狂犬病診斷方法研究

陳 洲

（北海市動物疫病預防控制中心，廣西北海 536000）

1 前言

狂犬病（rabies，RAB）是由狂犬病病毒（rabies virus，RABV）引起的一種高度致死性人獸共患傳染病，近年來隨著我國寵物行業(yè)的快速發(fā)展，犬科和貓科動物的異地流通加劇，RAB的發(fā)病率呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢，提高RAB的診斷水平對該病的綜合防控至關重要。由于RAB引起的臨床癥狀與其他致病原體導致的腦炎非常相似，故對于RAB的確診需使用實驗室診斷方法，一直以來RAB的實驗室經典診斷方法為快速熒光灶抑制試驗和熒光抗體試驗，但兩種方法存在操作繁瑣、耗時、檢測成本高、對試驗條件和人員要求高等缺點，隨著現(xiàn)代細胞培養(yǎng)技術、免疫學和分子生物學診斷技術的發(fā)展，RAB的新型替代診斷方法得到了快速發(fā)展，本文就RAB的各種診斷方法的研究與應用情況進行綜述，以期為臨床中RAB的快速確診提供參考依據。

2 臨床診斷

依靠本病典型的臨床表現(xiàn)即可做出初步診斷，愈合的咬傷傷口及傷口周圍具有麻木發(fā)癢或蟻走感，臨床表現(xiàn)出極度興奮或煩躁，對風、水、光、聲等外界刺激的敏感性增強，具有“恐水”癥狀，感染后期出現(xiàn)肌肉癱瘓或顱神經癱瘓。

3 實驗室診斷

3.1 熒光抗體試驗

該方法是實驗室診斷RAB抗原的經典方法，將采集的臨床樣品與熒光素標記的抗RAB高免抗體進行反應，通過顯微鏡觀察與抗原結合后的熒光抗體即可判斷出樣品中是否含有RAB抗原。

3.2 熒光灶抑制試驗

該方法是實驗室診斷RAB抗體的經典方法，將采集人或動物的血清與RABV等量混合，置于37℃下中和反應1h，然后將抗原抗體混合物接種細胞并培養(yǎng)1d，次日對接種的細胞進行固定后進行熒光抗體染色，熒光顯微鏡下觀察熒光灶個數，計算血清抗體效價。

3.3 試驗動物接種

將采集的臨床樣品經處理后腦內接種乳鼠，對死亡鼠進行熒光抗體試驗，檢測死亡鼠內是否具有RABV，該方法試驗周期長，費用高，一般當組織病料經熒光抗體試驗檢測為陰性時，需使用該方法進一步檢驗。

3.4 病毒分離培養(yǎng)

將采集的臨床樣品經處理后接種生長良好的細胞系，觀察特異性細胞病變。尹坤等建立了RABV感染鼠原代神經元細胞的模型，表明RABV感染鼠原代神經元細胞后3d病毒的滴度達到峰值，為利用鼠原代神經元細胞培養(yǎng)RABV奠定了基礎。

3.5 RT-PCR方法

自1983年PCR被首次發(fā)現(xiàn)以來，RT-PCR方法就以其快速、簡便、靈敏、特異等特點在分子生物學診斷領域得到了迅速應用。周萍等建立了檢測RABV的RT-PCR方法，該方法的靈敏度可以達到20 FFU/mL，檢測犬瘟熱病毒和犬細小病毒均為陰性，具有良好的特異性和敏感性，特別適用于RAB的病原流行病學調查。

3.6 熒光定量RT-PCR方法

熒光定量RT-PCR方法是結合RT-PCR技術和光譜技術的一種高度靈敏的核酸定量檢測技術，具有靈敏度高、定量準確、全封閉反應等優(yōu)點。高鑫等建立了檢測RABV的熒光定量RT-PCR方法，該方法的靈敏度是常規(guī)RT-PCR方法的100倍，該方法靈敏度高、定量準確、檢測時間短，可用于RAB的流行病學監(jiān)測和疑似病例的快速診斷，是國內RABV實驗室快速檢測方法的一種補充和完善。

3.7 ELISA方法

自1971年ELISA被首次應用測定IgG后，ELISA就以其操作簡單、檢測快速、價格低廉、高通量檢測等特點在免疫學診斷領域得到了迅速應用。目前，國內外研究學者已經研發(fā)出了多種可用于RABV快速診斷ELISA抗體檢測試劑盒，王培等比較分析了6種品牌ELISA抗體檢測試劑盒的有效性，結果顯示不同品牌的商品化試劑盒的檢測效果存在一定的差異，表明商品化ELISA試劑盒在一致性和診斷效能等方面缺乏統(tǒng)一的標準，需要進一步完善。

4 結語

RAB的臨床診斷只能對疫病進行初診，而RAB的各種實驗室診斷方法各有優(yōu)缺點，其中熒光抗體試驗、熒光灶抑制試驗、試驗動物接種等經典診斷方法費時費力，而RT-PCR方法、熒光定量RT-PCR方法、ELISA方法等新型替代方法操作簡單、成本低廉，但尚缺乏統(tǒng)一的標準，故在臨床中應根據自身檢測目的和試驗條件選擇合適的檢測方法。