卡式微柱凝膠技術(shù)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病檢出陽性率的影響

王巖

(項(xiàng)城市第一人民醫(yī)院輸血科， 河南 周口 466200)

新生兒同種免疫性溶血病為新生兒常見病，其發(fā)生是由于母嬰血型不合發(fā)生免疫性溶血，主要發(fā)生在Rh血型、ABO血型，以ABO最常見，臨床表現(xiàn)為肝脾腫大、黃疸、貧血、水腫等，若治療不及時(shí)，則可引發(fā)膽紅素腦病，發(fā)生不可逆性神經(jīng)損傷，對(duì)新生兒生長發(fā)育及身體健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響[1-3]。臨床對(duì)同種免疫性溶血病早期進(jìn)行準(zhǔn)確診斷并采取針對(duì)性治療措施可降低膽紅素腦病發(fā)生率，提高治療效果[4]。既往針對(duì)同種免疫性溶血病臨床多通過試管檢測(cè)法對(duì)患兒血液進(jìn)行檢測(cè)，其步驟繁瑣，耗時(shí)較長，且在檢查過程中受到的干擾因素較多，無法確保檢測(cè)準(zhǔn)確性[5]?？ㄊ轿⒅z技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單迅速、標(biāo)本用量少、敏感性高、結(jié)果判斷容易等優(yōu)勢(shì)，對(duì)疾病診斷具有積極意義[6]。本文選擇本院269例疑似同種免疫性溶血病新生兒作為研究對(duì)象，旨在探究卡式微柱凝膠技術(shù)的應(yīng)用效果，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2018年10月至2020年12月疑似同種免疫性溶血病新生兒269例作為研究對(duì)象，其中女125例，男144例，日齡1～23 d，平均(12.36±4.32)d；體質(zhì)量2527～4236 g，平均(3354.17±124.87)g；119例A型，150例B型。研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有同種免疫性溶血病新生兒均符合《胎兒新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)專家共識(shí)》[7]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；所有患兒生命體征平穩(wěn)，意識(shí)清醒；均存在不同程度黃疸、貧血、肝脾大等癥狀，母親血型均為O型；均采用卡式微柱凝膠技術(shù)、傳統(tǒng)試管技術(shù)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)；家屬均知情本研究，簽署同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：重要器官功能障礙；先天性畸形、腦癱、心臟??；存在輸血史、換血史；合并嚴(yán)重感染性疾病。

1.3 方法

1.3.1 試劑、儀器

安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司提供的大容量低速離心機(jī)(KDC-1044L)、戴安娜全自動(dòng)血型儀、戴安娜公司提供的新生兒ABO凝膠卡(DG GEL Newborn)、戴安娜公司提供的抗人球蛋白卡(DG Gel Coombs)、上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供的標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞試劑、上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供的抗人球蛋白試劑、瑞士DiaMed公司提供的37 ℃恒溫孵育箱、雙鶴藥業(yè)公司提供的0.9%氯化鈉溶液。

1.3.2 卡式微柱凝膠技術(shù)

抽取約3 mL靜脈血置于內(nèi)含乙二胺四乙酸的抗凝管內(nèi)，搖勻后進(jìn)行離心(轉(zhuǎn)速3000 r/min，時(shí)間10 min，半徑8 cm)，分離血漿后，采用三洗紅細(xì)胞將紅細(xì)胞進(jìn)行紅細(xì)胞懸液制備，完成制備后，加入新生兒ABO凝膠卡并實(shí)施離心，再對(duì)樣本中血型、直接抗人球蛋白試驗(yàn)觀察、記錄；檢測(cè)完成后將血清、紅細(xì)胞放散液加入標(biāo)注A、B、O孔抗人球凝膠卡中，再將標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞試劑滴入對(duì)應(yīng)抗人球凝膠卡中，對(duì)其抗體放散及抗體游離情況實(shí)施分析、記錄。

1.3.3 傳統(tǒng)試管檢測(cè)技術(shù)

抽取約3 mL靜脈血置于內(nèi)含乙二胺四乙酸的抗凝管內(nèi)，搖勻后進(jìn)行離心(轉(zhuǎn)速3000 r/min，時(shí)間10 min，半徑8 cm)，采用0.9%氯化鈉溶液對(duì)血液樣本中紅細(xì)胞進(jìn)行反復(fù)清洗3次，配制有效懸液，將1滴紅細(xì)胞懸液加入到含有2滴抗人球蛋白試劑試管中，然后離心(轉(zhuǎn)速2000 r/min，時(shí)間1 min，半徑8 cm)處理，觀察記錄抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果；標(biāo)記相關(guān)試管，再向試管內(nèi)加入紅細(xì)胞試劑，再加入離心處理的患兒血清，置于37℃環(huán)境下靜置孵育1 h，培養(yǎng)完成后，采用0.9%氯化鈉溶液清洗試管，清洗完畢后將抗人球蛋白試劑加入并離心(轉(zhuǎn)速2000 r/min，時(shí)間3 min，半徑8 cm)，結(jié)束后由檢測(cè)人員對(duì)抗體放散、抗體游離結(jié)果實(shí)施分析、記錄。

1.4 評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)均為陽性則可確診為同種免疫性溶血??；放散試驗(yàn)為陽性即可確診；抗體游離、直接抗人球蛋白均為陽性可確診；只有抗體游離或直接抗人球蛋白陽性則為疑似；三者均為陰性即可排除同種免疫性溶血病。

1.5 觀察指標(biāo)

分析臨床檢查結(jié)果，比較兩種檢查方式行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)的陽性檢出率。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床檢查結(jié)果

269例疑似同種免疫性溶血病新生兒經(jīng)檢查結(jié)果確診為同種免疫性溶血病79例，陽性率為29.37%，其中A型43例，B型36例。見表1。

表1 臨床檢查結(jié)果(n)

2.2 兩種檢查方式陽性檢出率比較

采用卡式微柱凝膠技術(shù)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病檢出率均高于傳統(tǒng)試管檢測(cè)技術(shù)(P<0.05)。見表2。

表2 兩種檢查方式陽性檢出率比較[n(%)]

3 討論

新生兒同種免疫性溶血病是由于在遺傳過程中胎兒從父親基因中繼承部分母親不具備的紅細(xì)胞抗原，或新生兒與母親不合所致，當(dāng)胎兒紅細(xì)胞從臍帶流入母親身體內(nèi)，母體會(huì)發(fā)生免疫性抗體，這一抗體再經(jīng)過胎盤或臍帶對(duì)胎兒紅細(xì)胞產(chǎn)生影響，進(jìn)而出現(xiàn)貧血、肝臟腫大、黃疸、水腫等癥狀，嚴(yán)重者可造成死亡[8-9]。為保證胎兒健康，早發(fā)現(xiàn)、早確診溶血病并予以針對(duì)性治療可減少相關(guān)并發(fā)癥發(fā)生，改善預(yù)后效果。

針對(duì)新生兒同種免疫性溶血病，臨床多通過傳統(tǒng)試管檢測(cè)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行診斷，其在檢查過程中需反復(fù)清洗血液樣本中紅細(xì)胞，且步驟較為繁瑣，易受到人為操作影響，導(dǎo)致檢查準(zhǔn)確度較低，影響疾病早期治療[10]。近年來，隨科學(xué)技術(shù)水平發(fā)展，我國臨床檢測(cè)技術(shù)也得到了發(fā)展、提升，卡式微柱凝膠技術(shù)逐漸應(yīng)用于新生兒同種免疫性溶血病的診斷中，可有效提高其檢測(cè)效率，提升診斷準(zhǔn)確度；檢測(cè)原理上卡式微柱凝膠技術(shù)通過應(yīng)用稀釋液，進(jìn)而使凝膠配置工作有效開展，配置過程中，若抗體與紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，其反應(yīng)產(chǎn)物可在凝膠中聚集或在凝膠表面漂浮，便于檢測(cè)人員觀察檢測(cè)結(jié)果；若抗體與紅細(xì)胞無反應(yīng)結(jié)合，則會(huì)沉積在凝膠底部，以此判斷患兒為陰性[11]。此外，在卡式微柱凝膠技術(shù)再通過合理使用抗人球蛋白試劑可進(jìn)一步提升試驗(yàn)敏感度。對(duì)于新生兒同種免疫性溶血病的診斷中常用方式有抗體放散、抗體游離、直接抗人球蛋白試驗(yàn)等，其中抗體放散試驗(yàn)通過放散將附著在紅細(xì)胞上抗體放散出，再與相應(yīng)抗原結(jié)合表現(xiàn)為陽性，說明紅細(xì)胞被母體抗體致敏，以此進(jìn)行判斷，其靈敏度較高；直接抗人球蛋白試驗(yàn)可檢測(cè)紅細(xì)胞是否由IgG抗體產(chǎn)生反應(yīng)，但陽性率較低，這是由于新生兒發(fā)育尚未完全，紅細(xì)胞上抗原較少，造成抗體吸附也較少，難以實(shí)現(xiàn)凝集反應(yīng)，故陽性率較低；抗體游離試驗(yàn)陽性與母體內(nèi)IgG抗體進(jìn)入胎兒體內(nèi)有關(guān)，其陽性可表明患兒存在同種免疫性溶血病，但由于游離抗體在患兒體內(nèi)存在時(shí)間較短，故其準(zhǔn)確度較差[12-13]。因此為避免漏診情況發(fā)生，臨床多將3項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行綜合判斷，同時(shí)為防止樣本抗凝效果不佳出現(xiàn)纖維蛋白進(jìn)而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，臨床工作人員需對(duì)標(biāo)本質(zhì)量嚴(yán)格把關(guān)。本文中269例疑似同種免疫性溶血病新生兒經(jīng)檢查結(jié)果確診為同種免疫性溶血病79例，陽性率為29.37%，分別采用卡式微柱凝膠技術(shù)和傳統(tǒng)試管檢測(cè)法行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)，結(jié)果顯示，采用卡式微柱凝膠技術(shù)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)、抗體游離試驗(yàn)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病檢出率均高于傳統(tǒng)試管檢測(cè)技術(shù)(P<0.05)，可見采用卡式微柱凝膠技術(shù)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病進(jìn)行檢查可提高檢出率，可為臨床治療方案制定提供參考，進(jìn)而改善預(yù)后效果。

綜上所述，采用卡式微柱凝膠技術(shù)對(duì)新生兒同種免疫性溶血病進(jìn)行檢查可提高檢出率，可為臨床治療方案制定提供參考，進(jìn)而改善預(yù)后效果。