中華蜜蜂囊狀幼蟲(chóng)病防治方法綜述

唐相友，宋華莉，張小燕，范曉東，石 鵬

（重慶師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，重慶 401331）

蜜蜂是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)，在農(nóng)業(yè)傳花授粉和維持生態(tài)環(huán)境方面發(fā)揮著重要作用[1]。中華蜜蜂（Apis cerana cerana），簡(jiǎn)稱(chēng)中蜂，是我國(guó)特有的蜜蜂種質(zhì)資源，具有善于采集零星蜜粉源等優(yōu)良特性，在我國(guó)廣大山區(qū)均有分布。自2006 年被列入《國(guó)家畜禽遺傳資源保護(hù)名錄》以來(lái)[2]，中華蜜蜂的保護(hù)和利用被日益重視，其整體種群數(shù)量也呈向好趨勢(shì)發(fā)展。但是，長(zhǎng)期以來(lái)以中華蜜蜂囊狀幼蟲(chóng)病為主的病蟲(chóng)危害仍影響著養(yǎng)蜂業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

中蜂囊狀幼蟲(chóng)?。–hinese sacbrood disease,CSBD），簡(jiǎn)稱(chēng)中囊病，是由中蜂囊狀幼蟲(chóng)病毒（Chinese sacbrood virus,CSBV） 引起的高致病的傳染性疾病。自1972 年在我國(guó)廣東省被首次報(bào)道以來(lái)[3]，中囊病逐漸成為危害中蜂的最主要的病毒性疾病。其高致病性、高傳染性使得中囊病迅速蔓延至全國(guó)各地，嚴(yán)重威脅我國(guó)養(yǎng)蜂業(yè)的發(fā)展。

中囊病主要出現(xiàn)在春季和秋季繁殖季節(jié)[4]，易感染幼蟲(chóng)，也能侵染蛹和成蟲(chóng)。感染CSBV 后，幼蟲(chóng)會(huì)產(chǎn)生大量蛻皮液而導(dǎo)致不能化蛹[5]，其中大約有30%的幼蟲(chóng)在封蓋前死亡，70%的幼蟲(chóng)則在封蓋后死亡。成蟲(chóng)染病后會(huì)成為主要的水平傳播者[6]，諸如采集花粉時(shí)病蜂會(huì)將病毒遺留在花朵上導(dǎo)致其他健康蜜蜂感染病毒；感染病毒后的成蟲(chóng)喂食幼蟲(chóng)會(huì)導(dǎo)致幼蟲(chóng)染病死亡等。長(zhǎng)此以往，導(dǎo)致蜂群見(jiàn)蜂不見(jiàn)子、飛逃等[7,8]，造成蜂群覆滅，給中蜂養(yǎng)殖帶來(lái)巨大損失。

鑒于中囊病的危害性大，本文總結(jié)了中囊病的誘發(fā)因素、發(fā)病規(guī)律、表征及防治方法等，以期為中蜂健康高效養(yǎng)殖及科學(xué)防治提供參考。

1 中囊病誘發(fā)因素、發(fā)病規(guī)律與表征

1.1 誘發(fā)因素

中囊病的誘發(fā)因素是多種多樣的，主要包含病毒性感染誘發(fā)和應(yīng)激誘發(fā)[9]。病毒感染是中囊病發(fā)生的最主要因素[9]。SBV 病毒粒子從消化道進(jìn)入體內(nèi)，在中腸大量復(fù)制至一定程度后，破壞蜜蜂中腸黏膜而引發(fā)免疫力下降[10]，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致幼蟲(chóng)細(xì)胞凋亡水平增加[11]。應(yīng)激誘發(fā)主要體現(xiàn)在溫度差異上，Wang 等[12]研究了蜜蜂在低溫脅迫下感染SBV 的死亡差異性，發(fā)現(xiàn)感染SBV 的5 日齡幼蟲(chóng)其死亡率顯著高于感染SBV 的2 日齡幼蟲(chóng)，表明溫度可能是影響感染SBV 的重要因素。

1.2 發(fā)病規(guī)律

中囊病的發(fā)生與氣候、蜜源、飼料等都有關(guān)系[13]。中囊病主要出現(xiàn)在春季和秋季繁殖季節(jié)[4]，繁蜂時(shí)期缺少難以維持蜂群繁殖的飼料，則容易導(dǎo)致群勢(shì)減小，抗病能力減弱。氣候多變也是如此，當(dāng)遭遇低溫寒潮天氣時(shí)，蜂群會(huì)應(yīng)激性聚集抱團(tuán)，邊緣繁育區(qū)幼蟲(chóng)因受凍挨餓，對(duì)病毒的抵抗力下降而染病。

1.3 表征

感染CSBV 的幼蟲(chóng)初期表現(xiàn)為蟲(chóng)體前端下垂，頭部前端1/3 處變得透明，體軀分節(jié)明顯；后期幼蟲(chóng)頭部離開(kāi)巢房壁，并且頭部呈鉤狀，形似“龍船”[14]；幼蟲(chóng)尸體呈囊狀，且無(wú)異味[15]。被感染的幼蟲(chóng)顏色由白色轉(zhuǎn)變成黃色，繼而變成黑褐色[16]，這與由蜂房球菌（Melissococcus pluton） 引起的歐洲幼蟲(chóng)腐臭?。‥uropean foulbrood） 具有明顯區(qū)別。感染歐洲幼蟲(chóng)腐臭病的幼蟲(chóng)呈現(xiàn)乳白或灰白、黃白色，無(wú)光澤[17]。成蟲(chóng)感染CSBV 后無(wú)明顯的癥狀，但潛伏期較長(zhǎng)[18,19]，其壽命會(huì)大幅度縮短[20]，病蜂表現(xiàn)為不護(hù)脾、不采粉，且易在脾面上成堆狀[21]。

2 常規(guī)防治

2.1 蜂場(chǎng)位置選擇與蜂場(chǎng)管理

蜂場(chǎng)位置選擇與科學(xué)化的蜂場(chǎng)管理對(duì)于中囊病的防治具有積極意義。對(duì)于蜂場(chǎng)位置建議選擇在生態(tài)環(huán)境良好的地方，盡量遠(yuǎn)離污染源[22]，例如化工廠、造紙場(chǎng)、豬場(chǎng)、雞場(chǎng)等污染較為嚴(yán)重的地方，減少污染源對(duì)蜜蜂的侵害。王瑞生等[7]認(rèn)為規(guī)模化蜂場(chǎng)的蜂箱位置擺放需要考慮風(fēng)向與光照。最好是春來(lái)需背風(fēng)、向陽(yáng)；夏來(lái)需陰涼、通風(fēng)；冬來(lái)需免受寒風(fēng)侵襲。除此之外，加強(qiáng)蜂場(chǎng)管理也是常規(guī)防治的重要舉措。針對(duì)蜂場(chǎng)、蜂箱、蜂具等相關(guān)設(shè)施、器具需要保持干凈。定期對(duì)蜂場(chǎng)進(jìn)行清掃，清理蜂箱附近的雜物、雜草等，并采用生石灰或者消毒水對(duì)蜂場(chǎng)及相關(guān)蜂用設(shè)備消毒處理。王為城等[16]使用消毒水對(duì)蜂具進(jìn)行沖洗，而后用清水反復(fù)沖洗，最后放在烈日下暴曬，起到了較好的消毒效果。同時(shí)，蜂場(chǎng)管理者的個(gè)人衛(wèi)生也尤為重要，在每次開(kāi)箱前，可使用肥皂清洗雙手進(jìn)行消毒滅菌。

當(dāng)蜂場(chǎng)發(fā)現(xiàn)有輕微感染的蜂群時(shí)，可轉(zhuǎn)移至2.5 km 以外且周?chē)鸁o(wú)其他蜜蜂活動(dòng)的區(qū)域進(jìn)行隔離治療[23]，待蜂群恢復(fù)后方可轉(zhuǎn)移回原蜂場(chǎng)；針對(duì)感染較為嚴(yán)重的蜂群，需將病群、病脾盡快做無(wú)害化處理，例如焚燒、掩埋、冷凍、化蠟等[24-26]，并對(duì)蜂箱等配件進(jìn)行嚴(yán)格消毒，以防止病情蔓延，造成更大的損失。

2.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

蜜蜂是社會(huì)性昆蟲(chóng)，具有一定的個(gè)體免疫和群體免疫能力，具有較強(qiáng)的抗逆性[27,28]。在越冬時(shí)期，蜜蜂結(jié)成蜂團(tuán)并以微弱的生理活動(dòng)度過(guò)冬蟄期[29]。陳世璧等[30]認(rèn)為蜂群不強(qiáng)，蜜蜂數(shù)量減少，會(huì)導(dǎo)致蜂群抵御疾病的能力減弱。而加強(qiáng)飼養(yǎng)管理是強(qiáng)群飼養(yǎng)的重要手段。蜂群的飼養(yǎng)管理應(yīng)簡(jiǎn)化、熟練、精準(zhǔn)、到位[7]。在日常管理中，蜂場(chǎng)管理者應(yīng)盡量減少開(kāi)箱檢查的次數(shù)，多采用箱外觀察，尤其是在越冬時(shí)期。除減少開(kāi)箱次數(shù)外，還應(yīng)注意適當(dāng)保溫，諸如在箱內(nèi)隔板外塞入保溫填充物（干稻草、舊棉絮等）[21,31]，以保證蜂箱內(nèi)溫度。對(duì)于高海拔地區(qū)（如川西高原），同樣也需要適宜保溫。但由于高原地區(qū)晝夜溫差較大，除必要的保溫措施外，還應(yīng)注意使用遮陰法遮擋箱蓋和箱壁，避免陽(yáng)光直射蜂箱。王遂林等[32]對(duì)阿壩中蜂越冬期不同遮陽(yáng)方式的實(shí)驗(yàn)表明，因太陽(yáng)直射導(dǎo)致蜂王不間斷產(chǎn)卵，蜜蜂空飛損耗嚴(yán)重。同時(shí)，養(yǎng)殖蜜蜂過(guò)程中，飼料充足也是必須的，尤其是在春繁、秋繁及越冬時(shí)期。飼糧是保證蜜蜂正常生活的重要保障[33]。因此，選擇優(yōu)質(zhì)的蜂蜜、代用糖、蛋白源更有利于蜜蜂的健康，對(duì)于來(lái)歷不明的飼料應(yīng)慎用。張學(xué)文等[4]發(fā)現(xiàn)在春繁期補(bǔ)充飼喂花粉和橡膠蜂蜜可有效防控中囊病，提高蜂群的抗病力，但無(wú)法根除CSBV。在春繁、秋繁時(shí)期，極大可能地滿(mǎn)足蜂群對(duì)蜜源、粉源的需要[4]，保證正常的食物供應(yīng)，以便于飼養(yǎng)強(qiáng)群；在越冬時(shí)期，對(duì)于弱群蜜蜂，采用合并策略。除此之外，小轉(zhuǎn)地有利于蜂群充分利用優(yōu)質(zhì)蜜粉源，是培養(yǎng)強(qiáng)群的可行方法[34]。

2.3 適時(shí)換王與抗病蜂王選育

抗病選育在凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）[35]、鯉（Cyprinuscarpio）[36]、中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）[37]、水稻（Oryza sativa）[38]等動(dòng)植物中均有廣泛應(yīng)用。中蜂抗病蜂王選育也是防治中囊病的常用方法。亢韋芳等[39]選擇無(wú)病或癥狀輕微的蜂群作為父本和母本選育抗病力強(qiáng)的育種素材。對(duì)于蜂場(chǎng)中存在的患病蜂王應(yīng)及時(shí)更替，更換蜂王后，盡量讓蜂王產(chǎn)2 代子[21]，這樣新出房的蜂群內(nèi)無(wú)病蟲(chóng)，增強(qiáng)了對(duì)中囊病的抵抗能力。2017 年，韓國(guó)研究學(xué)者Nguyen 等[40]通過(guò)收集4 個(gè)不同區(qū)域的東方蜜蜂蜂群，進(jìn)行篩選和人工授精，經(jīng)過(guò)4 個(gè)世代，初步培育出對(duì)囊狀幼蟲(chóng)?。↘orean Sacbrood Virus，KSBV)具有顯著抗性的蜂群。

2.4 斷子防治

中囊病易感對(duì)象一般為蜜蜂幼蟲(chóng)，幼蟲(chóng)體內(nèi)富含有CSBV 所需的營(yíng)養(yǎng)成分[41]。因此，當(dāng)發(fā)現(xiàn)中囊病時(shí)，應(yīng)及時(shí)對(duì)幼蟲(chóng)進(jìn)行處理，以防傳染源擴(kuò)大。斷子[39]有利于工蜂在無(wú)傳染源的情況下徹底清理巢脾。郭力爭(zhēng)等[42]將蜂王扣在囚王籠中，避免產(chǎn)卵以達(dá)到斷子目的。在蜂群斷子期間，需進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)蜂群的管理，保證飼糧的充足，以提高蜂群的抵抗力[39]。

3 藥物防治

3.1 中藥防治

中草藥是天然產(chǎn)物且功能較為廣泛，具有抗菌、消炎、抗病毒等廣泛的藥理作用[9]。一些民間配方也被用于中囊病的防治。郭力爭(zhēng)等[42]使用貫眾、金銀花、甘草，加適宜水煎煮過(guò)濾濃縮至150 g 后，與50%濃度的蜜水混合，每隔一天喂食一次。胡佑志等[14]采用貫眾30 g、金銀花30 g、虎杖20 g、紫草15 g、甘草15 g、青木香10 g，加適宜水煎煮過(guò)濾濃縮至250 mL，后加糖蜜400 g，喂食3～5 d。吳政等[43]使用金銀花、五加皮、板藍(lán)根、半枝蓮，加適量水煎煮后過(guò)濾濃縮，加入適量糖蜜水，可飼喂蜜蜂40 脾左右。除上述所描述中藥材外，也有報(bào)道采用大青葉、菊花、山烏龜?shù)戎兴幗?jīng)煎煮后，與糖蜜水、維生素片混用后飼喂蜜蜂用以防治中囊病[9,44,45]。

3.2 西藥防治

與中藥材的應(yīng)用類(lèi)似，西藥在中囊病的防治中同樣被應(yīng)用。因中囊病是病毒感染所致，養(yǎng)蜂經(jīng)驗(yàn)欠缺者盲目使用抗生素防治，往往效果不佳，甚至可能造成蜂蜜中的藥物殘留[46-48]。針對(duì)于西藥防治，研究者也做了較多測(cè)試，王為城等[16]使用“抗病毒一號(hào)”進(jìn)行中囊病防治，并提醒使用者注意使用劑量。劉守禮等[49]使用嗎啉胍按照每框蜂1 片的劑量，用少量水化開(kāi)后與糖蜜水混合喂蜂，隔天1 次，5 d 為一療程。夏曉翠等[50]按一定比例在糖蜜水中加入鹽酸金剛烷膠粉，飼喂蜂群，3 d 1 次，持續(xù)6 次。楊柳等[51]使用EM液（Effective Microorganisms） 用40%的糖蜜水稀釋50 倍后飼喂蜜蜂，每500 g 稀釋液可喂食10 脾蜜蜂。

4 其他防治

除常規(guī)防治與藥物防治外，隨著生物技術(shù)的高速發(fā)展，研究人員在抗體、腸道菌群、多肽藥物和RNA 干擾等方面也開(kāi)展了大量研究。

4.1 卵黃抗體

單克隆抗體是近年來(lái)研發(fā)的熱點(diǎn)，也是生物制藥重要的一類(lèi)藥物。Sun 等[52]將滅活的CSBV 病毒接種到母雞，以此獲得卵黃抗體，發(fā)現(xiàn)其對(duì)感染CSBV 的蜂群的治療效果明顯，這對(duì)防治蜜蜂CSBV 提供了重要的思路與見(jiàn)解。

4.2 腸道菌群干預(yù)

腸道菌群可以影響宿主營(yíng)養(yǎng)代謝、保持腸道黏膜屏障結(jié)構(gòu)完整性、免疫調(diào)劑和抑制病原菌，進(jìn)行腸道菌群干預(yù)可改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，改善免疫調(diào)節(jié)功能[53]。雷清芝等[54]利用羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri） LP4 探究對(duì)東方蜜蜂成年工蜂存活率、腸道菌群結(jié)構(gòu)和抗菌肽的影響研究表明，飼喂東方蜜蜂成年工蜂后可提高存活率。乳酸菌(LAB)是不形成芽孢的有益細(xì)菌，存在于乳制品（如酸奶） 中[55]。有研究表明，LAB 對(duì)蜜蜂細(xì)菌致病菌有抑制作用[56,57]。Nguyen 等人[58]對(duì)體外培養(yǎng)的健康西方蜜蜂幼蟲(chóng)和感染SBV 的幼蟲(chóng)噴灑酸奶以判斷其療效及對(duì)幼蟲(chóng)的影響，發(fā)現(xiàn)噴灑酸奶后對(duì)消除SBV 的臨床癥狀方面具有較高的成功率，且酸奶對(duì)健康的幼蟲(chóng)無(wú)害。腸道菌群干預(yù)為防治東方蜜蜂CSBV 提供了重要的思路與新的見(jiàn)解。

4.3 多肽藥物

小分子陽(yáng)離子六肽 （short cationic hexapeptides，SP6） 在體外抗菌實(shí)驗(yàn)[59]和中囊病治療實(shí)驗(yàn)[60]中被證實(shí)具有多種生物活性，且具有先天免疫調(diào)節(jié)的功能。沈克飛等人[61]將SP6 溶于糖蜜水中，間隔1 天飼喂，連續(xù)使用9 次，發(fā)現(xiàn)0.1%的SP6 給藥能顯著性地降低感染CSBV 的蜂群幼蟲(chóng)死亡率，防治效果達(dá)到74.48%。

4.4 RNA 干擾

RNAi 是生物天然免疫的主要機(jī)制之一，已廣泛應(yīng)用于各種疾病的治療[9]。史紅霞等[10]通過(guò)喂食dsRNA 使CSBV 的RdRp 下調(diào)85%，對(duì)CSBV 表達(dá)具有一定的抑制作用。除此之外，張鶴等[62]喂食CSBV 衣殼蛋白VP1 的dsRNA，馬躍宇等[63]喂食CSBV 的VP2 蛋白的siRNA 均取得了不錯(cuò)的抑制效果。RNAi 技術(shù)防治蜂群CSBV 具有創(chuàng)新性，但RNAi 技術(shù)的成本較高。

5 展望

目前，研究者對(duì)中囊病的致病機(jī)理已經(jīng)有了較為清晰的認(rèn)知，廣大研究者與養(yǎng)蜂者針對(duì)防治中囊病展開(kāi)了大量的試驗(yàn)與研究，形成了常規(guī)防治、藥物防治以及生物技術(shù)防治等一系列方法。這些方法在一定程度上對(duì)防治中囊病起到了效果。但是，蜜蜂作為社會(huì)性昆蟲(chóng)，群體之力是其種群繁衍的策略，對(duì)于患病的蜂群，單純的藥物干預(yù)對(duì)蜜蜂個(gè)體的毒性不可忽視，即使病癥得以控制，蜜蜂的群勢(shì)也會(huì)被削減。中華蜜蜂是我國(guó)珍貴的本土蜜蜂種質(zhì)資源，對(duì)于中囊病的防治應(yīng)以預(yù)防為主，治療為輔，重視蜜蜂福利，減少藥物的使用，這對(duì)蜜蜂的健康高效養(yǎng)殖以及保障蜂蜜的安全生產(chǎn)均具有積極意義。