功能性便秘患者腸道菌群分布特點(diǎn)

卜 佳，榮 芳（通訊作者），榮雨露，溫娟娟

（1 山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院 山西 大同 037009）

（2 大同市第五人民醫(yī)院消化科 山西 大同 037009）

功能性便秘（FC）是一種常見的消化系統(tǒng)功能性疾病，臨床檢查無消化道器質(zhì)性病變，患者出現(xiàn)糞便干結(jié)、排便困難、排便次數(shù)減少等癥狀，以60 歲以上老年人最為高發(fā)，發(fā)病率約為10%～20%[1]。FC 病程長，反復(fù)發(fā)作，長期發(fā)展可誘發(fā)結(jié)腸癌、心腦血管疾病等，嚴(yán)重影響患者健康。目前，臨床對FC 的發(fā)病機(jī)制尚無統(tǒng)一定論，一般包括胃腸功能動(dòng)力不足、腸道菌群紊亂、內(nèi)臟感覺神經(jīng)障礙等，其中，腸道菌群紊亂是導(dǎo)致FC 的主要原因[2]。腸道菌群分為有益菌和有害菌2 個(gè)部分，正常情況下2 個(gè)菌群能夠維持平衡，以厭氧菌為主的腸道原籍菌（如雙歧桿菌、乳酸桿菌），可借助腸黏膜固有屏障和免疫系統(tǒng)，防止外籍菌的黏附。當(dāng)平衡被打破，有益菌大量減少，有害菌大量繁殖，可引發(fā)FC[3]。因此，腸道菌群紊亂是FC 的重要發(fā)病原因，研究FC 與腸道菌群之間的關(guān)系至關(guān)重要。本文分析FC 的腸道菌群變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

將2020 年1 月—2021 年6 月我院消化內(nèi)科治療的90 例FC 患者作為觀察組，男48 例，女42 例，年齡25 ～78 歲，平均年齡（48.6±11.2）歲；將同期90 例健康體檢者作為對照組，男47 例，女43 例，年齡23 ～76 歲，平均年齡（48.1±10.9）歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有觀察組患者均確診為FC，至少25%的排便費(fèi)力及不盡感、排便有肛門梗阻感和堵塞感、便質(zhì)為干球糞或硬糞、需要手法輔助排便，每周排便＜3 次，癥狀持續(xù)≥6 個(gè)月，經(jīng)B 超、CT、腸鏡等檢查無腸道器質(zhì)性病變，血生化檢查肝腎功能、電解質(zhì)、血常規(guī)均正常；排除標(biāo)準(zhǔn)：近3個(gè)月內(nèi)使用過抗生素及其他可導(dǎo)致便秘的藥物、合并腸道器質(zhì)性病變、嚴(yán)重內(nèi)分泌和代謝性疾病等。

1.2 方法

兩組分別留取新鮮糞便樣本，采用16 S rRNA 細(xì)菌檢測技術(shù)鑒定腸道菌群。將新鮮糞便200 mg 置于無菌離心管中，采用Powerfecal DNA Isolation K i 試劑盒，進(jìn)行基因組DNA 抽提，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA。根據(jù)乳桿菌、雙歧桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌的16 S rDNA 基因序列設(shè)計(jì)PCR 引物，進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)[4]。反應(yīng)體系共20 FL，上、下游引物各1 μL，反應(yīng)共40 個(gè)循環(huán)，將擴(kuò)增產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，AxyPrep DNA 凝膠回收試劑盒（AXYGEN 公司）切膠回收PCR 產(chǎn)物，Tris-HCl 洗脫，2%瓊脂糖電泳檢測進(jìn)行純化回收，測定純化產(chǎn)物吸光度值及濃度，換算為各標(biāo)準(zhǔn)品1 yL 的拷貝數(shù)用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用系統(tǒng)軟件自動(dòng)分析循環(huán)閾值（Ct）與標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算乳桿菌、雙歧桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌的拷貝數(shù)，結(jié)果用lg CFU/g 濕便表示[5]。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄雙歧桿菌、乳桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌的數(shù)量；統(tǒng)計(jì)放線菌門、變形菌門相對豐度；將觀察組分為輕、中度（50 例）、重度（40 例），分析雙歧桿菌、乳桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌的數(shù)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率[n（%）]表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組腸道菌群數(shù)量比較

觀察組雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量均顯著低于對照組，大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌數(shù)量顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組腸道菌群數(shù)量比較（± s, lg CFU/g）

表1 兩組腸道菌群數(shù)量比較（± s, lg CFU/g）

組別 例數(shù)雙歧桿菌乳桿菌大腸埃希菌觀察組 908.46±0.928.09±0.858.67±0.79對照組 909.59±0.989.02±0.947.24±0.72 t 3.1063.0723.014 P＜0.05＜0.05＜0.05組別 例數(shù)梭桿菌腸球菌觀察組 9010.01±0.927.96±1.14對照組 907.70±0.866.83±1.03 t 4.0133.175 P＜0.05＜0.05

2.2 兩組放線菌門、變形菌門相對豐度比較

觀察組放線菌門相對豐度顯著高于對照組，而變形菌門相對豐度顯著低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組放線菌門、變形菌門相對豐度比較（± s）

表2 兩組放線菌門、變形菌門相對豐度比較（± s）

組別例數(shù)放線菌門變形菌門觀察組900.06±0.020.05±0.02對照組900.01±0.000.14±0.05 t 3.0523.418 P＜0.05＜0.05

2.3 觀察組中不同病情嚴(yán)重程度的腸道菌群數(shù)量比較

輕、中度患者的雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量均明顯高于重度患者，大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌數(shù)量明顯低于重度患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 觀察組中不同病情嚴(yán)重程度的腸道菌群數(shù)量比較（± s, lg CFU/g）

表3 觀察組中不同病情嚴(yán)重程度的腸道菌群數(shù)量比較（± s, lg CFU/g）

病情嚴(yán)重程度 例數(shù)雙歧桿菌乳桿菌大腸埃希菌輕、中度508.67±0.908.22±0.877.76±0.79重度407.78±0.827.49±0.768.82±0.81 t 3.0793.0243.148 P＜0.05＜0.05＜0.05病情嚴(yán)重程度 例數(shù)梭桿菌腸球菌輕、中度509.89±0.889.80±1.12重度4010.72±0.9310.69±1.24 t 3.0653.073 P＜0.05＜0.05

3.討論

目前，F(xiàn)C 患者腸道微生態(tài)情況日益受到臨床關(guān)注。臨床發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)C 不僅與腸道動(dòng)力、生理功能改變、機(jī)體解剖結(jié)構(gòu)等有關(guān)，而且與腸道微生態(tài)紊亂密切相關(guān)。正常情況下，腸道內(nèi)的有益菌和有害菌能維持平衡，相互制約，維持腸道功能的正常運(yùn)轉(zhuǎn)[6]。當(dāng)腸道功能發(fā)生異常，有益菌與有害菌之間的平衡被打破，可明顯減少有益菌數(shù)量，增加有害菌數(shù)量，導(dǎo)致腸道菌群紊亂。臨床研究證實(shí)，腸道菌群失調(diào)可破壞腸道動(dòng)力，而恢復(fù)腸道菌群平衡有助于改善腸道動(dòng)力，減少便秘的發(fā)生[7]。這主要是由于部分菌株的代謝產(chǎn)物，如短鏈脂肪酸，二氧化碳、甲烷等氣體，可刺激腸道蠕動(dòng)，降低腸道內(nèi)pH 值，增加腸道平滑肌運(yùn)動(dòng)幅度，縮短腸道轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間。因此，研究FC 與腸道菌群的關(guān)系有重要的臨床意義。

雙歧桿菌和乳桿菌是主要的有益菌。雙歧桿菌具有增強(qiáng)人體免疫、促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收、抗感染、抗腫瘤、清除內(nèi)毒素等作用，可抑制有害菌的生長繁殖及酵解，直接刺激腸道蠕動(dòng)，加快糞便在腸道內(nèi)的推進(jìn)速度。并能促進(jìn)多種維生素的合成，提高糖類、蛋白質(zhì)的吸收及代謝能力，改善便秘癥狀。某些雙歧桿菌合成的小分子量親脂性分子還具有抗菌活性，發(fā)揮殺滅細(xì)菌的作用。乳桿菌的菌群分類十分復(fù)雜，與健康關(guān)系密切。乳桿菌可直接抑制有害菌的生長繁殖，增加有益菌數(shù)量，減少內(nèi)毒素的產(chǎn)生，促進(jìn)腸胃蠕動(dòng)，強(qiáng)化胃腸道功能。同時(shí)，乳桿菌在腸道內(nèi)發(fā)酵可產(chǎn)生維生素B 族，增強(qiáng)機(jī)體健康。

腸球菌、腸桿菌屬于中性菌，具有雙重作用，正常情況下對機(jī)體有益，若增殖失控或轉(zhuǎn)移到其他部位，可引發(fā)諸多問題。這類細(xì)菌以糞便為食物，增殖失控可使腸道內(nèi)有害菌大量聚集，使便質(zhì)干燥、變硬，最終引發(fā)便秘。梭桿菌是一種厭氧芽孢菌，是常見有害菌，可在腸道內(nèi)分解蛋白質(zhì)，產(chǎn)生氨、胺類、吲哚等有害物質(zhì)，可破壞腸道健康。大腸埃希菌是常見致病菌，其數(shù)量增加，也表明腸道內(nèi)有害菌明顯增加，可抑制有益菌的生長繁殖，造成腸道菌群紊亂。

本文結(jié)果顯示，觀察組雙歧桿菌、乳桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌數(shù)量均與對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步證實(shí)了FC 患者存在腸道菌群紊亂，而針對性使用微生態(tài)制劑治療能促進(jìn)腸道菌群恢復(fù)平衡，改善腸道動(dòng)力，治療FC。

綜上所述，F(xiàn)C 的腸道菌群紊亂，需要行微生態(tài)制劑治療以恢復(fù)腸道菌群平衡。