì)胞儀(美國(guó)貝克曼公司)測(cè)定T淋巴細(xì)胞各亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 各組HP感染情況及分型的比較

AHSP患兒HP陽(yáng)性率高于健康組，出血組HP陽(yáng)性率高于非出血組，且AHSP患兒Ⅰ型HP檢出率高于Ⅱ型HP(P<0.05；表1)。

表1 各組HP感染情況及分型的比較 單位：例(%)

2.2 各組腸道菌群的比較

出血組和非出血組乳酸桿菌、雙歧桿菌水平低于健康組，大腸桿菌水平高于健康組(P<0.05)，出血組較非出血組更為顯著(P<0.05；表2)。

表2 各組腸道菌群定量檢測(cè)結(jié)果的比較

2.3 各組血清炎癥細(xì)胞因子水平的比較

出血組和非出血組血清炎癥細(xì)胞因子水平均高于健康組(P<0.05)，且出血組較非出血組更高(P<0.05；表3)。

表3 各組血清炎癥細(xì)胞因子水平的比較 單位：ng/L

2.4 各組免疫功能的比較

出血組IgA、IgG、IgM水平低于非出血組和健康組(P<0.05)，非出血組IgA水平低于健康組(P<0.05)，而IgG和IgM與健康組比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)。出血組和非出血組T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康組，而CD8+高于健康組(P<0.05)；出血組較非出血組更為顯著(P<0.05；表4)。

表4 各組免疫功能的比較

3 討 論

過(guò)敏性紫癜是一種多系統(tǒng)參與的血管炎性疾病，對(duì)于皮膚、腎臟、關(guān)節(jié)和胃腸道都有影響，但具有一定的自限性。研究顯示，HSP在3～10歲兒童中最為常見(jiàn)，以AHSP為主，主要表現(xiàn)為臀部區(qū)域和下肢皮疹[7]。AHSP胃腸道反應(yīng)主要表現(xiàn)為腹痛和消化道出血，若腹痛出現(xiàn)在皮膚紫癜之后容易診斷，但反之容易發(fā)生誤診。病理學(xué)研究顯示，AHSP主要為全身性小血管急性炎癥反應(yīng)，可累及微小動(dòng)脈和靜脈，導(dǎo)致炎癥出血或滲出，從而導(dǎo)致胃腸道黏膜潰瘍出血的發(fā)生[8]。AHSP的發(fā)病影響因素眾多，如藥物、感染、惡性腫瘤等均與HSP發(fā)生發(fā)展有關(guān)[9]。

研究表明，感染是AHSP發(fā)病的主要誘因[10]。另有多項(xiàng)研究證實(shí)，HP感染可以引發(fā)消化道黏膜損傷及變態(tài)反應(yīng)[11-12]。本研究結(jié)果顯示，AHSP消化道出血患兒HP陽(yáng)性率高于AHSP未發(fā)生消化道出血患兒及正常兒童，且Ⅰ型HP檢出率高于Ⅱ型HP，提示AHSP消化道出血可能與Ⅰ型HP感染存在密切關(guān)系。HP感染導(dǎo)致AHSP的發(fā)生可能與HP引發(fā)的炎癥和免疫反應(yīng)有關(guān)。HP感染導(dǎo)致血液自由基水平升高，加重血管內(nèi)皮損傷，導(dǎo)致血管內(nèi)皮持續(xù)性炎癥經(jīng)久不愈、反復(fù)發(fā)作。兒童體質(zhì)較弱，免疫力較低，腸道微生態(tài)平衡容易遭到破壞而出現(xiàn)嚴(yán)重的腸道微生態(tài)紊亂。本研究中，AHSP消化道出血患兒乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量明顯降低，大腸桿菌數(shù)量明顯升高，提示AHSP消化道出血患兒存在腸道菌群生態(tài)紊亂，這可能與HP感染及AHSP消化道出血導(dǎo)致的腸胃黏膜屏障損傷有關(guān)。本研究中，AHSP患兒血清IL-6、IL-8、IL-17、IL-23、TNF-α比健康組明顯升高。HP感染會(huì)增加毒素因子分泌，促使炎癥介質(zhì)不斷釋放，加重?fù)p傷胃腸黏膜屏障，導(dǎo)致持續(xù)性炎癥反應(yīng)。

AHSP感染多發(fā)生于病毒細(xì)菌感染后，其本質(zhì)為一種免疫性疾病，體液免疫和細(xì)胞免疫在機(jī)體免疫中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。研究顯示，AHSP為IgA抗體所介導(dǎo)，表現(xiàn)為IgA水平增高[13]，本研究結(jié)果與之相似。本研究中，IgG、IgM水平在AHSP無(wú)消化道出血患兒和健康兒童中無(wú)明顯差異，但在AHSP消化道出血患兒中明顯升高。本研究出血組和非出血組T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康組,CD8+高于健康組，出血組較非出血組更為顯著。T細(xì)胞在B細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和分泌免疫球蛋白過(guò)程中具有重要作用，活化的CD4細(xì)胞過(guò)度表達(dá)CD40L可與B細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞上的CD40結(jié)合，刺激B細(xì)胞活化增殖和抗體形成，參與體液免疫過(guò)程[14]。研究認(rèn)為，HSP患兒T淋巴細(xì)胞，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+降低與自身淋巴細(xì)胞反應(yīng)有關(guān)[15]，但其具體機(jī)制尚未明了。因此，AHSP患兒監(jiān)測(cè)免疫功能變化有助于病情的判斷和治療。

綜上所述，AHSP消化道出血的發(fā)病與HP感染、免疫功能紊亂促使腸道菌群失調(diào)、炎癥發(fā)展有關(guān)，進(jìn)行HP及免疫指標(biāo)檢測(cè)有助于AHSP伴消化道出血的預(yù)防和治療。