黃精中糖類成分的含量測定方法比較及其酒蒸工藝優(yōu)化

潘東梅 蔡維珊 梁業(yè)婷 沈穎 史哲銘 易延逵

中圖分類號 R283.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）24-2994-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.24.09

摘 要 目的：比較黃精中多糖及還原糖的含量測定方法，并優(yōu)化黃精的酒蒸工藝。方法：分別采用蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法測定黃精中多糖的含量，分別采用蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸法和3，5-二硝基水楊酸（DNS）法測定黃精中還原糖的含量。以黃精炮制品的外觀性狀評分以及多糖、還原糖、總糖含量為指標(biāo)，加酒量、蒸制時間、悶潤時間為因素，采用拉丁方設(shè)計優(yōu)化黃精的酒蒸工藝并比較蒸制前后多糖、還原糖、總糖含量。結(jié)果：蒽酮-硫酸法所得多糖、還原糖檢測質(zhì)量濃度的線性范圍均為0.006 6～0.033 mg/mL（R 2=0.999 9），精密度、穩(wěn)定性（90 min）、重復(fù)性試驗的RSD分別小于3%、2%，平均加樣回收率分別為99.75%（RSD=0.48%，n=6）、103.40%（RSD=1.25%，n=6）;苯酚-硫酸法所得多糖、還原糖檢測質(zhì)量濃度的線性范圍均為0.002 5～0.025 mg/mL（R 2=0.999 2），精密度、穩(wěn)定性（90 min）、重復(fù)性的RSD分別小于5%、6%，平均加樣回收率分別為112.80%（RSD=2.36%，n=6）、99.20%（RSD=3.47%，n=6）;DNS法所得還原糖檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.01～0.18 mg/mL（R 2=0.999 9），精密度、穩(wěn)定性（90 min）、重復(fù)性試驗的RSD均小于2%，平均加樣回收率為96.95%（RSD=1.19%，n=6）。黃精的最優(yōu)酒蒸工藝為加酒量20%、悶潤2 h、蒸制7 h。3次驗證實驗所得黃精酒蒸品中多糖、還原糖、總糖平均含量的RSD均小于3%（n=3）。4批生黃精中多糖、還原糖、總糖的平均含量分別為16.3%、11.2%、27.4%，4批黃精酒蒸品中多糖、還原糖、總糖的平均含量分別為3.4%、61.0%、64.4%。結(jié)論：黃精中多糖的含量測定以蒽酮-硫酸法為優(yōu)，還原糖的含量測定以DNS法為優(yōu);黃精酒蒸品中多糖的含量明顯下降，而還原糖和總糖的含量明顯增加。

關(guān)鍵詞 黃精;多糖;還原糖;含量測定;酒蒸工藝優(yōu)化

Comparison of Determination Methods of Saccharides in Polygonatum cyrtonema and Optimization of Its Wine-steaming Technology

PAN Dongmei，CAI Weishan，LIANG Yeting，SHEN Ying，SHI Zheming，YI Yankui（School of Traditional Chinese Medicine， Southern Medical University， Guangzhou 510515， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To compare the methods for the content determination of polysaccharide and reducing sugar in Polygonatum cyrtonema， and to optimize the wine-steaming technology of P. cyrtonema. METHODS： The contents of polysaccharide in P. cyrtonema were determined by anthrone-sulfuric acid method and phenol-sulfuric acid method. The contents of reducing sugar in P. cyrtonema were determined by anthrone-sulfuric acid method， phenol-sulfuric acid method and 3，5-dinitrosalicylic acid （DNS） method， respectively. Taking appearance and property scores of processed products， the contents of polysaccharide， reducing sugar and total sugar as indicators， the amount of alcohol added， steaming time and moistening time as factors， the wine-steaming technology of P. cyrtonema was optimized by Latin square design. The contents of polysaccharide， reducing sugar and total sugar were compared before and after steaming. RESULTS： The linear ranges of polysaccharide and reducing sugar obtained by anthrone-sulfuric acid method were both 0.006 6-0.033 mg/mL （R2=0.999 9）. RSDs of precision， stability （90 min） and reproducibility tests were all lower than 3% and 2%， respectively. Average recoveries were 99.75% （RSD=0.48%， n=6） and 103.40% （RSD=1.25%， n=6）， respectively. The linear ranges of polysaccharide and reducing sugar obtained by phenol-sulfuric acid method were both 0.002 5-0.025 mg/mL （R2=0.999 2）. RSDs of precision， stability （90 min） and reproducibility tests were all lower than 5% and 6%， respectively. Average recoveries were 112.80% （RSD=2.36%，n=6） and 99.20% （RSD=3.47%， n=6）. The linear range of reducing sugar obtained by DNS method was 0.01-0.18 mg/mL（R2=0.999 9）. RSDs of precision， stability （90 min） and reproducibility tests were all lower than 2%. Average recoveries was 96.95%（RSD=1.19%，n=6）. The optimal wine-steaming technology of P. cyrtonema included the amount of alcohol added of 20%， moistening time of 2 h and steaming time of 7 h. RSDs of average contents of polysaccharide， reducing sugar and total sugar in wine-steamed products were all lower than 3% in 3 times of validation tests （n=3）. The average contents of polysaccharide， reducing sugar and total sugar in 4 batches of P. cyrtonema were 16.3%， 11.2% and 27.4%; those of 4 batches of wine-steamed products were 3.4%， 61.0% and 64.4%， respectively. CONCLUSIONS： The anthrone- sulfuric acid method is the best for the determination of poly- saccharide in P. cyrtonema; DNS method is the best for the determination of reducing sugar in P. cyrtonema. The content of polysaccharide in wine-steamed products is decreased signifi- cantly， while the contents of reducing sugar and total sugar are increased significantly.

KEYWORDS? ?Polygonatum cyrtonema; Polysaccharide; Reducing sugar; Content determination; Optimization of wine-steaming technology

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目（No.82004101）;南方醫(yī)科大學(xué)2020年度大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（No.S202012121109）

講師，博士。研究方向：中醫(yī)方劑。電話：020-61648263。E-mail：pandongmei1228@126.com

通信作者：副教授，博士。研究方向：藥物新技術(shù)。電話：020-62789408。E-mail：dareyyk@sina.com

黃精為百合科植物黃精Polygonatum sibiricum Red.、滇黃精Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖，具有補氣養(yǎng)陰、健脾益腎、潤肺等功效[1]。黃精主要含有糖、皂苷、黃酮、木脂素、氨基酸、醌、生物堿、維生素等成分以及多種微量元素[2-3]，其中糖類成分是黃精重要的活性成分，具有抗氧化、保護小鼠肝臟、增強小鼠免疫功能的作用[4-5];可降低糖尿病模型大鼠的血糖水平，延緩其眼部并發(fā)癥的發(fā)生[6];可增加大鼠血液中超氧化物歧化酶活性，降低丙二醛含量，改善心肌肥厚癥狀[7]。此外，黃精還對三陰性乳腺癌抑制的骨髓造血有保護作用[8]，可改善阿爾茨海默病模型大鼠海馬組織的病理改變[9]，可通過作用于病毒相關(guān)靶點而在新型冠狀病毒肺炎治療領(lǐng)域中發(fā)揮潛力[10]。現(xiàn)有文獻(xiàn)報道的黃精中多糖和還原糖類成分的含量測定方法有蒽酮-硫酸法[1，11]和苯酚-硫酸法[12-13]，此外還原糖的含量測定方法還包括3，5-二硝基水楊酸（DNS）法[12]。這些測定方法是糖類成分測定的常用方法，但所用試劑及反應(yīng)原理各有不同，因此所得結(jié)果略有差異。

黃精的炮制方法較多，有蒸法、蔓荊子水蒸法、九蒸九曬法、黑豆煮法、水煮曬干復(fù)蒸曬法、取汁酒熬法、酒蒸法、熟地水蒸法、枸杞水蒸法、乳浸曬法等[14-16]，2020年版《中國藥典》（一部）記載的黃精常用炮制方法為酒蒸法[1]。目前，雖已有文獻(xiàn)對黃精酒蒸工藝參數(shù)的優(yōu)化進(jìn)行了報道[17-18]，但筆者在黃精酒蒸炮制的生產(chǎn)加工過程中發(fā)現(xiàn)，酒蒸可使多糖成分的含量明顯下降，很難達(dá)到2020年版《中國藥典》（一部）中規(guī)定的酒蒸黃精多糖含量[以無水葡萄糖（C6H12O6）計]不低于4.0%的要求[1]?；诖?，本研究對黃精中糖類成分含量的測定方法進(jìn)行了比較，同時采用拉丁方設(shè)計優(yōu)化黃精的酒蒸工藝，旨在為其酒蒸品的質(zhì)量控制提供依據(jù)，為規(guī)范黃精的酒蒸炮制生產(chǎn)加工工藝提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有UV-2600型紫外-可見分光光度計（日本Shimadzu公司）、T-500型電子天平（美國G&G公司）、Centrifuge 5804R型離心機（德國Eppendorf公司）、BS-ⅡOS型電子天平（德國Sartorius公司）、KH-100DE型數(shù)控超聲儀（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

葡萄糖對照品（批號190622，純度>99%）購自廣州市齊云生物科技有限公司;黃酒（酒精度11～19度）購自浙江古越龍山紹興酒股份有限公司;苯酚、蒽酮、硫酸、DNS、乙醇等試劑均為分析純，水為去離子水。

4批黃精飲片樣品均購買于2020年10月，經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)中藥鑒定教研室劉傳明副教授鑒定均為多花黃精P. cyrtonema Hua的干燥根莖。4批黃精飲片樣品來源信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃精中多糖的含量測定方法比較

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱定干燥至恒定質(zhì)量的葡萄糖對照品，置于量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度分別為0.33、0.125、1 mg/mL的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

取于60 ℃下干燥至恒定質(zhì)量的黃精細(xì)粉（過五號篩）0.05 g，置于圓底燒瓶中，加80%乙醇30 mL，水浴中加熱回流1 h，濾過，加80%乙醇定容至50 mL，即得黃精還原糖供試品溶液。將上述濾過的殘渣和濾紙置于圓底燒瓶中，加水30 mL，水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，用熱水洗滌殘渣及燒瓶4次，每次2 mL，合并濾液與洗液，并轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得黃精多糖供試品溶液[1]。

2.1.3 檢測波長的選擇

（1）蒽酮-硫酸法：取“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為0.33 mg/mL的葡萄糖對照品溶液、“2.1.2”項下黃精多糖供試品溶液（編號S3）各1 mL，分別置于不同試管中，加水至2 mL，搖勻，于冰浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液（精密稱取蒽酮0.2 g，加80%濃硫酸100 mL溶解，搖勻，即得）至10 mL，混勻，放置5 min后，置于水浴中反應(yīng)10 min，取出，立即置于冰浴中冷卻10 min。以不含對照品、供試品的反應(yīng)體系為空白對照，使用紫外-可見分光光度計于450～700 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，于625 nm波長處，對照品溶液、黃精多糖供試品溶液均有最大吸收，故選擇蒽酮-硫酸法的檢測波長為625 nm。結(jié)果見圖1。

（2）苯酚-硫酸法：取“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為0.125 mg/mL的葡萄糖對照品溶液、“2.1.2”項下黃精多糖供試品溶液（編號S3）各0.5 mL，分別置于不同試管中，加水至2 mL，分別精密加入5%苯酚溶液（精密稱取苯酚2.5 g，用水溶解并定容至50 mL，即得）1 mL、濃硫酸7 mL，搖勻，于水浴中加熱20 min，然后冷卻至室溫。以不含對照品、供試品的反應(yīng)體系為空白對照，使用紫外-可見分光光度計于400～600 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，于490 nm波長處，對照品溶液、黃精多糖供試品溶液均有最大吸收，故選擇苯酚-硫酸法的檢測波長為490 nm。結(jié)果見圖2。

2.1.4 線性關(guān)系考察

（1）蒽酮-硫酸法：分別精密量取“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為0.33 mg/mL的葡萄糖對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，按“2.1.3（1）”項下方法顯色后，使用紫外-可見分光光度計于625 nm波長處測定吸光度。以葡萄糖質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示，多糖的回歸方程為y=37.363 6x-0.025 8（R 2=0.999 9），表明多糖檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.006 6～0.033 mg/mL。

（2）苯酚-硫酸法：分別精密量取“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為0.125 mg/mL的葡萄糖對照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，按“2.1.3（2）”項下方法顯色后，使用紫外-可見分光光度計于490 nm波長處測定吸光度。以葡萄糖質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸[19]。結(jié)果顯示，多糖的回歸方程為y=41.298x-9.000×10-5（R 2=0.999 2），表明多糖檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.002 5～0.025 mg/mL。

2.1.5 精密度試驗

取“2.1.2”項下黃精多糖供試品溶液（編號S3），按“2.1.3”項下兩種方法分別顯色后，使用紫外-可見分光光度計分別于625、490 nm波長處連續(xù)測定6次吸光度。結(jié)果顯示，蒽酮-硫酸法所得吸光度的RSD為2.60%（n=6），苯酚-硫酸法所得吸光度的RSD為3.67%（n=6）。

2.1.6 重復(fù)性試驗

取黃精細(xì)粉（編號S3）0.05 g，按“2.1.2”項下方法制備黃精多糖供試品溶液，共12份，再按“2.1.3”項下兩種方法分別顯色（每個方法各6份）后，使用紫外-可見分光光度計分別于625、490 nm波長處測定吸光度。結(jié)果顯示，蒽酮-硫酸法所得含量的RSD為1.15%（n=6），苯酚-硫酸法所得含量的RSD為4.08%（n=6）。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗

取“2.1.2”項下黃精多糖供試品溶液（編號S3），按“2.1.3”項下兩種方法分別顯色，并在室溫下放置0、10、20、30、60、90 min時使用紫外-可見分光光度計分別于625、490 nm波長處測定吸光度。結(jié)果顯示，蒽酮-硫酸法所得吸光度的RSD為1.40%（n=6），苯酚-硫酸法所得吸光度的RSD為2.13%（n=6）。

2.1.8 加樣回收率試驗

取已知含量的黃精細(xì)粉（編號S3）0.05 g，共12份，按“2.1.2”項下方法制備黃精多糖供試品溶液，精密加入對照品溶液0.4 mL（蒽酮-硫酸法為0.33 mg/mL的葡萄糖對照品溶液，苯酚-硫酸法為0.125 mg/mL的葡萄糖對照品溶液），混勻，再按“2.1.3”項下兩種方法分別顯色（每個方法各6份）后，使用紫外-可見分光光度計分別于625、490 nm波長處測定吸光度并計算加樣回收率。結(jié)果顯示，蒽酮-硫酸法的加樣回收率為98.50%～100.80%，平均加樣回收率為99.75%（RSD=0.48%，n=6）;苯酚-硫酸法的加樣回收率為107.50%～121.50%，平均加樣回收率為112.80%（RSD=2.36%，n=6）。

2.2 黃精中還原糖的含量測定方法比較

2.2.1 檢測波長的選擇

（1）蒽酮-硫酸法：取“2.1.2”項下黃精還原糖供試品溶液（編號S3），共6份，其余操作及結(jié)果（未取葡萄糖對照品溶液）同“2.1.3（1）”項。結(jié)果見圖3。

（2）苯酚-硫酸法：取“2.1.2”項下黃精還原糖供試品溶液（編號S3），共6份，其余操作及結(jié)果（未取葡萄糖對照品溶液）同“2.1.3（2）”項。結(jié)果見圖4。

（3）DNS法：分別精密吸取“2.1.2”項下黃精還原糖供試品溶液（編號S3）3.5 mL、“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為1 mg/mL的葡萄糖對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8 mL，加水至4 mL，分別精密加入DNS溶液（取DNS 0.65 g，用水溶解后，加入2 mol/L氫氧化鈉溶液2.5 mL、丙三醇4.5 g，再用水定容至100 mL，即得）5 mL，混勻，于水浴中煮沸5 min，然后冷卻至室溫，加水定容至10 mL，以不含對照品、供試品的反應(yīng)體系為空白對照，使用紫外-可見分光光度計于450～700 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，于500 nm波長左右，對照品溶液、黃精還原糖供試品溶液均有較大吸收，但此波長下DNS也有吸收，對測定結(jié)果有一定干擾。有研究認(rèn)為，采用DNS法測定還原糖時宜以520 nm為檢測波長[12]，故本研究選擇DNS法的檢測波長為520 nm。結(jié)果見圖5。

2.2.2 線性關(guān)系考察

（1）蒽酮-硫酸法：操作及結(jié)果同“2.1.4（1）”項。

（2）苯酚-硫酸法：操作及結(jié)果同“2.1.4（2）”項。

（3）DNS法：取“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為1 mg/mL的葡萄糖對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8 mL，按“2.2.1（3）”項下方法顯色后，使用紫外-可見分光光度計于520 nm波長處測定吸光度。以葡萄糖質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示，還原糖的回歸方程為y=12.370 3x-0.120 2（R 2=0.999 9），表明還原糖檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.01～0.18 mg/mL。

2.2.3 精密度試驗

取“2.1.2”項下黃精還原糖供試品溶液（編號S3），按“2.2.1”項下3種方法分別顯色后，使用紫外-可見分光光度計分別于625、490、520 nm波長處連續(xù)測定6次吸光度。結(jié)果顯示，蒽酮-硫酸法所得吸光度的RSD為1.35%（n=6），苯酚-硫酸法所得吸光度的RSD為0.39%（n=6），DNS法所得吸光度的RSD為0.99%（n=6）。

2.2.4 重復(fù)性試驗

取黃精細(xì)粉（編號S3）0.05 g，按“2.1.2”項下方法制備黃精還原糖供試品溶液，共18份，按“2.2.1”項下3種方法分別顯色（每個方法各6份）后，使用紫外-可見分光光度計分別于625、490、520 nm波長處測定吸光度。結(jié)果顯示，蒽酮-硫酸法所得含量的RSD為1.75%（n=6），苯酚-硫酸法所得含量的RSD為5.01%（n=6），DNS法所得含量的RSD為1.43%（n=6）。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗

取“2.1.2”項下黃精還原糖供試品溶液（編號S3），按“2.2.1”項下3種方法分別顯色，并在室溫下放置0、10、20、30、60、90 min時分別于625、490、520 nm波長處測定吸光度。結(jié)果顯示，蒽酮-硫酸法所得吸光度的RSD為0.33%（n=6），苯酚-硫酸法所得吸光度的RSD為0.77%（n=6），DNS法所得吸光度的RSD為0.65%（n=6）。

2.2.6 加樣回收率試驗

取已知含量的黃精細(xì)粉（編號S3）0.05 g，按“2.1.2”項下方法制備黃精還原糖供試品溶液。取0.2 mL，共6份，分別精密加入“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為0.33 mg/mL的葡萄糖對照品溶液0.4 mL（蒽酮-硫酸法）。取上述制備的黃精還原糖供試品溶液0.1 mL，共6份，分別精密加入“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為0.125 mg/mL的葡萄糖對照品溶液0.4 mL（苯酚-硫酸法）。取上述制備的黃精還原糖供試品溶液3.5 mL，共6份，分別精密加入“2.1.1”項下質(zhì)量濃度為1 mg/mL的葡萄糖對照品溶液0.3 mL（DNS法）。按“2.2.1”項下3種方法分別顯色后，使用紫外-可見分光光度計分別于625、490、520 nm波長處測定吸光度并計算加樣回收率。結(jié)果顯示，蒽酮-硫酸法的加樣回收率為97.00%～108.30%，平均加樣回收率為103.40%（RSD=1.25%，n=6）;苯酚-硫酸法的加樣回收率為95.00%～109.50%，平均加樣回收率為99.20%（RSD=3.47%，n=6）;DNS法的加樣回收率為95.00%～99.30%，平均加樣回收率為96.95%（RSD=1.19%，n=6）。

2.2.7 黃精多糖及還原糖的含量測定

參考“2.1”“2.2”項下方法學(xué)考察結(jié)果，取4批黃精飲片，按“2.1.2”項下方法分別制備黃精多糖、還原糖供試品溶液，采用蒽酮-硫酸法測定其中多糖的含量，采用DNS法測定其中還原糖的含量，并計算總糖含量：總糖含量=多糖含量+還原糖含量。

2.3 拉丁方設(shè)計優(yōu)化黃精的酒蒸工藝

2.3.1 因素與水平

以黃精多糖、還原糖、總糖含量和外觀性狀評分（外觀性狀評分為色澤、氣味、質(zhì)地評分之和，其標(biāo)準(zhǔn)[20]見表2）為指標(biāo)，以加酒量（以藥材總量的百分含量計）、蒸制時間、悶潤時間（蒸制時間為關(guān)注因素，其余因素為非關(guān)注因素[21]）為因素，采用5×5拉丁方設(shè)計優(yōu)化黃精的酒蒸工藝。黃精酒蒸工藝?yán)》皆O(shè)計的因素與水平見表3、實驗設(shè)計方案與結(jié)果見表4。

采用SPSS 26.00軟件對表4中的外觀性狀評分、多糖含量、還原糖含量、總糖含量進(jìn)行分析。外觀性狀評分等指標(biāo)的主體間效應(yīng)檢驗結(jié)果見表5，各因素的事后檢驗結(jié)果見表6～表8。

由表5、表6可知，蒸制時間對外觀性狀評分有顯著影響（P=0.038），隨著蒸制時間的延長，外觀性狀評分呈增長趨勢，當(dāng)蒸制7 h后，外觀性狀評分達(dá)到穩(wěn)定;隨著蒸制時間的延長，多糖含量呈先增加后降低的趨勢，于蒸制7 h時達(dá)到最高，隨后趨于穩(wěn)定;隨著蒸制時間的延長，還原糖及總糖含量略有波動，均于蒸制7 h時較高，隨后趨于穩(wěn)定，故選擇蒸制時間為7 h。由表7可知，當(dāng)加酒量為20%時，外觀性狀評分為最高;當(dāng)加酒量為20%、30%時，多糖含量相差不大且均較高;當(dāng)加酒量為20%時，還原糖及總糖含量均為最高，故選擇加酒量為20%。由表8可知，隨著悶潤時間的延長，外觀性狀評分的變化不大，表明悶潤時間對其影響不大;隨著悶潤時間的延長，多糖含量呈先增加后降低的趨勢，還原糖及總糖含量呈先降低后升高的趨勢，考慮到上述整體變化趨勢，選擇悶潤時間為2 h。

可見，黃精最優(yōu)酒蒸工藝為加酒量20%、悶潤2 h、蒸制7 h。

2.3.2 驗證實驗

取黃精飲片樣品（編號S3）適量，按“2.3.1”項下最優(yōu)酒蒸工藝平行制備3批酒蒸黃精，按“2.2.7”項下方法測定其中多糖及還原糖含量并計算總糖含量。結(jié)果顯示，所制3批黃精酒蒸品中多糖、還原糖、總糖的平均含量分別為3.0%（RSD=2.65%，n=3）、58.7%（RSD=2.91%，n=3）、61.7%（RSD=2.86%，n=3），表明優(yōu)化所得酒蒸工藝穩(wěn)定、可行。

2.3.3 黃精酒蒸品的制備及含量比較

取4批黃精飲片樣品，按上述最優(yōu)酒蒸工藝炮制，按“2.2.7”項下方法測定其中多糖及還原糖含量并計算總糖含量。以生黃精為對照，進(jìn)行含量比較。每批樣品測定3次。結(jié)果顯示，4批生黃精中多糖、還原糖、總糖的平均含量分別為16.3%、11.2%、27.4%;4批黃精酒蒸品中多糖、還原糖、總糖的平均含量分別為3.4%、61.0%、64.4%，多糖含量明顯降低，而還原糖和總糖含量明顯升高，提示優(yōu)化所得最優(yōu)酒蒸工藝可明顯提高黃精中糖類成分的總含量。結(jié)果見表9。

3 討論

本研究在采用苯酚-硫酸法測定黃精多糖含量時，所得平均加樣回收率（112.80%）偏大，其原因可能為：在室溫下，苯酚的溶解擴散較慢，經(jīng)超聲處理可使苯酚溶解，但過一段時間后溶液會出現(xiàn)分層現(xiàn)象，導(dǎo)致實驗過程中每次量取的苯酚溶液的質(zhì)量濃度有所偏差，從而影響實驗結(jié)果[21]。同時，因為苯酚自身易被氧化，故實驗中所使用的苯酚需要進(jìn)行重蒸，以避免因苯酚反應(yīng)量不夠而影響實驗結(jié)果[21]。鑒于此，本研究選擇蒽酮-硫酸法測定黃精多糖的含量。筆者在研究過程中發(fā)現(xiàn)，S3批生黃精采用DNS法測得的還原糖含量僅為13.1%，而采用蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法測得的還原糖含量超過80%，其原因可能與黃精中含有較多的可溶于乙醇的苷類化合物有關(guān)[2-3];但由于蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法均使用了濃硫酸，而濃硫酸會使糖苷中的糖基部分脫水而形成糠醛及其衍生物，因此這兩種方法測得的還原糖含量還包括了其他成分的含量，故本研究選擇DNS法測定黃精還原糖的含量。

黃精中的黏液質(zhì)有刺激咽喉的副作用，經(jīng)炮制后，黃精多糖發(fā)生降解，使得大量黏液質(zhì)被除去，刺激咽喉的副作用有所減少，加之多糖降解所產(chǎn)生的低聚糖具有提高免疫、抗氧化等藥理作用，從而增強了黃精的補益功效[22]。酒具有行藥勢、通血脈等作用，能增加中藥有效成分的溶出，且有利于增強黃精中低聚糖提高免疫力、抗氧化的功效[14]。

拉丁方設(shè)計表的行與列皆為配伍組，可減少實驗次數(shù)[23]。本研究采用拉丁方設(shè)計優(yōu)化黃精的酒蒸工藝，結(jié)果顯示，最優(yōu)酒蒸工藝為加酒量20%、悶潤2 h、蒸制7 h。優(yōu)化所得酒蒸工藝可明顯提高黃精還原糖和總糖含量，而明顯降低多糖含量，這可能與炮制過程中，在高溫或其他因素的影響下，多糖成分發(fā)生降解而生成低聚糖或單糖有關(guān)[17-18]。2020年版《中國藥典》（一部）要求，生黃精及其蒸制品均以黃精多糖為含量指標(biāo)[1]。有研究認(rèn)為，黃精以蒸制和九蒸九曬為宜[14]，但經(jīng)蒸制后黃精的多糖含量明顯減少，且蒸制達(dá)到一定時間或蒸制次數(shù)過多，其多糖含量均難以達(dá)到《中國藥典》“不低于4.0%”的要求[1]。因此，筆者認(rèn)為，可將還原糖和總糖含量作為評價黃精質(zhì)量的指標(biāo)。

綜上所述，黃精中多糖的含量測定以蒽酮-硫酸法為優(yōu)，還原糖的含量測定以DNS法為優(yōu)。所得最優(yōu)酒蒸工藝為加酒量20%、悶潤2 h、蒸制7 h;黃精酒蒸品中多糖的含量明顯下降，還原糖和總糖的含量明顯增加。

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（收稿日期：2021-08-04 修回日期：2021-11-24）