一例雞大腸桿菌感染的診斷

張清鋒

（商丘市梁園區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 商丘 476000）

大腸桿菌病是由大腸桿菌某些血清型菌株引起的一類(lèi)疾病的總稱(chēng)。各個(gè)品種和日齡的雞均可發(fā)病，但肉仔雞最易感。該病一年四季均可發(fā)生，尤以冬夏季多發(fā)。在臨床上可表現(xiàn)為敗血癥、氣囊炎、肝周炎、心包炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦炎等，發(fā)病率高，死亡率高，且因與其他呼吸道疾病如慢性呼吸道病混合或并發(fā)感染而使死亡率升高。隨著養(yǎng)禽業(yè)的迅速發(fā)展與高度集約化飼養(yǎng)，雞大腸桿菌病已成為雞群重要的疾病之一。為了控制雞大腸桿菌在雞群中的傳播，筆者對(duì)疑似大腸桿菌病例進(jìn)行了病原分離鑒定，并對(duì)分離菌的培養(yǎng)特性、致病力及抗菌藥物的敏感性進(jìn)行了研究，為有效防治該病提供了依據(jù)。

1 發(fā)病情況

2020 年1 月，商丘市梁園區(qū)某雞場(chǎng)共飼養(yǎng)5 000 只肉雞，在10日齡忽然發(fā)病，當(dāng)日死亡8只，第2天死亡17只，迅速蔓延整個(gè)雞群，病雞精神沉郁，縮頭垂翅，有些雞流淚，并伴隨輕微的呼吸道癥狀，排水樣稀便，剖檢可見(jiàn)心包炎，腹腔臟器表面覆蓋一層淡黃色凝固的纖維素性滲出物，內(nèi)臟臟器粘連。其病料盛于滅菌的容器內(nèi)，于4℃條件下存放。

2 病原學(xué)及流行特點(diǎn)

大腸桿菌是革蘭氏陰性短桿菌，具鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無(wú)芽孢，是Escherich 在1885 年發(fā)現(xiàn)的，在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。但某些血清型的大腸桿菌可引起不同癥狀的腹瀉，根據(jù)不同的生物學(xué)特征將致病性大腸桿菌分為5類(lèi)，致病性大腸桿菌（EPEC）、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）、腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）、腸出血性大腸桿菌（EHEC）、腸黏附性大腸桿菌（EAEC）。雞大腸桿菌病是由特定血清型大腸桿菌引起的一種傳染病。該病病型較多，為條件性傳染病，多繼發(fā)或與其他病并發(fā)，是目前養(yǎng)雞業(yè)中最重要的也是最棘手的傳染病之一。該病在雛雞階段、育成期和成年產(chǎn)蛋雞均可發(fā)生，雛雞呈急性敗血癥經(jīng)過(guò)。成年產(chǎn)蛋雞往往在開(kāi)產(chǎn)階段發(fā)生，死亡率增多，影響產(chǎn)蛋。由該病造成雞群的死亡有明顯的高峰，但病程較長(zhǎng)。

3 臨床癥狀及病理變化

3.1 急性敗血癥

多見(jiàn)于6～10 周齡肉雞，病雞精神不振，體溫升高，衰竭，排白色或黃色糞便，后突然死亡。剖檢可見(jiàn)皮膚、肌肉瘀血、血凝固不良，呈紫黑色，肺瘀血水腫，氣囊渾濁，腸黏膜充血、出血，心臟擴(kuò)張，肝腫大呈紫色，有時(shí)見(jiàn)灰白色壞死灶。

3.2 死胚、弱雛、臍炎

這是由于產(chǎn)蛋母雞患有大腸桿菌性輸卵管炎或卵巢炎，卵被污染或種蛋被病原菌污染，未很好消毒所致。剖檢可見(jiàn)卵黃吸收不良，囊壁充血、出血，內(nèi)容物稀薄，呈灰綠色，黏稠、干酪樣，進(jìn)一步確診須進(jìn)行細(xì)菌檢查。

3.3 輸卵管炎或卵黃性腹膜炎

主要見(jiàn)于管理不善的產(chǎn)蛋雞，病死雞腹部膨大、變綠。剖檢可見(jiàn)輸卵管高度擴(kuò)張，腹腔臟器表面覆蓋一層淡黃色凝固的纖維素性滲出物，內(nèi)臟臟器粘連。

3.4 關(guān)節(jié)炎

多見(jiàn)于幼、中雛雞及肉仔雞，趾關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)腫大，剖檢可見(jiàn)關(guān)節(jié)腔有黏稠的、混濁的漿液并伴有纖維素性或膿性滲出物。

3.5 雞大腸桿菌肉芽腫

此病型較罕見(jiàn)。病雞消瘦，無(wú)特定癥狀，在腸漿膜、腸系膜、心外膜等部位見(jiàn)黃白色，大小不等的結(jié)核結(jié)節(jié)樣肉芽腫病灶。

4 診斷

4.1 細(xì)菌的分離與鑒定

無(wú)菌采集病死雞的肝臟，接種在普通瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)20 h，抹片，革蘭氏染色后鏡檢。挑取表面光滑、邊緣整齊、灰白色半透明的單個(gè)小菌落劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂平板，于37 ℃培養(yǎng)20 h。取出上述接種的麥康凱瓊脂平板，選擇紅色的圓滑菌落做純培養(yǎng)。用燒灼滅菌的接種環(huán)小心挑取單個(gè)菌落移種于麥康凱瓊脂平板中，用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布在平板第一區(qū)并作數(shù)次劃線(xiàn)，再在二、三、四區(qū)依次用接種環(huán)劃線(xiàn)。每劃一個(gè)區(qū)域，應(yīng)將接種環(huán)灼燒-次，待冷卻后再劃下一個(gè)區(qū)域，每一區(qū)域的劃線(xiàn)應(yīng)接觸上一區(qū)域的接種線(xiàn)2～3次，使菌量逐步減少，以形成單個(gè)菌落。劃線(xiàn)完畢后倒置，37 ℃恒溫需氧培養(yǎng)18～24 h，2代純培養(yǎng)后于4℃條件存放。其結(jié)果是在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上37 ℃培養(yǎng)20 h 后，形成中等大小，圓形微凸起，表面光滑濕潤(rùn)，淺灰色半透明菌落。通過(guò)純培養(yǎng)獲得1株細(xì)菌，其在麥康凱瓊脂平板上，形成中等大小，表面光滑濕潤(rùn)的粉紅色菌落。

4.2 生化特征鑒定

利用微量生化發(fā)酵管進(jìn)行碳水化合物發(fā)酵試驗(yàn)，進(jìn)行吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、VP 試驗(yàn)和枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)，觀察其生化特性。進(jìn)行三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)試驗(yàn)（將可疑菌落接種于三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基），觀察其生長(zhǎng)特性。其結(jié)果為此次分離的大腸桿菌分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性，M-R 結(jié)果陽(yáng)性，V-P結(jié)果陰性，不利用枸櫞酸鹽;其在培養(yǎng)基斜面上生長(zhǎng)，產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基變黃。符合大腸桿菌的生長(zhǎng)、生化特征。

4.3 藥敏學(xué)試驗(yàn)診斷

按K-B紙片擴(kuò)散法將被檢細(xì)菌涂布接種于普通瓊脂平板上間隔一段距離貼上各種藥敏試紙，包括：紅霉素、慶大霉素、阿米卡星氨芐西林、諾氟沙星、新諾明、林可霉素、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、頭孢唑啉鈉試紙，于37℃培養(yǎng)24 h，結(jié)果判斷依據(jù)《紙片法抗菌藥物敏感試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)（第4版）》進(jìn)行。此次分離的大腸桿菌對(duì)阿米卡星鏈霉素、慶大霉素氟苯尼考敏感，對(duì)環(huán)丙沙星中度敏感對(duì)諾氟沙星不敏感，新諾明、紅霉素、青霉素、氨芐西林、頭孢唑啉鈉則對(duì)其沒(méi)有抑菌作用。

5 預(yù)防

引起大腸桿菌病的因素很多，比較復(fù)雜。其中包括非傳染性因素和傳染性因素兩種。常見(jiàn)的非傳染性因素主要是環(huán)境因素，如氣候寒冷、擁擠、潮濕、飼養(yǎng)密度大、通風(fēng)不良、有害氣體濃度太高等因素誘發(fā)。傳染性因素主要是臨床上常見(jiàn)的一些傳染病，如傳染性鼻炎、傳染性支氣管炎、新城疫等都可誘發(fā)或繼發(fā)大腸桿菌病，因此需要采取綜合性的防治措施。

5.1 加強(qiáng)環(huán)境控制

雞群生長(zhǎng)的環(huán)境對(duì)雞群的健康狀況和生產(chǎn)性能有著重要的影響。因此要加強(qiáng)雞舍的管理通風(fēng)。農(nóng)戶(hù)閑置房作為雞舍，應(yīng)適當(dāng)改建，注意采光通風(fēng)。通風(fēng)方式可采用活動(dòng)天窗式自然通風(fēng)。也可在雞舍山墻的一側(cè)安裝排風(fēng)扇進(jìn)行縱向通風(fēng)，保證空氣新鮮。消除舍內(nèi)的氨味及異臭味，以聞不到氨味、異臭味為宜。實(shí)踐證明，凡通風(fēng)好的雞舍可有效防止和緩解呼吸道疾病。

5.2 控制其他疾病的暴發(fā)

大量的臨床病癥顯示，很多疾病導(dǎo)致大腸桿菌的繼發(fā)或混合感染。如雞沙門(mén)氏菌病傳染性鼻炎等。對(duì)于這些疾病目前都有較好的疫苗進(jìn)行預(yù)防。因此應(yīng)制定適合自家廠的防疫程序并認(rèn)真實(shí)施，這樣也就間接地起到預(yù)防和減少該病的發(fā)生。

5.3 免疫接種

主要是大腸桿菌自家滅活苗，在一些較大的養(yǎng)殖場(chǎng)可以從本廠發(fā)病的雞群中選擇比較典型的病雞，送到有條件的實(shí)驗(yàn)室或研究所，分離菌株制成大腸桿菌滅活菌苗，對(duì)本場(chǎng)的健康雞群進(jìn)行免疫有很好的效果，如能在本場(chǎng)連續(xù)使用-段時(shí)間就能有效地預(yù)防和控制本病的發(fā)生。

6 治療

一般常用的喹諾酮類(lèi)、磺胺類(lèi)等藥物對(duì)大腸桿菌病都有一定的療效。 但由于許多雞場(chǎng)長(zhǎng)期或大劑量濫用抗菌藥物，使不少本來(lái)是敏感的藥物卻起不到治療的效果。因此在治療時(shí)應(yīng)遵循以下幾個(gè)原則：選擇高度敏感的藥物，最好的方法是通過(guò)藥敏試驗(yàn)，選擇高敏的藥物。無(wú)條件進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的雞場(chǎng)，應(yīng)選用一般不常用的藥物或新藥，盡可能選擇一些復(fù)方藥物進(jìn)行治療，以減少細(xì)菌耐藥性的范圍。要有足夠的用藥劑量和療程，根據(jù)藥物的用法選擇合適的給藥途徑，但藥量也不可過(guò)大，以防中毒。

中草藥在治療大腸桿菌方面別具一格，集清熱、殺菌、解毒、促進(jìn)免疫于一身，標(biāo)本兼治、效果確實(shí)。目前市售的用于治療大腸桿菌病的中草藥的復(fù)方制劑很多，應(yīng)進(jìn)行篩選使用。

7 討論

近年來(lái)，在肉雞生產(chǎn)中，為了控制大腸桿菌及某些細(xì)菌感染，盲目地在飼料中使用一些抗菌藥物，結(jié)果導(dǎo)致耐藥菌株越來(lái)越多并日趨嚴(yán)重。從藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出，曾對(duì)大腸桿菌比較敏感的環(huán)丙沙星、諾氟沙星、頭孢唑啉鈉等均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。所以，在治療大腸桿菌病時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)選擇敏感藥物，且應(yīng)注意交替用藥，按療程投藥，這樣才能收到較好的治療效果。

其次，大腸桿菌是禽類(lèi)腸道的常在菌，是構(gòu)成禽類(lèi)正常菌群的一部分，但其中約15%的大腸桿菌是潛在的致病血清型。墊料和糞便中存在大量的大腸桿菌，種蛋表面被糞便污染時(shí)，細(xì)菌穿過(guò)蛋殼感染是最重要的來(lái)源。飼料、飲水也常被致病性大腸桿菌污染，是造成大腸桿菌病在出雛后迅速傳播的另一重要來(lái)源。另外，該菌作為一種潛在的人畜共患病，具有重要的流行病學(xué)及公共衛(wèi)生意義，應(yīng)注意這一點(diǎn)。