HOXD9和PTEN在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義

劉秀華，楊韻，杜永媚

廈門市海滄醫(yī)院病理科 (福建廈門 361000)

隨著對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制的深入研究，分子靶向治療有望成為腫瘤的根治方法，并越來越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，且尋找合適的靶點(diǎn)已經(jīng)成為腫瘤研究的重點(diǎn)。有研究證明，HOXD9在人類多種腫瘤中呈高表達(dá)[1-3]，同時(shí)HOXD9的高表達(dá)還可能與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及進(jìn)展密切相關(guān)[4-5]。P13K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路在多種腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，其下游重要的負(fù)調(diào)控因子PTEN在多種腫瘤中表達(dá)缺失[6]，與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7]。鑒于此，本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HOXD9和PTEN在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，探討其臨床病理意義及在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過程中的作用，以期為結(jié)直腸癌的分子靶向治療提供新的靶點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1一般材料

收集2015年1月至2020年5月我院病理科存檔的正常結(jié)直腸組織(結(jié)直腸癌切除標(biāo)本的陰性切緣)30例和浸潤(rùn)至結(jié)直腸漿膜層癌組織154例[年齡46～79歲；男86例，女68例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移79例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例；病理分級(jí)(WHO 2010版結(jié)直腸癌分級(jí))，Ⅰ級(jí)21例，Ⅱ級(jí)89例，Ⅲ級(jí)44例]。所有組織病例在取材前均未接受放化療、免疫及分子靶向治療。

1.2試劑

濃縮型兔抗人HOXD9單克隆抗體(購(gòu)自Bioss公司)、濃縮型鼠抗人PTEN單克隆抗體(購(gòu)自Bioss公司)、EnVision免疫組化反應(yīng)試劑盒(購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司)。

1.3方法

選取組織切片，于顯微鏡下定位，在對(duì)應(yīng)蠟塊位置采集芯片組織并放置于芯片模具內(nèi)，2次包埋后制成組織芯片微陣列，3 μm連續(xù)切片，采用免疫組織化學(xué)EnVision兩步法染色，抗HOXD9一抗工作濃度為1︰500，抗PTEN工作濃度為1︰300，PBS代替一抗做陰性對(duì)照，嚴(yán)格按照試劑盒說明書完成染色步驟。

1.4結(jié)果判斷

HOXD9陽(yáng)性定位于細(xì)胞質(zhì)中，出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，每例組織隨機(jī)計(jì)數(shù)500個(gè)以上細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%記為陰性，≥10%記為陽(yáng)性；PTEN陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，結(jié)果判讀同上。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

HOXD9和PTEN免疫組化染色如圖1～2所示。HOXD9在正常結(jié)直腸組織中陽(yáng)性表達(dá)率低于浸潤(rùn)至結(jié)直腸漿膜層癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；組織分級(jí)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HOXD9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1～2。PTEN在正常結(jié)直腸組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于浸潤(rùn)至結(jié)直腸漿膜層癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；組織分級(jí)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PTEN在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1～2。HOXD9的表達(dá)與PTEN的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-3.128，P<0.05)，見表3。

表1 HOXD9和PTEN在結(jié)直腸癌中的表達(dá)

表2 HOXD9和PTEN在浸潤(rùn)至結(jié)直腸漿膜層癌組織的表達(dá)

表3 HOXD9和PTEN在結(jié)直腸癌中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

3.1HOXD9的表達(dá)與結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系

本研究結(jié)果顯示，HOXD9在正常結(jié)直腸組織中陽(yáng)性表達(dá)低于浸潤(rùn)至結(jié)直腸漿膜層癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；組織分級(jí)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HOXD9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明HOXD9參與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程。Liu等[8]通過組織實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)等體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，相較于正常結(jié)直腸組織，HOXD9在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)，且與組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，其高表達(dá)提示預(yù)后差。Lin等[4]同樣通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，HOXD9在胃癌組織中呈高表達(dá)，通過敲除HOXD9可以有效地抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果均相符，表明HOXD9參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程，其高表達(dá)能促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移并預(yù)示患者預(yù)后不良。

3.2PTEN的表達(dá)與結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系

隨著臨床對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制的深入研究，有研究表明，P13K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路在多種腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等過程中發(fā)揮重要作用，其下游重要的負(fù)調(diào)控因子PTEN在多種腫瘤中表達(dá)缺失，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[9]。本研究結(jié)果顯示，PTEN在正常結(jié)直腸組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于浸潤(rùn)至結(jié)直腸漿膜層癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；組織分級(jí)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PTEN在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與萬(wàn)焱華等[10]研究結(jié)果相似，表明PTEN的表達(dá)抑制腫瘤的分化、侵襲及轉(zhuǎn)移過程。

3.3HOXD9與PTEN的相關(guān)性分析

腫瘤的發(fā)生及發(fā)展是多基因參與、多步驟協(xié)同完成的過程。本研究結(jié)果顯示，HOXD9的表達(dá)與PTEN的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，表明HOXD9的高表達(dá)抑制了PTEN的功能，進(jìn)而促進(jìn)癌組織的侵襲、轉(zhuǎn)移。但HOXD9在P13K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路中如何抑制PTEN的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移還需分子生物學(xué)的進(jìn)一步研究。

綜上所述，HOXD9、PTEN在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，并且兩者相互作用促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，提示HOXD9可作為結(jié)直腸癌治療的潛在靶點(diǎn)。