‘云田彩桂’組織培養(yǎng)研究

尹原森 郭志海 殷勤 韋慶華 汪成忠

摘 要：通過對‘云田彩桂’不同樹齡植株采集的外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)技術(shù)研究，結(jié)果表明：春季采取‘云田彩桂’3y的幼嫩枝條作外植體較好，這是因?yàn)樵谟讟洚?dāng)年生枝條中所含的有毒有害物質(zhì)及酚類化合物較少，能有效降低褐化率和污染率。最適宜的消毒劑及消毒時間為：75%酒精1min，0.1%的氯化汞溶液消毒10min，成活率達(dá)46.5%。在增殖階段為防止無菌苗褐化及提高增殖系數(shù)，采用MS+6-BA1.0/L+NAA0.1mg/L+Vc 20mg/L的培養(yǎng)基配方，能有效減少褐化率，并提高增殖系數(shù)至2.02。

關(guān)鍵詞：‘云田彩桂’;無菌苗褐化;增殖系數(shù)

中圖分類號 S792.99 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2021）23-0038-02

桂花[Osmanthus fragrans （Thunb.）Lour.]屬木犀科木犀屬的木本香花植物，原產(chǎn)地為中國西南地區(qū)。近年來陸續(xù)選育出新葉色彩變化極為豐富的新優(yōu)品種，而‘云田彩桂’是變異品種一個優(yōu)良品種，小喬木或灌木，作為桂花的新品種，其葉色一年四季變化多樣、精彩紛呈，初春嫩芽為紫紅玫紅，后轉(zhuǎn)為桃紅，進(jìn)而轉(zhuǎn)金黃色至白色，再由中央主葉脈開始向兩邊漸變綠色，直至深綠。在氣候條件適宜的條件下，一年四季不斷有嫩芽冒出，因此整個植珠從上到下五色斑斕、姹紫嫣紅，整個植株的觀葉期超過半年，既是香花植物又是彩葉樹種。其適應(yīng)性較強(qiáng)，能耐長江流域最高氣溫39℃，極端最低氣溫-10℃，耐熱及耐寒性良好，已成為景觀綠化及觀賞樹木界的新寵。

‘云田彩桂’主要是采用扦插嫁接的無性方式進(jìn)行繁殖，但由于插穗數(shù)量有限及嫁接技術(shù)要求較高，繁殖系數(shù)相對較小。為此，本研究采用組織培養(yǎng)的方式進(jìn)行種苗繁殖，加快繁殖速度，以利于優(yōu)良品種的推廣及應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 外植體 選取蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院相城科技園品種圃內(nèi)3y和10y樹齡的‘云田彩桂’，取樹冠外圍、芽體飽滿的當(dāng)年無病蟲害、生長健壯的嫩枝，取材季節(jié)選擇春季，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 外植體滅菌 選取‘云田彩桂’2種樹齡當(dāng)年生的健壯的幼嫩枝條，葉片顏色兩側(cè)呈粉紅色，中間呈青黃綠條狀，剪除葉片保留葉柄，枝條剪成3～4cm的莖段，放入玻璃瓶中，加水和洗衣粉清洗，去除外部的灰塵等雜質(zhì)，葉腋部分用毛刷刷洗，清洗完畢用流水沖洗1h。接種室消毒：均用75%酒精1min，分別用0.1%升汞和2%次氯酸鈉溶液各消毒10、12min和20、25min，用無菌水沖洗6次，將莖段放在無菌的濾紙上，切除葉柄，將莖段切成1～1.5cm的帶1個腋芽的小段，轉(zhuǎn)接于初代培養(yǎng)基MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.1mg/L中，莖段1個/瓶，各接種50瓶，30d后統(tǒng)計成活率。

1.3 繼代培養(yǎng)基的設(shè)計 繼代培養(yǎng)設(shè)置以下6種培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，2/3MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L+活性碳1g/L。每瓶接種2個芽。接種后放置于光照培養(yǎng)室中培養(yǎng)60d后，隨機(jī)抽取10瓶統(tǒng)計相關(guān)數(shù)據(jù)用于分析。

1.4 增殖培養(yǎng)中褐化的處理 在增殖培養(yǎng)基MS+BA1.0/L+NAA0.1mg/L中，分別添加4種濃度的添加劑，分別為活性炭：1g/L、2g/L及Vc：20mg/L、30mg/L，觀察其對褐化及增殖系數(shù)的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒處理對外植體的影響 木本植物消毒效果相較于草本植物要難些，故采用2種消毒劑、不同消毒時間進(jìn)行比較，其結(jié)果見表1。由表1可知，‘云田彩桂’的消毒劑最好是用氯化汞，消毒時間10min，成活率高達(dá)40.5%，但使用氯化汞的污染率雖然低于次氯酸鈉，但其褐化率均高于次氯酸鈉消毒劑。取‘云田彩桂’2種樹齡（3y和10y）的當(dāng)年生健壯的幼嫩枝條為外植體，均用75%酒精1min，0.1%的氯化汞溶液消毒10min，結(jié)果見表2。由表2可知，3y采的外植體初代成活率優(yōu)于10y，其污染率和褐化率均低于10y的。

2.2 不同植物生長調(diào)節(jié)劑對增殖系數(shù)的影響 由表3可知，6-BA與NAA配合的比例濃度是決定芽苗增殖的關(guān)鍵。其中，以4號培養(yǎng)基的比例配合最好，增殖系數(shù)為1.96，芽體也較健壯。在細(xì)胞分裂素濃度較低的培養(yǎng)基中芽體萎黃，而在較高濃度的培養(yǎng)基中，芽體周圍愈傷組織出現(xiàn)白色排列疏松的愈傷組織，最后芽體也逐漸發(fā)白并無生命力。

2.3 增殖培養(yǎng)中褐化的試驗(yàn) 在增殖培養(yǎng)中，褐化一直存在，且影響苗體的生長及增殖速率，因此在4號繼代培養(yǎng)基上添加不同濃度的Vc及活性炭，能有效控制褐化。由表4可知，添加Vc及活性炭均能降低褐化率，但對無菌芽的增殖與分化有影響，添加20mg/L的Vc增殖系數(shù)高于其他濃度添加劑的培養(yǎng)基，而且葉色及芽體健壯度較好，平均增殖系數(shù)達(dá)2.02，培養(yǎng)60d后，芽體高度能長到2～3cm。

3 小結(jié)與討論

‘云田彩桂’外植體采取3y的幼嫩枝條較好，由于在幼樹當(dāng)年生枝條中，所含的有毒有害物質(zhì)及酚類化合物較少，因而能有效降低褐化率和污染率。用0.1%的氯化汞溶液消毒10min，效果較好，成活率達(dá)46.5%。在增殖階段為防止無菌苗褐化及提高增殖系數(shù)，采用MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+Vc 20mg/L的培養(yǎng)基配方，能有效減少褐化率，并提高增殖系數(shù)至2.02，為‘云田彩桂’的工廠生產(chǎn)和種苗快速繁殖提供了保障。

參考文獻(xiàn)

[1]易劍雄，“云田彩桂”新品種選育、繁殖技術(shù)研究.湖南省，湖南省株洲市石峰區(qū)云田苗木基地，2008-12-18.

[2]柳群.云田彩桂[J].花木盆景（花卉園藝），2014（02）：5.

[3]何海燕，何小弟，董筱昀.北美楓香“秋霞紅”組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究[J].江蘇林業(yè)科技，2014，41（05）：23-26.

（責(zé)編：張宏民）