飼草青貯微生物多樣性研究進(jìn)展及對(duì)策

劉 悅 字學(xué)娟* 陳 婷 李 茂

(1.海南大學(xué)林學(xué)院，儋州 571737；2.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所，儋州 571737)

青貯是一種利用乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)進(jìn)行發(fā)酵，長(zhǎng)期保存新鮮青綠飼料作物、牧草等飼草的存貯方式[1]。青貯技術(shù)已有3 000多年的歷史[2]，隨著保存技術(shù)的不斷改進(jìn)、管理技術(shù)的發(fā)展以及對(duì)發(fā)酵過程中微生物種類和作用認(rèn)識(shí)的增強(qiáng)，目前已成為最常用的飼草保存技術(shù)。優(yōu)質(zhì)青貯飼料具備適口性好、養(yǎng)分含量高、消化率較高等優(yōu)點(diǎn)，在粗飼料供應(yīng)不足的冬春季是反芻動(dòng)物優(yōu)質(zhì)飼料的重要來源[3]，是動(dòng)物維持生產(chǎn)性能的重要保障。

青貯飼料發(fā)酵過程由微生物參與，原料表面的微生物區(qū)系主要由醋酸菌屬(Acetobacter)、梭菌屬(Clostridium)、腐敗菌、霉菌、酵母菌和LAB等構(gòu)成。LAB起主導(dǎo)作用，主要通過以下2個(gè)途徑實(shí)現(xiàn)：一是利用可溶性碳水化合物產(chǎn)生乳酸來降低pH；二是LAB與不良微生物競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還可以產(chǎn)生細(xì)菌素等具有抑菌活性的代謝產(chǎn)物，來抑制其生長(zhǎng)[4]。據(jù)報(bào)道，每克青貯原料中LAB數(shù)量必須在105個(gè)以上才能保證青貯質(zhì)量，然而自然條件下，青貯原料表面附著的好氧細(xì)菌數(shù)量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于LAB數(shù)量[5]，因此青貯調(diào)制時(shí)需通過使用添加劑來直接或間接增加LAB數(shù)量，從而保證青貯發(fā)酵品質(zhì)。

從本質(zhì)上來講，飼草表面微生物區(qū)系影響青貯細(xì)菌群落的演替，進(jìn)而影響了發(fā)酵產(chǎn)物。而由于飼草表面微生物特性存在差異，從而使發(fā)酵過程多樣化。例如由于地理和氣候因素，不同地區(qū)的飼草微生物多樣性存在明顯差異；由于植物對(duì)外界環(huán)境差異的適應(yīng)性，當(dāng)植物種類不同或是植物種類相同地區(qū)不同時(shí)，其表面附著的微生物群落都大不相同。因此，對(duì)飼草表面微生物和青貯發(fā)酵過程中微生物多樣性的變化進(jìn)行研究，從青貯微生態(tài)系統(tǒng)的角度調(diào)控青貯發(fā)酵品質(zhì)具有重要的研究和實(shí)踐價(jià)值。近年來，國(guó)內(nèi)外研究人員將青貯微生物群落作為關(guān)注的重點(diǎn)，開展了大量研究。本文試圖就飼草青貯微生物多樣性研究進(jìn)行階段總結(jié)，以期為基于青貯微生物群落的青貯發(fā)酵品質(zhì)調(diào)控提供科學(xué)依據(jù)。

1 青貯過程中微生物的演替

許多細(xì)菌在飼草表面可以存活，但在選擇性培養(yǎng)基上不能培養(yǎng)，因此對(duì)其認(rèn)知可能存在偏差。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，使我們得以認(rèn)識(shí)發(fā)酵過程中微生物群的組成和動(dòng)態(tài)[6]。在起始階段，大腸桿菌(Escherichiacoli)大量繁殖，好氧細(xì)菌在前幾小時(shí)活躍，直到氧氣被消耗殆盡，LAB逐漸代替大腸桿菌，接著乳球菌屬(Lactococcus)開始大量繁殖，發(fā)酵體系pH隨之下降，從而抑制了酵母菌、霉菌及好氧細(xì)菌繁殖，隨著發(fā)酵進(jìn)行，發(fā)酵體系pH進(jìn)一步降低，更耐酸的乳桿菌屬(Lactobacillus)大量繁殖并主導(dǎo)發(fā)酵過程[7-8]。最后是有氧腐敗階段(二次發(fā)酵)，由于空氣的進(jìn)入，使得青貯飼料的pH、溫度升高，促使霉菌、梭菌及其他好氧菌生長(zhǎng)繁殖，從而影響青貯品質(zhì)。青貯發(fā)酵過程中常見的微生物見表1。通常為了加快發(fā)酵進(jìn)程、促進(jìn)乳酸發(fā)酵，青貯添加劑被廣泛使用[3]。

表1 青貯發(fā)酵過程中常見的微生物Table 1 Normally micro-organisms in silage fermentation process[9]

2 飼草青貯微生物多樣性

2.1 不同區(qū)域飼草青貯微生物多樣性差異

由于地理、氣候條件的差異，使得飼草本身附著微生物群落結(jié)構(gòu)有著極大的不同。因此青貯發(fā)酵體系中微生物群落的動(dòng)態(tài)變化也各不相同。

青藏高原極端而獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境及其在局部地區(qū)的變化可能導(dǎo)致牧草附生微生物適應(yīng)性進(jìn)化并產(chǎn)生多樣性，低海拔地區(qū)青貯中LAB包括戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)、腸系膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)和棒狀乳酸菌(Lactobacilluscoryniformis)，而高海拔地區(qū)LAB則包括腸系膜乳桿菌(Lactobacillusmesenteroides)和短乳桿菌(Lactobacillusbrevis)[10]。在青藏高原優(yōu)勢(shì)物種垂穗披堿草(Elymusnutans)青貯飼料中的LAB主要包括6個(gè)屬，分別為腸球菌屬(Enterococcus)、乳桿菌屬、片球菌屬(Pediococcus)、明串珠屬(Leuconostoc)、魏斯氏菌屬(Weissella)和乳球菌屬[11]；而熱帶氣候條件下的青貯飼料乙酸發(fā)酵能力較強(qiáng)，主要微生物可能由乳桿菌屬和腸桿菌屬(Enterobacter)組成，而研究人員已證實(shí)這2種微生物是熱帶青貯飼料中最可能的優(yōu)勢(shì)菌屬[12-13]。

在我國(guó)的其他地區(qū)也有相關(guān)研究報(bào)道，且乳桿菌屬在大多數(shù)情況下為優(yōu)勢(shì)菌群。如在北方地區(qū)采集的47個(gè)玉米(ZeamaysL.)青貯樣品中擇優(yōu)選擇33個(gè)樣品，豐富度在屬水平排序依次為乳桿菌屬和醋酸菌屬[14]。在內(nèi)蒙古自治區(qū)，盧強(qiáng)等[15]發(fā)現(xiàn)，苜蓿青貯不含添加劑的時(shí)候，除乳桿菌屬外，腸球菌屬、乳球菌屬也起主要作用。且隨著青貯發(fā)酵的發(fā)展，不同時(shí)期LAB的種類和豐度不同[15]。任海偉等[16]研究表明，甘肅白酒糟或菊芋渣混合發(fā)酵時(shí)優(yōu)勢(shì)菌也為乳桿菌屬。劉蓓一等[17]在江蘇的相關(guān)研究表明，乳桿菌屬是大麥(HordeumvulgareL.)青貯的優(yōu)勢(shì)菌屬，有氧暴露增加了有害菌不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、沙雷氏菌屬(Serratia)的相對(duì)豐度。梁辛等[18]在廣西南寧的研究發(fā)現(xiàn)，在甘蔗梢自然青貯初期以乳桿菌屬、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)、甲基桿菌屬(Methylobacterium)、根瘤菌屬(Rhizobium)為主，發(fā)酵后期乳桿菌屬占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。但乳桿菌屬并非在所有飼草中都占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位，Li等[19]發(fā)現(xiàn)熱帶牧草柱花草青貯中優(yōu)勢(shì)菌群為魏斯氏菌屬、腸桿菌屬和泛菌屬(Pantoea)。另外，有報(bào)道三江源試驗(yàn)區(qū)燕麥及其組合飼草的葉部?jī)?yōu)勢(shì)菌群也以腸桿菌屬、泛菌屬、假單胞菌屬(Pseudomonas)及歐文氏菌屬(Erwinia)為主，篩選得到的優(yōu)良菌株為腸桿菌屬的屎腸球菌(Enterococcusfaecium)[20]。

2.2 不同青貯原料青貯微生物多樣性差異

通常情況下，植物表面主要附著的細(xì)菌是好氧細(xì)菌，真菌是酵母菌和霉菌，對(duì)青貯發(fā)酵有利的LAB數(shù)量較少[21]。植物表面微環(huán)境如濕度、太陽(yáng)輻射強(qiáng)度、植物表面結(jié)構(gòu)以及營(yíng)養(yǎng)元素分布等會(huì)影響附著微生物的構(gòu)成。

2.2.1 不同牧草

一般來說，牧草表面附著的酵母菌數(shù)量為1～7 lg(CFU/g)FM，LAB數(shù)量為1～7 lg(CFU/g)FM，霉菌數(shù)量為1～6 lg(CFU/g)FM，有很大的變化范圍[22-26]。因種類、生長(zhǎng)環(huán)境和生育期的不同而異。禾本科牧草上不僅附著LAB數(shù)量少，且不良微生物數(shù)量較多。例如青貯前虉草(PhalarisarundinaceaL.)上附著的LAB數(shù)量較少[1.4～1.8 lg(CFU/g)FM]，有大量的不良微生物，包括需氧細(xì)菌[4.6～5.9 lg(CFU/g)FM]、酵母菌[5.2～5.7 lg(CFU/g)FM]和霉菌[3.8～4.8 lg(CFU/g)FM][24]；而在典型的木本飼草辣木(Moringaoleifera)和團(tuán)花樹(Neolamarckiacadamba)之中，研究人員發(fā)現(xiàn)青貯前藍(lán)細(xì)菌(Cyanobacterium)占優(yōu)勢(shì)[24]。

2.2.2 同種牧草不同環(huán)境

苜蓿是一種豆科牧草，栽培面積大且營(yíng)養(yǎng)豐富。馬召穩(wěn)[27]發(fā)現(xiàn)苜蓿的青貯微生物群落中海洋桿菌屬(Oceanobacillus)、乳桿菌屬和芽孢桿菌屬(Bacillis)為優(yōu)勢(shì)菌屬。與之不同的是，Ridwan等[28]發(fā)現(xiàn)苜蓿青貯生物群落優(yōu)勢(shì)菌為植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)、干酪乳桿菌、短乳桿菌、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、黃桿菌(Flavobacterium)。造成這種差異的原因可能是地理位置的不同導(dǎo)致植物表面小氣候不同，影響了微生物區(qū)系，也可能是因?yàn)槠贩N的不同。另外，由于青貯是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，自然新鮮的牧草表面附著微生物在組成和數(shù)量上都與青貯期間及完成之后差異明顯，而且附著的LAB數(shù)量在萎蔫過程中會(huì)增加一些[29]，但有研究表明，苜蓿萎蔫過程沒有改變LAB數(shù)量，但影響了多樣性，植物乳桿菌是未萎蔫青貯和萎蔫青貯中的優(yōu)勢(shì)菌種[12]。

2.3 不同青貯添加劑對(duì)青貯微生物多樣性的影響

牧草表面的LAB以異型發(fā)酵菌為主，其數(shù)量無法達(dá)到優(yōu)質(zhì)青貯LAB數(shù)量的最低標(biāo)準(zhǔn)(105CFU/g FM)[30]，因此使用青貯添加劑來直接或間接增加LAB數(shù)量成為近幾十年來飼草保存中研究最廣泛的方向之一，其本質(zhì)是通過調(diào)控微生物區(qū)系來改善飼草青貯發(fā)酵品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)特性。

2.3.1 LAB接種劑

長(zhǎng)期以來，LAB作為青貯飼料接種劑，可與牧草附著的有害菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并產(chǎn)生乳酸、乙酸及細(xì)菌素等代謝物質(zhì)，抑制有害菌的活動(dòng)與繁殖，有效地改善發(fā)酵品質(zhì)、保存營(yíng)養(yǎng)、避免腐敗[31]。因此，接種外源LAB后會(huì)抑制牧草本身附著的不利于青貯發(fā)酵的真菌及好氧細(xì)菌，抑制效果與牧草本身附著菌的特性及青貯條件有關(guān)。

有報(bào)道燕麥青貯接種耐低溫LAB增加了乳桿菌屬的相對(duì)豐度，并抑制了不良微生物梭菌的生長(zhǎng)，更好地保存了高水分燕麥青貯的養(yǎng)分[32]。大麥青貯飼料接種微生物菌劑也有類似的效果，不良細(xì)菌不動(dòng)桿菌屬和普羅威登菌屬(Providencia)等以及酵母菌中的伊薩酵母屬(Issatchenkia)和哈薩克斯坦酵母(Kazachstania)都受到抑制[33]。在莧菜(AmaranthusspinosusL.)和稻草(OryzasativaL.)混合青貯中加入植物乳桿菌，使LAB的相對(duì)豐度增加，腸桿菌科的相對(duì)豐度降低[34]；在綠麥和燕麥青貯的研究中發(fā)現(xiàn)，隨著青貯發(fā)酵的進(jìn)行，早期優(yōu)勢(shì)菌群腸球菌的地位在發(fā)酵后期被添加劑中的植物乳桿菌所替代，這有利于在青貯中后期建立穩(wěn)定的LAB群落，長(zhǎng)期保存青貯飼料[35]?？咕木哂杏幸嬗谙盏陌被岢煞?，因此可作為一種替代抗生素的新型青貯飼料添加劑，以減少其對(duì)動(dòng)物造成的危害。抗菌肽產(chǎn)生菌可作為調(diào)控牧草青貯發(fā)酵的新型添加劑[36]，有報(bào)道在苜蓿中添加產(chǎn)抗菌肽枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，發(fā)酵后提高了LAB的相對(duì)豐度，降低了腸球菌的相對(duì)豐度，改善青貯發(fā)酵品質(zhì)并改變了青貯期間和好氧暴露后的細(xì)菌群落[37]。環(huán)境因素會(huì)對(duì)外源菌群產(chǎn)生一定的影響，添加劑和較低的室內(nèi)環(huán)境溫度組合可以有效提高辣木葉青貯質(zhì)量[38]。

蘆葦金絲雀草(PhalarisarundinaceaL.)接種布氏乳桿菌青貯后降低細(xì)菌α多樣性指數(shù)，改變青貯飼料中細(xì)菌群落的組成，但對(duì)青貯發(fā)酵和細(xì)菌群落組成的影響有限，說明LAB接種劑的效果存在差異[39]。虉草青貯飼料接種植物乳桿菌和布氏乳桿菌后細(xì)菌多樣性顯著下降，細(xì)菌組成發(fā)生改變，但乳桿菌屬的相對(duì)豐度并未受到影響，同樣也表明接種LAB影響有限[40]。

2.3.2 牧草附生微生物區(qū)系的移植

糞菌移植(fecal microbiota transplantation，F(xiàn)MT)是指健康供體糞便的微生物群落被整體轉(zhuǎn)移到受體體內(nèi)的過程。因而受體可獲得有益細(xì)菌，改變腸道菌群組成[41]。其應(yīng)用較為廣泛，最近的研究發(fā)現(xiàn)移植健康成年豬的糞便微生物群落可以明顯改變受體仔豬回腸中的菌群結(jié)構(gòu)，增加結(jié)腸菌群的α多樣性。FMT組仔豬回腸中乳桿菌屬的相對(duì)豐度減少，棒狀桿菌屬(Corynebacterium)等的相對(duì)豐度增加。這說明早期FMT能夠調(diào)節(jié)腸道菌群的組成[42]。而將健康牛犢的糞菌移植到腹瀉的牛犢中，可以緩解腹瀉，并具有恢復(fù)其腸道微生物組成的能力[43]。

在改善青貯飼料微生物區(qū)系方面，菌群移植也可發(fā)揮正面作用。移植青貯玉米和本地紅三葉草附生菌群均有利于紅三葉草青貯發(fā)酵品質(zhì)和微生物群落結(jié)構(gòu)的改善，因此，移植并重建飼草附生微生物區(qū)系是一種有效、環(huán)保的青貯方法[44]。用蒸餾水和蘇丹草(Sorghumsudanense)、飼用高粱(Sorghumbicolor)、象草(Pennisetumpurpureum)和全株玉米(ZeamaysL.)4種牧草附著微生物對(duì)滅菌蘇丹草進(jìn)行青貯，結(jié)果表明飼料高粱的附生菌群對(duì)蘇丹草青貯的微生物群落和發(fā)酵特性有積極影響[23]。

2.3.3 混合青貯

混合青貯是指2種及以上青貯原料混合后制作的青貯飼料?；旌锨噘A的營(yíng)養(yǎng)成分含量豐富，有利于LAB生長(zhǎng)繁殖，可以更好地保存青貯飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[45-48]。

添加富含可溶性碳水化合物(water soluble carbohydrates，WSC)的多年生黑麥草可以降低富含蛋白質(zhì)的構(gòu)樹青貯的pH和附生微生物數(shù)量，對(duì)細(xì)菌群落有顯著影響，有益微生物如乳桿菌和魏斯氏菌在整個(gè)青貯時(shí)間內(nèi)占主導(dǎo)地位，腸桿菌的數(shù)量顯著減少。Spearman秩相關(guān)分析表明，構(gòu)樹青貯乳酸含量與乳桿菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas)的相對(duì)豐度呈正相關(guān)，而氨態(tài)氮(NH3-N)含量與腸桿菌的相對(duì)豐度呈正相關(guān)[45]?；旌嫌衩捉斩捲黾恿藛⒎鈺r(shí)乳桿菌的相對(duì)豐度(12.96%～50.82%)和暴露于空氣后伊薩酵母屬的相對(duì)豐度(2.02%～36.03%)，且一定程度上提高了有氧穩(wěn)定性。研究表明，混合調(diào)制玉米秸稈可以改善稻草青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分[46]。Wang等[47]在華北平原進(jìn)行了類似的研究，玉米與苜?；旌?，隨著玉米比例從0增加到40%，理想LAB的相對(duì)豐度增加，不良根瘤菌和甲基菌數(shù)量減少，并使菌群向更便于青貯飼料保存的方向轉(zhuǎn)移。使用發(fā)酵全混合日糧(fermentation total mixed ration，F(xiàn)TMR)是一種很有前途的保存飼料的方法，但發(fā)酵過程中的變化以及與FTMR菌群的聯(lián)系尚不完全清楚。添加22%燕麥青貯(oat silage，OS)的FTMR，發(fā)酵質(zhì)量顯著提高，表現(xiàn)為丁酸濃度降低，乳酸/乙酸降低，LAB數(shù)量增加，腐敗酵母死亡速度加快；添加11%和22% OS后，出現(xiàn)了更多的異型發(fā)酵LAB，如布氏乳桿菌、短乳桿菌和魏氏乳桿菌；此外，添加22%的OS導(dǎo)致細(xì)菌相對(duì)豐度和多樣性顯著增加，以乳桿菌屬?gòu)?fù)合物為主。在LAB復(fù)合體的物種中，棒狀乳桿菌數(shù)量與乳酸、粗蛋白質(zhì)和氨態(tài)氮含量呈正相關(guān)，表明其在改變發(fā)酵結(jié)構(gòu)方面的潛在作用[48]。

2.3.4 酶接種劑

除了細(xì)菌接種劑，酶如纖維素酶(cellulase，CE)、半纖維素酶、果膠酶和淀粉酶等也常常添加在青貯飼料中，尤其是CE的應(yīng)用最為廣泛。單獨(dú)使用CE和半乳糖苷酶(galactosidase，GA)以及與植物乳桿菌組合使用的處理大大增加了苜蓿青貯中乳桿菌屬的相對(duì)豐度[49]；CE和木聚糖酶用于甜高梁的青貯，可促進(jìn)乳酸發(fā)酵，降低pH和微生物多樣性，抑制不良微生物，保證青貯質(zhì)量[50]。在豆渣與玉米秸稈混合青貯中加入LAB、CE和LAB+CE，發(fā)現(xiàn)其細(xì)菌組成與對(duì)照組差異顯著，其中LAB +CE組乳桿菌屬數(shù)量顯著高于其他組，不良菌數(shù)量顯著低于其他組[51]。當(dāng)植物乳桿菌和/或CE對(duì)高水分莧菜、稻秸混合青貯時(shí)，添加劑提高了乳桿菌屬的相對(duì)豐度，降低了魏斯氏菌屬、片球菌屬、乳球菌的相對(duì)豐度。綜合來看，以植物乳桿菌和纖維素酶混合處理青貯品質(zhì)最好[52]。

2.3.5 有機(jī)酸

青貯飼料厭氧發(fā)酵過程中可產(chǎn)生乳酸、乙酸等有機(jī)酸，抑制腐敗相關(guān)細(xì)菌和真菌的生長(zhǎng)，并有效保存青貯營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[3]，但有機(jī)酸作為青貯添加劑對(duì)青貯微生物的影響報(bào)道較少。有研究比較了一年生黑麥草和苜蓿青貯中添加LAB接種劑(LABi，106CFU/g)和甲酸(FA，3 mL/kg)的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2種添加劑均能降低其微生物多樣性，提高青貯品質(zhì)[53]；He等[46]研究發(fā)現(xiàn)，丙酸的加入可以抑制辣木葉青貯和暴露在空氣中的微生物群落和脫酰胺活性。檸檬酸(citric acid，CA)是一種食品添加劑，添加CA可以提高砂仁葉片青貯飼料中LAB、片球菌和乳桿菌的相對(duì)豐度，降低大腸埃氏菌屬-志賀氏菌屬、腸桿菌屬和泛菌屬等不良微生物的相對(duì)豐度[54]；在對(duì)王草(king grass，KG)的研究中發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌和CA處理使KG青貯細(xì)菌多樣性降低，乳桿菌屬的相對(duì)豐度增加，不良菌屬假單胞菌屬的相對(duì)豐度降低，進(jìn)而提高發(fā)酵品質(zhì)[55]；在青貯木薯葉(cassava foliage，CF)中添加CA、蘋果酸(malic acid，MA)及其與植物乳桿菌混合添加，發(fā)現(xiàn)青貯飼料品質(zhì)改善，微生物群落中類芽孢桿菌(平均27.81%)和芽孢桿菌含量(平均16.04%)提高，說明CA和MA可提高CF青貯品質(zhì)，且與植物乳桿菌組合效果更佳[56]。沒食子酸(gallic acid，GA)可以作為一種綠色添加劑，在桑葉和柱花草(Stylosanthesguianensis)青貯飼料中添加GA，梭菌屬和腸桿菌屬的相對(duì)豐度降低，乳酸桿菌屬的相對(duì)豐度增加[57]；另外還發(fā)現(xiàn)GA提高了辣木葉的青貯品質(zhì)、氨肽酶活性和抗氧化能力，其青貯微生物組成也隨之發(fā)生變化[58]。單寧酸(tannic acid，TA)是一種廣泛存在于植物中的多酚，具有抗菌特性和與蛋白質(zhì)結(jié)合的能力，在桑葉和柱花草青貯中添加不同比例TA，均改善了桑葉和柱花草青貯的品質(zhì)，增加了魏斯氏菌屬、不動(dòng)桿菌屬的相對(duì)豐度，降低了梭菌屬的相對(duì)豐度，其中以2% TA為適宜的添加濃度[59]；在團(tuán)花樹樹葉(Neolamarckiacadambaleaf，NCL；富含TA)單獨(dú)青貯或添加聚乙二醇(單寧失活劑)青貯的研究中發(fā)現(xiàn)，添加聚乙二醇處理優(yōu)勢(shì)微生物群落為乳桿菌屬取代。這表明添加聚乙二醇使該原料本身的單寧失活，促進(jìn)了青貯飼料的乳酸發(fā)酵并抑制蛋白質(zhì)降解[60]。

3 小結(jié)與展望

無論是飼草本身附著的還是外源添加的微生物，其組成和數(shù)量都決定著發(fā)酵過程中的青貯微生物群落結(jié)構(gòu)和演替，進(jìn)而影響青貯發(fā)酵品質(zhì)。不同區(qū)域的環(huán)境因素、飼草種類以及青貯添加劑類型都不同程度地影響著飼草青貯微生物多樣性。目前的研究集中在常規(guī)青貯添加劑產(chǎn)生的影響，未來應(yīng)更多的研究新型綠色添加劑，如具有活性成分的植物提取物、具有抑菌活性的代謝產(chǎn)物以及鄉(xiāng)土益生微生物資源及其組合利用。另外，青貯研究手段隨著三代測(cè)序、代謝組、宏基因組和宏轉(zhuǎn)錄組等技術(shù)的成熟與應(yīng)用，在種水平鑒定優(yōu)良青貯微生物，通過差異代謝物、差異基因表達(dá)、功能基因和代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建等，闡明微生物在青貯發(fā)酵中的作用及其對(duì)青貯添加劑的響應(yīng)機(jī)制，為青貯發(fā)酵品質(zhì)的調(diào)控、新型青貯添加劑的研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。