黃瓜細(xì)菌性角斑病研究進(jìn)展

彭月 顧興芳 張圣平 李寶聚 謝學(xué)文 薄凱亮 董邵云 苗晗

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，北京 100081）

黃瓜是人們生活中常見(jiàn)的具有豐富營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的一種蔬菜，近年來(lái)隨著人們對(duì)黃瓜的需求量日益增加，設(shè)施黃瓜的栽培面積越來(lái)越大。早在20 世紀(jì)50 年代，我國(guó)就有黃瓜細(xì)菌性角斑病發(fā)生的報(bào)道（方仲達(dá)和俞大紱，1956），該病害主要發(fā)生在東北、華中和華北等地區(qū)，病害發(fā)生嚴(yán)重時(shí)，病株率可達(dá)到100%，使黃瓜減產(chǎn)大半，甚至絕收。我國(guó)對(duì)細(xì)菌性角斑病的研究起步較晚，尤其是關(guān)于黃瓜抗細(xì)菌性角斑病的分子生物學(xué)研究甚少，本文通過(guò)對(duì)該病害的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為黃瓜細(xì)菌性角斑病病原菌鑒定與檢測(cè)、抗性鑒定、培育高抗品種等方面提供理論依據(jù)。

1 病原菌

1.1 病原菌鑒定

20 世紀(jì)80 年代末期，孫福在和何禮遠(yuǎn)（1988）對(duì)從我國(guó)3個(gè)不同省市的黃瓜病株上分離出來(lái)的病菌進(jìn)行致病性測(cè)定、細(xì)菌革蘭氏染色反應(yīng)、血清學(xué)反應(yīng)和生理生化特性等鑒定，最終確定黃瓜細(xì)菌性角斑病是由丁香假單胞菌黃瓜角斑病致病變種（Pseudomonas syringaepv.lachrymans，簡(jiǎn)寫為Psl）引起的。而后有學(xué)者從黃瓜和甜瓜上分離到細(xì)菌性角斑病菌株，經(jīng)鑒定同為Psl（Kritzman &Zutra，1983；金潛和徐興國(guó)，1991）。張吉光等（2010）采用16S rDNA 系統(tǒng)進(jìn)化的方法再次驗(yàn)證了黃瓜細(xì)菌性角斑病是由Psl引起的，并補(bǔ)充了該病原菌的生物學(xué)特性。

伊朗學(xué)者Parizi 從兩個(gè)地區(qū)的黃瓜大棚中分別分離出11 株和14 株黃瓜細(xì)菌性角斑病病株，進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測(cè)后確定病原菌為Psl，兩個(gè)地區(qū)分離到的病原菌在表型特征和生化特征上相似，Psl菌株之間的地理來(lái)源無(wú)相關(guān)性（Parizi &Taghavi，2015）。波蘭學(xué)者S?omnicka 等（2015a）從不同葫蘆科作物中收集了22 個(gè)丁香假單胞菌菌株，其中有9 個(gè)來(lái)自黃瓜葉片，然后利用多位點(diǎn)序列分型（multi-locus sequence typing，MLST），核糖rDNA 內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（internaltranscribed spacer 1，ITS1），細(xì)菌基因組重復(fù)序列PCR 技術(shù)（rep-PCR）等方法進(jìn)行病原菌分類鑒定，將菌株分為4 個(gè)組，經(jīng)過(guò)測(cè)序和BLAST 比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，利用MLST 技術(shù)進(jìn)行菌株分組的結(jié)果與基于致病性試驗(yàn)得到的結(jié)果較為一致。

孟祥龍（2017）采集了我國(guó)6 個(gè)省市的樣本，共獲得125 株病原菌，首次發(fā)現(xiàn)引起我國(guó)黃瓜細(xì)菌性流膠病的病原菌有兩種，分別為Psl和胡蘿卜軟腐果膠桿菌巴西亞種（Pectobacterium carotovorumsubsp.brasiliense，簡(jiǎn)寫為Pcb）。Psl占所有病原菌的66%，是引起黃瓜流膠現(xiàn)象的主要原因，而Pcb會(huì)引起黃瓜細(xì)菌性莖軟腐?。浑m然許多丁香假單胞菌菌株已經(jīng)被確定，但迄今為止，只有少數(shù)幾種致病菌菌株的基因組被測(cè)序。S?omnicka 等（2018a）研究了Psl菌株814/98 的基因組序列，發(fā)現(xiàn)其基因組大小為6.58 Mb，CG 堿基含量為57.97%。該基因組共鑒定出6 024 個(gè)編碼蛋白質(zhì)的基因和92 個(gè)編碼RNA 的基因，發(fā)現(xiàn)了3 個(gè)特殊的質(zhì)粒和24 個(gè)Ⅲ型效應(yīng)蛋白。

研究表明Psl除侵染黃瓜外，還可侵染甜瓜、西瓜等，引起葉斑、角斑等癥狀。而在葫蘆科植物中，黃瓜發(fā)病癥狀表現(xiàn)最明顯。張昕等（2001）從新疆北部的哈密瓜生產(chǎn)區(qū)采集分離純化菌株，發(fā)現(xiàn)侵染葉片的病原菌為Psl，但侵染果實(shí)的病原菌可能還包括果斑菌（Acidororax avenaesubsp.citrulli），證明侵染葉片和果實(shí)的病原菌并不完全是同一個(gè)。李亞利（2006）的試驗(yàn)結(jié)果表明甜瓜細(xì)菌性葉斑病菌與西瓜細(xì)菌性果斑病菌的寄主一致，并且判定在甘肅省河西地區(qū)的甜瓜細(xì)菌性葉斑病病原菌主要是Psl；高潤(rùn)蕾（2009）從內(nèi)蒙古的哈密瓜細(xì)菌性葉斑病的葉片上分離菌株，回接后確定其為Psl。上述學(xué)者將從瓜類的病葉上分離出的病菌均鑒定為Psl，但后續(xù)有其他學(xué)者提出不同的見(jiàn)解，代園鳳（2013）發(fā)現(xiàn)黃瓜株系和甜瓜株系上的丁香假單胞菌在致病性上存在差異，進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析和多重序列比較分析后，證明2 種分離物在遺傳上明顯存在差異，這2 個(gè)株系上的致病菌很可能為不同致病變種，建議將甜瓜株系單獨(dú)命名為丁香假單胞菌甜瓜致病變種。

1.2 危害癥狀

細(xì)菌性角斑病在黃瓜的苗期和成株期均可發(fā)病，危害黃瓜的葉片、莖和果實(shí)等部位。該病的發(fā)病癥狀與霜霉病極其相似，表型鑒定時(shí)需仔細(xì)辨認(rèn)。苗期發(fā)病時(shí)，子葉會(huì)出現(xiàn)黃褐色水浸狀的斑點(diǎn)，后期斑點(diǎn)面積逐漸變大連成片，最終導(dǎo)致葉片干枯、幼苗死亡；成株期發(fā)病時(shí)，葉片初期會(huì)出現(xiàn)黃色圓形小斑點(diǎn)，后期圓形斑點(diǎn)由于受葉脈限制而發(fā)展成為多角形褐色斑點(diǎn)。濕度大時(shí)被害部位產(chǎn)生乳白色菌膿，病斑變透明并在后期嚴(yán)重時(shí)穿孔，果實(shí)表面產(chǎn)生水珠狀菌膿并伴有臭味（Dessert et al.，1982；陳明和趙永波，2010；李寶聚和李煥玲，2012；劉燕妮 等，2018）。

1.3 發(fā)病規(guī)律

低溫高濕是黃瓜細(xì)菌性角斑病發(fā)生的主要外界條件。發(fā)病及流行的最適環(huán)境溫度為15～25 ℃，空氣相對(duì)濕度為75%以上；空氣相對(duì)濕度越大，病害發(fā)生越嚴(yán)重。另外水肥灌溉不合理、連作、植株栽植密度過(guò)大都會(huì)導(dǎo)致病害嚴(yán)重發(fā)生。病菌可附著在種子表面和內(nèi)部，播種后子葉直接被侵染；病菌還可從傷口處侵入，從傷口侵入潛伏期短，1 周內(nèi)就會(huì)出現(xiàn)病斑，濕度過(guò)大時(shí)受害部位產(chǎn)生菌膿。病菌可通過(guò)雨水飛濺、昆蟲活動(dòng)、農(nóng)事操作等傳播途徑進(jìn)行重復(fù)多次感染（Bhat et al.，2010；李寶聚和李煥玲，2012；劉燕妮 等，2016；劉兆良 等，2017）。

1.4 致病變種的鑒定與檢測(cè)

致病變種的鑒定與檢測(cè)是一項(xiàng)非常重要的工作，通常需要依據(jù)細(xì)菌學(xué)一系列復(fù)雜的理化特征等方法來(lái)鑒定。傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)鑒定方法作為植物病原菌研究的基礎(chǔ)，對(duì)于病原菌生理生化、表型等性狀的描述是必不可少的。傳統(tǒng)的病原菌鑒定方法主要有表型分析鑒定（細(xì)菌菌落形態(tài)鑒定、革蘭氏染色法等）、理化特性測(cè)定（氧化酶反應(yīng)、是否產(chǎn)生熒光色素等）、不同代謝產(chǎn)物的理化鑒定（BLOLOG 鑒定、脂肪酸鑒定）、煙草過(guò)敏性反應(yīng)測(cè)定等。之后隨著技術(shù)的進(jìn)步，細(xì)菌學(xué)的鑒定方法得到了進(jìn)一步的發(fā)展，分子生物學(xué)鑒定方法也應(yīng)用到了丁香假單胞菌的劃分及致病變種的鑒定當(dāng)中。學(xué)者們基于細(xì)菌基因組序列（核酸雜交技術(shù)、RAPD 技術(shù)、RFLP 技術(shù)、rep-PCR 技術(shù)等）、保守序列基因（16S rRNA 序列分析、ITS 序列分析）、特定致病基因及致病相關(guān)基因的PCR 檢測(cè)等方法對(duì)丁香假單胞菌進(jìn)行了一系列快速而準(zhǔn)確的鑒定，對(duì)后續(xù)病害診斷及防治有著十分重要的意義（Gardan et al.，1999；焦振泉和劉秀梅，2001；夏明星 等，2005；劉鵬 等，2006；Kvitko et al.，2007；Olczak-Woltman et al.，2007；王哲 等，2011；李寶聚 等，2015a；孔維文等，2016）。

2 黃瓜細(xì)菌性角斑病抗性鑒定

植物抗病育種中一項(xiàng)非常重要的工作便是抗病性鑒定，抗源的篩選、后代的選擇、品種的推廣都離不開抗病性鑒定。細(xì)菌性角斑病常用的抗病性鑒定方法有苗期人工接種鑒定和田間自然鑒定。由于田間自然鑒定中外界環(huán)境條件不可控，因此鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性不高。因此現(xiàn)在多采用苗期人工接種鑒定法，并制定了相應(yīng)的技術(shù)規(guī)程和標(biāo)準(zhǔn)。

2.1 苗期接種技術(shù)

苗期對(duì)抗源材料進(jìn)行篩選及鑒定，可以提高選擇高抗品種的效率及縮小選擇范圍，加快抗病育種進(jìn)程。在實(shí)施“八五”和“九五”國(guó)家攻關(guān)計(jì)劃的過(guò)程中，李淑菊（1999）所在團(tuán)隊(duì)攜手中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院等其他幾個(gè)團(tuán)隊(duì)共同完成了黃瓜上4 種病害的多抗性鑒定技術(shù)和8 種病害苗期人工接種抗病性鑒定技術(shù)，其中包括細(xì)菌性角斑病苗期人工接種鑒定法，即在黃瓜第1 片真葉時(shí)期進(jìn)行噴霧接種，接種濃度為3 × 108cfu·mL-1，接種溫度為23～26 ℃，接種后保持濕度48 h 以上。目前我國(guó)黃瓜抗病研究大多采用上述提到的“八五”國(guó)家攻關(guān)項(xiàng)目統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行苗期接種。

2.2 抗病性調(diào)查及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

接種后5～7 d 調(diào)查發(fā)病情況，調(diào)查表型所采用的參考標(biāo)準(zhǔn)不同，得出的結(jié)論也有所不同。調(diào)查表型時(shí)使用的標(biāo)準(zhǔn)主要分為兩類，一類采用0/1評(píng)價(jià)量表對(duì)植物發(fā)病癥狀進(jìn)行劃分，葉片病斑周圍無(wú)黃綠色暈圈記為0，即存在抗性；葉片病斑周圍有黃綠色暈圈記為1，即易感。另一類是根據(jù)葉片上病斑的數(shù)量和大小，采用1～5 級(jí)（李樹德，1995）或1～9 級(jí)（Olczak-Woltman et al.，2007）評(píng)價(jià)量表，再依據(jù)評(píng)價(jià)等級(jí)計(jì)算病情指數(shù)，病情指數(shù)越低代表品種越抗病。Dessert 等（1982）和Zhang 等（2019）發(fā)表的文章中采用第一類作為表型鑒定的標(biāo)準(zhǔn)，Olczak-Woltman 等（2007）和Wang 等（2019）采用的是第二類，而Olczak-Woltman 等（2008）和S?omnicka 等（2018b）則是參考以上兩種標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行表型鑒定。

3 黃瓜抗細(xì)菌性角斑病分子生物學(xué)研究進(jìn)展

3.1 細(xì)菌性病害在其他作物上的分子生物學(xué)研究進(jìn)展

細(xì)菌性病害是影響我國(guó)農(nóng)業(yè)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的一類重要病害，其中造成黃瓜細(xì)菌性角斑病的丁香假單胞菌在植物病害上的發(fā)生率居于植物細(xì)菌性病害之首（Mansfield et al.，2012），可導(dǎo)致菜豆暈疫病、桃樹潰瘍病、十字花科黑斑病、番茄斑點(diǎn)病等病害的發(fā)生（王丹丹和王清明，2017）。

糧食作物中由丁香假單胞菌引起的細(xì)菌性病害對(duì)豆科植物的危害較重，引起大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病的病原菌為丁香假單胞菌大豆致病變種（Pseudomonas syringaepv.glycinea），研究表明大豆對(duì)該病菌的抗性是由多基因控制的數(shù)量性狀遺傳（Ariyarathne et al.，1999）。目前已有學(xué)者將大豆細(xì)菌性斑點(diǎn)病的抗病基因Rpg1和Rpg4定位到13 號(hào)和3 號(hào)染色體上（Ashfield et al.，2003）。程偉（2016）利用江淮大豆為試驗(yàn)材料進(jìn)行QTL 定位，在13、14 號(hào)和18 號(hào)染色體上定位到細(xì)菌性斑點(diǎn)病的抗性位點(diǎn)。梅宏瑤等（2020）利用野生型大豆為材料，發(fā)現(xiàn)了6 個(gè)與抗細(xì)菌性斑點(diǎn)病相關(guān)的QTL 位點(diǎn)，并得到41 個(gè)候選基因。豆科植物中細(xì)菌性暈疫病的病原也同為丁香假單胞菌。國(guó)外學(xué)者M(jìn)iklas 用菜豆作為試驗(yàn)材料研究細(xì)菌性暈疫病，基于連鎖定位的遺傳研究確定了Pv02、Pv04 和Pv10 3 條染色體上主效R基因的位置（Miklas et al.，2009，2011，2014）。Tock 等（2017）構(gòu)建了3 個(gè)重組自交系的連鎖圖譜，并進(jìn)行GWAS 分析，發(fā)現(xiàn)1 個(gè)具有廣譜性的主效QTL 位點(diǎn)位于Pv04 染色體上，還檢測(cè)到Pv05 染色體上有1 個(gè)與菜豆暈疫病密切相關(guān)的抗性基因位點(diǎn)。

丁香假單胞菌還是很多果樹、蔬菜病害的致病菌，例如茄科、葫蘆科、十字花科等。番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病是由丁香假單胞菌番茄致病變種（Pseudomonas syringaepv.tomato）引起的（蔡義勇，2007）。Pto抗病基因是1 個(gè)在番茄中具有廣譜性的抗性基因（Tang et al.，1999），它位于5 號(hào)染色體上（Pitblado et al.，1984），是由Martin 等（1993）采用圖位克隆的方法分離出來(lái)的。蔬菜上的細(xì)菌性黑斑病主要危害十字花科的油菜、甘藍(lán)、蘿卜等，其病原（Pseudomonas syringaepv.maculicola）與番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病病原親緣關(guān)系最近，采用PCR技術(shù)單獨(dú)檢測(cè)出此變種有一定難度（葉露飛 等，2015；王道澤 等，2016）。另外獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病是由丁香假單胞菌獼猴桃致病變種（Pseudomonassyringaepv.actinidiae）引起的，其抗性由1 對(duì)主效基因控制（易盼盼 等，2015）。李淼等（2009）通過(guò)RAPD 技術(shù)分析不同獼猴桃品種與細(xì)菌性潰瘍病抗性之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)抗細(xì)菌性潰瘍病材料中都含有1 條大小為1 458 bp 的DNA 片段，而感病材料則沒(méi)有這一片段。

3.2 黃瓜細(xì)菌性角斑病抗病性遺傳規(guī)律研究

關(guān)于黃瓜細(xì)菌性角斑病抗性遺傳規(guī)律研究的報(bào)道較少，最早的研究是由Chand 和Walker（1964）發(fā)表的，此研究將病害的嚴(yán)重程度用受侵染葉片上出現(xiàn)壞死和失綠變黃的病斑的數(shù)量和大小來(lái)表示，并證明黃瓜細(xì)菌性角斑病抗性為多基因控制的數(shù)量遺傳。后來(lái)Dessert 等（1982）將黃瓜對(duì)細(xì)菌性角斑病的抗性劃分為抗病和感病2 種類型，抗病型黃瓜葉片上的病斑周圍有很小甚至沒(méi)有黃綠色暈圈，而感病型葉片的病斑周圍有黃綠色暈圈，遺傳分析結(jié)果表明黃瓜細(xì)菌性角斑病抗性是由單個(gè)隱性基因控制的。此后數(shù)年，在此領(lǐng)域一直未有更進(jìn)一步的研究報(bào)道，直到2008 年，Olczak-Woltman 等綜合前人研究，利用兩組參數(shù)再次研究了該病的抗性遺傳規(guī)律。他們將鑒定材料分為2 組，第1 組表型劃分方式與Dessert 等（1982）一致，第2 組與Chand 和Walker（1964）一致。試驗(yàn)結(jié)果表明，根據(jù)受感染葉片壞死點(diǎn)周圍是否存在黃綠色暈圈，可得出黃瓜細(xì)菌性角斑病的抗性是由單個(gè)隱性基因控制的；而以黃瓜葉片上病斑的數(shù)量和大小作為表型鑒定的標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)對(duì)F2和回交世代的分析，則證實(shí)其抗性是由多基因控制的，抗性遺傳率約為53%，這個(gè)結(jié)果與上述Chand 和Walker 的研究結(jié)果一致（Olczak-Woltman et al.，2008，2009；秦智偉 等，2009）。

由此可見(jiàn)，由于所用研究材料的遺傳背景不同，抗病性鑒定方法不統(tǒng)一，再加上細(xì)菌性角斑病病原菌在不同國(guó)家和地區(qū)可能存在致病性差異，導(dǎo)致目前黃瓜細(xì)菌性角斑病的抗性遺傳規(guī)律還不甚明確。

3.3 黃瓜細(xì)菌性角斑病抗病基因遺傳定位研究

黃瓜細(xì)菌性角斑病抗病相關(guān)分子標(biāo)記研究相對(duì)滯后，直到近年才有少量報(bào)道。Olczak-Woltman于2009 年發(fā)現(xiàn)了1 個(gè)與細(xì)菌性角斑病抗性相關(guān)的RAPD 標(biāo)記OP-AO07，該標(biāo)記與細(xì)菌性角斑病抗性位點(diǎn)之間的遺傳距離約為13 cM（Olczak-Woltman et al.，2009）。S?omnicka 等（2015b）利用Gy14 ×B10 重組自交系群體，用生物信息學(xué)方法初步篩選出222 個(gè)在親本間有多態(tài)性的SSR 標(biāo)記，并且發(fā)現(xiàn)位于5 號(hào)染色體上的SSR00398 可能與細(xì)菌性角斑病抗性基因有關(guān)。金仲恩等（2017）發(fā)明了一種用于檢測(cè)黃瓜種子中細(xì)菌性角斑病菌的分子標(biāo)記P1、P2 和P3。吳志明等（2019）基于黃瓜細(xì)菌性角斑病抗性基因CsPSL的SNP 位點(diǎn)開發(fā)了1 個(gè)KASP 標(biāo)記，并申請(qǐng)專利，但關(guān)于該基因的具體信息及功能還未見(jiàn)報(bào)道。

目前僅有少數(shù)研究定位了黃瓜細(xì)菌性角斑病抗病相關(guān)的基因/QTL 位點(diǎn)，尚未見(jiàn)對(duì)該基因進(jìn)行克隆及分子調(diào)控機(jī)制研究的報(bào)道。S?omnicka 利用Gy14 × B10 重組自交系群體，使用SNP 標(biāo)記構(gòu)建包含7 個(gè)連鎖群，717 個(gè)位點(diǎn)的遺傳圖譜，圖長(zhǎng)599.7 cM，平均距離為0.84 cM，最終在5 號(hào)染色體上檢測(cè)到psl5.1和psl5.2這2 個(gè)主效的QTL 位點(diǎn)（S?omnicka et al.，2018b）。Zhang 等（2019）利用抗病親本IL52 與易感親本長(zhǎng)春密刺（CCMC）雜交，培育出含155 個(gè)株系的F6重組自交系。研究結(jié)果表明，在該群體中細(xì)菌性角斑病抗性由單隱性位點(diǎn)psl-1控制，并將psl-1定位到1 號(hào)染色體的3 118 855～3 951 558 bp 區(qū)間。Wang 等（2019）發(fā)現(xiàn)Gy14 × WI2757 群體中dm1、cla、psl是同一位點(diǎn)，黃瓜對(duì)3 種病害的抗性可能是由同一個(gè)基因CsSGR（Pan et al.，2018）控制的，但其分子機(jī)制尚未研究清楚。

上述研究對(duì)于開展黃瓜細(xì)菌性角斑病的分子標(biāo)記輔助育種奠定了一定的基礎(chǔ)，但是黃瓜細(xì)菌性角斑病抗性究竟由多少個(gè)基因控制，這些基因的抗病分子機(jī)制及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)還不清楚。

3.4 抗病種質(zhì)資源篩選與應(yīng)用

優(yōu)異抗病種質(zhì)資源的收集評(píng)價(jià)是開展抗病育種的前提。早在1997 年，Chen 等就將栽培黃瓜與野生近緣種黃瓜種間雜交得到抗霜霉病的材料IL52，該材料最初被廣泛應(yīng)用于霜霉病抗性遺傳分析（Chen et al.，1997，2003；Pang et al.，2013）。而后發(fā)現(xiàn)IL52 除了有霜霉病抗性外，對(duì)白粉病也有高度抗性，可作為兼抗霜霉病和白粉病的黃瓜抗源材料（Zhang et al.，2018）。Zhang 等（2019）從這一發(fā)現(xiàn)得到啟發(fā)，將IL52 用于細(xì)菌性角斑病的研究中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL52 對(duì)細(xì)菌性角斑病也具有抗性，可以作為黃瓜抗病育種的抗源材料。Wang 等（2019）還發(fā)現(xiàn)Gy14 對(duì)黃瓜霜霉病、細(xì)菌性角斑病和炭疽病均具有抗性。馬柏壯等（2013）對(duì)222個(gè)黃瓜栽培品種進(jìn)行黃瓜細(xì)菌性角斑病人工接種鑒定，發(fā)現(xiàn)金滿田黃瓜、綠豐園8 號(hào)青瓜和新津春4為高抗品種，另外還從52 份黃瓜種質(zhì)資源中篩選出13 份高抗材料。

綜上可知，目前雖已對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病抗病種質(zhì)資源進(jìn)行了一些評(píng)價(jià)篩選研究，但抗性種質(zhì)資源在黃瓜中的應(yīng)用還極為有限，抗細(xì)菌性角斑病的黃瓜品種還極為缺乏，因此今后還需不斷加強(qiáng)這方面的研究。

4 黃瓜細(xì)菌性角斑病防治方法

黃瓜細(xì)菌性角斑病的傳播速度極快，發(fā)病較為嚴(yán)重。目前對(duì)該病害的防治主要以預(yù)防為主，在發(fā)病前或發(fā)病初期采用種子消毒、栽培管理、化學(xué)藥劑防治、植物誘導(dǎo)等多種方法進(jìn)行綜合防治。

4.1 農(nóng)業(yè)防治

農(nóng)業(yè)防治是防治技術(shù)中的一個(gè)重要組成部分。在播種前用50%醋酸銅溶液對(duì)種子進(jìn)行藥劑消毒，以防種子本身攜帶病菌（何永梅和李榮，2018）；在植株生長(zhǎng)過(guò)程中做好日常通風(fēng)排濕，通過(guò)覆蓋地膜、小水滴灌等方法進(jìn)行降濕（黃和喜 等，2018）；同時(shí)避免在早晨濕度大時(shí)進(jìn)行整枝打杈、果實(shí)采摘等操作，以防止病菌從傷口處侵入（李寶聚 等，2015b）。

4.2 化學(xué)防治

化學(xué)農(nóng)藥防治一般用于瓜類蔬菜發(fā)病初期，可及時(shí)用藥控制病情。防治細(xì)菌性角斑病一般選擇銅制劑和抗生素類，如氫氧化銅、春雷霉素和琥珀酸銅等（李寶聚 等，2015b；黃和喜 等，2018）。不同藥劑之間交替使用，起到提高藥效、降低抗藥性風(fēng)險(xiǎn)的作用（陳軍和賈冰峰，2012）。一般選擇在晴天的早上進(jìn)行施藥，主要噴灑葉片，藥劑中還可適當(dāng)加入展著劑以提高農(nóng)藥的附著能力（吳炳芝等，2001）。

4.3 植物誘導(dǎo)抗病

Ku? 于1982 年提出植物誘導(dǎo)抗病性（Ku?，1982），它指的是經(jīng)外界因子誘導(dǎo)后，植物體內(nèi)會(huì)對(duì)有害病原菌產(chǎn)生抗性的現(xiàn)象，細(xì)菌、真菌、病毒均可為誘導(dǎo)劑。植物誘導(dǎo)抗病性類似于高等動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，這是一個(gè)利用植物自身的防衛(wèi)來(lái)進(jìn)行病蟲害防治的新途徑，其發(fā)展前景十分廣闊。這個(gè)方法在已被病蟲害侵染的病株上的效果并不明顯，主要被用來(lái)預(yù)防病蟲害，使植物得以健康成長(zhǎng)。石延霞等（2008）曾用細(xì)菌性角斑病病原菌為誘導(dǎo)物，引起抗病信號(hào)的傳導(dǎo)，使寄主細(xì)胞合成木質(zhì)素來(lái)抵抗病原菌。目前有關(guān)植物誘導(dǎo)抗病方面的研究還缺乏深刻認(rèn)識(shí)，需要不斷進(jìn)行探索和研究。

上述防治方法容易導(dǎo)致農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染，且不能徹底切斷病原菌侵染途徑，不能從根本上解決細(xì)菌性角斑病對(duì)黃瓜生產(chǎn)的危害，只有挖掘優(yōu)質(zhì)抗病資源，選育具有細(xì)菌性角斑病抗性的新品種，才是最行之有效的辦法。

5 存在問(wèn)題與未來(lái)展望

我國(guó)對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病的研究起步較晚，近些年來(lái)雖有了一些進(jìn)展，但仍然存在著很多問(wèn)題：①由于研究者所采用的病原菌接種技術(shù)不同，以及進(jìn)行表型鑒定時(shí)采用的抗病性鑒定方法和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)存在差異，造成研究結(jié)論有所不同；② 在抗性遺傳規(guī)律方面的研究不夠深入，黃瓜細(xì)菌性角斑病的抗性遺傳規(guī)律仍不夠明確，存在一些爭(zhēng)議；③關(guān)于黃瓜抗細(xì)菌性角斑病基因的連鎖分子標(biāo)記研究較少，定位區(qū)間過(guò)大，獲得的標(biāo)記與目標(biāo)性狀之間的遺傳距離較遠(yuǎn)，缺乏與細(xì)菌性角斑病抗性基因緊密連鎖的可靠標(biāo)記，無(wú)法真正用于分子標(biāo)記輔助育種，并且黃瓜細(xì)菌性角斑病抗病反應(yīng)的分子機(jī)制尚不明確。④ 由于抗病性鑒定條件所限，黃瓜細(xì)菌性角斑病抗病種質(zhì)資源鑒定工作缺乏系統(tǒng)性，對(duì)材料的抗性研究也不透徹。加之黃瓜的遺傳背景較狹窄，缺乏免疫或高抗的資源，抗性遺傳復(fù)雜且是多基因數(shù)量遺傳不利于抗性轉(zhuǎn)育等，這些問(wèn)題都導(dǎo)致在常規(guī)育種中抗病品種選育效率不高。

針對(duì)以上問(wèn)題，可進(jìn)一步加強(qiáng)以下幾方面的研究：①加強(qiáng)對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病苗期接種、表型鑒定及鑒定標(biāo)準(zhǔn)的研究工作，摸索出一套完整、簡(jiǎn)便且有效的接種技術(shù)及表型鑒定標(biāo)準(zhǔn)；② 廣泛搜集、鑒定抗源材料，拓寬抗病遺傳背景，探索與抗病規(guī)律相符的育種方法；利用分子標(biāo)記、基因工程等手段，深入探究抗病分子機(jī)制和抗病規(guī)律，加快抗病育種進(jìn)程，提高育種效率。③利用基因組信息開展抗細(xì)菌性角斑病基因的精細(xì)定位和基因克隆研究，獲得大量緊密連鎖的可靠標(biāo)記，建立遺傳連鎖圖譜，實(shí)現(xiàn)分子標(biāo)記輔助選擇與常規(guī)育種的有機(jī)結(jié)合，建立優(yōu)質(zhì)多抗基因與其他目標(biāo)基因抗病育種技術(shù)體系。④ 最直接有效且經(jīng)濟(jì)安全的病害防治措施是選育和使用抗病品種。加強(qiáng)抗性材料的篩選與挖掘，關(guān)注多抗基因的聚合，將優(yōu)質(zhì)高效的抗病基因?qū)雰?yōu)良品系，為選擇具有復(fù)合抗性的黃瓜新品種奠定基礎(chǔ)。