• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    抗結(jié)核藥物組合藥效篩選研究進(jìn)展

    2021-12-05 22:09:30劉海婷陸宇
    中國(guó)防癆雜志 2021年4期
    關(guān)鍵詞:動(dòng)物模型小鼠模型

    劉海婷 陸宇

    2019年全球新發(fā)1000萬(wàn)例結(jié)核病患者,我國(guó)仍是結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一[1]。雖然我國(guó)藥物敏感結(jié)核病的治愈率達(dá)93%[2],但在耐藥結(jié)核病患者不斷增多的情況下,結(jié)核病的臨床治療變得越來(lái)越復(fù)雜。為降低單藥治療對(duì)細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn),增大臨床治愈的可能性,臨床迫切需要有新作用機(jī)制的抗結(jié)核藥物和高效的藥物組合方案來(lái)最大限度地減少細(xì)菌負(fù)荷,提高治療效果,縮短療程。盡管普遍認(rèn)為抗結(jié)核藥物組合是治療結(jié)核病的一個(gè)潛在工具[3],但并不是任意的藥物組合都對(duì)結(jié)核病的治療有效,這需要通過(guò)體內(nèi)外篩選實(shí)驗(yàn)來(lái)獲得具有高活性的藥物組合。筆者對(duì)近年來(lái)抗結(jié)核藥物組合及體內(nèi)外篩選方法進(jìn)行綜述,以期為Ⅱb期臨床新方案的選擇提供參考。

    一、體外篩選法

    體外篩選法在抗結(jié)核藥物組合的研究中極其重要,常見(jiàn)的有棋盤(pán)法和時(shí)間-殺傷動(dòng)力學(xué)分析法??捎糜谠u(píng)估多種不同作用機(jī)制藥物組合的體外抗結(jié)核活性,為更復(fù)雜的表型研究或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的后續(xù)評(píng)估提供依據(jù)[4]。

    (一)棋盤(pán)法

    棋盤(pán)法是一種基于肉湯培養(yǎng)基中藥物最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)測(cè)定的方法,可以用來(lái)評(píng)估藥物對(duì)細(xì)菌的抑制作用[5],適合2種或3種藥物組合的活性篩選,應(yīng)用非常廣泛。棋盤(pán)法包括瓊脂棋盤(pán)稀釋法、試管棋盤(pán)稀釋法和微量棋盤(pán)稀釋法,又以后者為最常見(jiàn)的聯(lián)合藥物敏感性試驗(yàn)方法[6],該方法在96孔板內(nèi)進(jìn)行,各藥物的二倍稀釋液分別加入到棋盤(pán)的水平方向和垂直方向,一般取6~8個(gè)濃度梯度[7],并設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔,通過(guò)觀(guān)察還原(顏色從藍(lán)色變?yōu)樽仙蚍凵?,表示有?xì)菌生長(zhǎng))或不還原(藍(lán)色,表示由于藥物的抑制而沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng))的顏色變化直觀(guān)地讀取細(xì)菌生長(zhǎng)情況,進(jìn)而確定聯(lián)合用藥中每種藥物的MIC[8]。組合作用是通過(guò)計(jì)算部分抑制濃度(fractional inhibitory concentration,F(xiàn)IC)來(lái)確定的。目前,較為公認(rèn)的FIC法是通過(guò)計(jì)算棋盤(pán)中藥物阻止孔的顏色從藍(lán)色變?yōu)樽仙蛘叻奂t色時(shí)的最低FIC值[9]。

    對(duì)于二維棋盤(pán)法,F(xiàn)IC=(MICA+B/MICA)+(MICB+A/MICB),其中,MICA和MICB分別表示A藥和B藥單獨(dú)作用于結(jié)核分枝桿菌時(shí)的MIC,MICA+B和MICB+A分別表示A藥和B藥聯(lián)合作用后,達(dá)到相同藥效時(shí)對(duì)應(yīng)的A藥和B藥的MIC。當(dāng)FIC≤0.5時(shí),兩藥為協(xié)同作用(定義為兩藥聯(lián)合用藥的MIC比單獨(dú)用藥降低4倍或更大);當(dāng)0.5

    (二)時(shí)間-殺傷動(dòng)力學(xué)分析法

    時(shí)間-殺傷動(dòng)力學(xué)分析法被認(rèn)為是確定抗菌劑間藥物協(xié)同作用的標(biāo)準(zhǔn)參考方法,分為靜態(tài)時(shí)間殺傷法模型和動(dòng)態(tài)藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)(PK/PD)模型。該方法可以通過(guò)在包含各種抗菌劑的肉湯中添加標(biāo)準(zhǔn)接種物來(lái)實(shí)現(xiàn),從含有抗菌劑的肉湯中以不同的時(shí)間間隔進(jìn)行傳代培養(yǎng),通過(guò)連續(xù)采樣來(lái)量化細(xì)菌負(fù)荷隨時(shí)間的變化。藥物的協(xié)同作用定義為:與單一藥物最好的療效相比,聯(lián)合用藥作用后活菌數(shù)減少量≥2 log10菌落形成單位(CFU)/ml被認(rèn)為是協(xié)同作用,1 log10 CFU/ml≤減少量≤2 log10 CFU/ml被認(rèn)為是加性的,減少量≤1 log10 CFU/ml被認(rèn)為是無(wú)關(guān)作用,而活菌數(shù)增加量≥2 log10 CFU/ml被認(rèn)為是拮抗作用[12]。

    1.靜態(tài)時(shí)間殺傷法:是將細(xì)菌在含藥物組合的液體培養(yǎng)管中進(jìn)行培養(yǎng),在間隔時(shí)間點(diǎn)從每個(gè)試管中取出一定量的液體進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)的方法。其模型是評(píng)估細(xì)菌對(duì)藥物濃度隨時(shí)間固定的反應(yīng),且能同時(shí)對(duì)多種藥物的抗菌效果進(jìn)行評(píng)估。衡量標(biāo)準(zhǔn)包括CFU計(jì)數(shù)或替代物。

    2.動(dòng)態(tài)PK/PD模型法:動(dòng)態(tài)PK/PD模型又稱(chēng)中空纖維系統(tǒng)(hollow fibersystem,HFS)模型,是一種常用的擴(kuò)散模型,于1972年由Knazek等[13]提出。因其可承受更高的細(xì)菌負(fù)荷,已成為一種動(dòng)態(tài)評(píng)估藥物對(duì)細(xì)菌作用的方法[14],并被歐洲藥品管理局(European Medicines Agency,EMA)鑒定為一種用于支持抗結(jié)核治療方案選擇和開(kāi)發(fā)的方法[15]。該模型以不同時(shí)間間隔從外圍隔室進(jìn)行采樣的方式,獲得量化的藥物濃度和細(xì)菌計(jì)數(shù)。雖然HFS模型在抗結(jié)核藥物的研究中應(yīng)用很廣,但也具有一定的局限性,如HFS-TB不能解釋藥物與血漿蛋白的潛在結(jié)合,也不能在宿主的防御下或其他可能出現(xiàn)的復(fù)雜結(jié)節(jié)性病變的情況下解釋抗菌功效[16-17]。

    二、體內(nèi)篩選法

    經(jīng)體外篩選獲得的有效抗結(jié)核藥物組合方案通常要在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行藥物組合療效的進(jìn)一步驗(yàn)證,通常包括動(dòng)物模型法和臨床試驗(yàn)法。

    (一)動(dòng)物模型法

    在抗結(jié)核新藥和疫苗的研發(fā)過(guò)程中,動(dòng)物模型一直是其關(guān)鍵組成部分[18-20]??菇Y(jié)核新藥的研究可以在豚鼠、小鼠、兔子和非人靈長(zhǎng)類(lèi)等不同動(dòng)物模型中展開(kāi),但進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)的方法有所差異。例如,鼠和兔作為動(dòng)物模型時(shí),主要通過(guò)菌落計(jì)數(shù)的下降和停止治療后沒(méi)有復(fù)發(fā)來(lái)判定治療有效[21];而對(duì)于非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物來(lái)說(shuō),不僅可以采用菌落計(jì)數(shù),還可以根據(jù)氟代脫氧葡萄糖正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描顯像技術(shù)(FDG PET-CT)的方法來(lái)判定藥物的療效[22]。但由于遺傳性、安全性和倫理學(xué)的限制,近年來(lái)抗結(jié)核藥物組合療效的研究模型主要為小鼠和豚鼠模型。

    小鼠是抗結(jié)核藥物組合研究中最常用的動(dòng)物模型,具有體積相對(duì)較小和成本較低的優(yōu)點(diǎn),是藥物組合研究中的最佳選擇。在常用的小鼠模型(如BALB/c和C57BL/6)中,結(jié)核分枝桿菌主要侵襲小鼠肺部,但僅發(fā)展為肺部炎性而非壞死性病變,與人類(lèi)結(jié)核病和其他動(dòng)物模型相反;而C3HeB/FeJ小鼠模型感染結(jié)核分枝桿菌后,其肺部發(fā)生病變的病理與人類(lèi)接近。有研究發(fā)現(xiàn),肺部病理的不同可能會(huì)影響藥物的分布,從而影響藥物的療效,如Irwin等[23]在BALB/c和C3HeB/FeJ小鼠模型中檢測(cè)了貝達(dá)喹啉和吡嗪酰胺單獨(dú)和聯(lián)合給藥時(shí)的治療反應(yīng),發(fā)現(xiàn)BALB/c小鼠對(duì)兩種藥品均表現(xiàn)出高度一致的治療反應(yīng),而C3HeB/FeJ小鼠則表現(xiàn)出對(duì)藥品敏感和不敏感的雙峰反應(yīng)結(jié)果。

    豚鼠是結(jié)核病研究中另一個(gè)重要的動(dòng)物模型。與小鼠不同,豚鼠對(duì)結(jié)核分枝桿菌具有高度的敏感性,在其感染結(jié)核分枝桿菌后會(huì)發(fā)生與人類(lèi)結(jié)核病病理相似的干酪樣壞死。雖然豚鼠已成為證明鏈霉素、異煙肼和乙胺丁醇抗結(jié)核活性的實(shí)驗(yàn)性化療動(dòng)物模型的較優(yōu)選擇,但其作為實(shí)驗(yàn)性化療模型的特性仍然很差,且成本較高,仍然不是藥物組合研究中的最佳選擇。從臨床菌株中觀(guān)察到,某些新出現(xiàn)的臨床分離株在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)要好于豚鼠,因而,結(jié)核病模型的建立在小鼠中容易實(shí)現(xiàn);其次,盡管豚鼠的肺部有大面積壞死病變,但它們?nèi)阅艽婊詈荛L(zhǎng)一段時(shí)間[24],這將影響藥物療效的評(píng)估。

    (二)臨床試驗(yàn)法

    臨床試驗(yàn)法在抗結(jié)核藥物組合的篩選中占據(jù)了重要的地位,許多藥物組合方案經(jīng)過(guò)一系列的體外抗結(jié)核活性篩選,即可作為臨床前推進(jìn)藥物在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行藥效評(píng)估。然而,任何一種體外模型和動(dòng)物模型都不能真實(shí)反映藥物對(duì)人體的作用,還需進(jìn)行藥物在人體中安全性和有效性的評(píng)估。

    抗結(jié)核藥物臨床試驗(yàn)分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期,其中Ⅰ期試驗(yàn)主要是評(píng)價(jià)藥物的安全性;Ⅱ期試驗(yàn)旨在研究抗結(jié)核藥物的早期殺菌活性(early bactericidal activity,EBA)??菇Y(jié)核藥物早期殺菌活性的測(cè)定是一種快速評(píng)估抗結(jié)核新藥和藥物組合有效性的方法[25-26],通過(guò)檢測(cè)患者抗結(jié)核治療早期痰中活的結(jié)核分枝桿菌CFU的下降,來(lái)確定藥物殺死涂陽(yáng)肺結(jié)核患者痰中活菌的能力,通常計(jì)算治療前14 d CFU計(jì)數(shù)的下降率[27]。但EBA的臨床研究也有其局限性,既無(wú)法評(píng)估藥物對(duì)休眠結(jié)核分枝桿菌的活性,也無(wú)法確定單一藥物對(duì)其聯(lián)合作用的相對(duì)貢獻(xiàn)[28]。關(guān)鍵Ⅲ期臨床試驗(yàn)的主要評(píng)價(jià)終點(diǎn)是治療6個(gè)月后痰培養(yǎng)陽(yáng)性患者的比例和2年隨訪(fǎng)期內(nèi)復(fù)發(fā)患者的比例,其中治療2個(gè)月后的痰培養(yǎng)狀態(tài)(“陽(yáng)性”或“陰性”)被認(rèn)為是結(jié)核病終點(diǎn)主要療效的潛在替代指標(biāo)。

    三、抗結(jié)核藥物組合新方案

    目前,有14種抗結(jié)核新藥處于臨床試驗(yàn)階段,已有8種抗結(jié)核藥品用于治療藥物敏感結(jié)核病,18種用于耐藥結(jié)核病,還有8種用于結(jié)核分枝桿菌潛伏感染(LTBI)者的預(yù)防性治療方案處于臨床試驗(yàn)階段[29]。

    (一)藥物敏感結(jié)核病

    隨著新藥的開(kāi)發(fā)及藥物的重新使用,一些新的藥物方案逐步走向臨床,旨在縮短和簡(jiǎn)化藥物敏感結(jié)核病的治療方案,以提高患者依從性。

    在小鼠結(jié)核病模型研究中發(fā)現(xiàn)含大劑量利福平的方案可明顯縮短藥物敏感結(jié)核病的治療時(shí)間[30-31],在BALB/c小鼠結(jié)核病模型中,增加利福霉素類(lèi)藥物的暴露,特別是用每日高劑量利福噴丁代替利福平,可以明顯縮短無(wú)復(fù)發(fā)和治愈所需的治療時(shí)間[32-34]。而在藥物敏感結(jié)核病治療的Ⅱ期臨床試驗(yàn)(NCT00694629)中發(fā)現(xiàn),較高的利福噴丁暴露與較高的殺菌活性密切相關(guān),且目前正在進(jìn)行一項(xiàng)確定高劑量的利福噴丁替代利福平是否可以將藥物敏感結(jié)核病的治療時(shí)間縮短至4個(gè)月的Ⅲ期臨床試驗(yàn)(NCT02410772)。而在前期對(duì)BALB/c小鼠模型的研究中,比較了在6個(gè)月的標(biāo)準(zhǔn)抗結(jié)核方案中加入氯法齊明與6個(gè)月的標(biāo)準(zhǔn)抗結(jié)核方案的抗結(jié)核活性,發(fā)現(xiàn)含有氯法齊明的方案具有顯著的抗結(jié)核活性,且可將治愈患者的療程縮短2個(gè)月[35-36]。目前Ⅱ/Ⅲ期 TRUNCATE-TB研究(NCT03474198)正在評(píng)估將氯法齊明添加到一線(xiàn)抗結(jié)核方案中的療效。關(guān)于優(yōu)化使用經(jīng)批準(zhǔn)的藥品并改進(jìn)配方和藥片數(shù)量的研究也在進(jìn)行中。在一個(gè)多臂多階段(multi-arm multi-stage,MAMS)試驗(yàn)PanACEA (NCT01785186)研究中,調(diào)查了利福平(分別為20 mg/kg和35 mg/kg)聯(lián)合莫西沙星和SQ109與含10 mg/kg 利福平的標(biāo)準(zhǔn)方案對(duì)肺結(jié)核患者的療效,發(fā)現(xiàn)含35 mg/kg 的利福平是安全的,且在8周培養(yǎng)陰轉(zhuǎn)的時(shí)間短于含20 mg/kg 和10 mg/kg 利福平的方案,可能縮短結(jié)核病的治療時(shí)間[37]。

    (二)耐藥結(jié)核病

    目前,WHO推薦的常規(guī)耐多藥結(jié)核病的治療方案復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)(至少20個(gè)月)、費(fèi)用高、耐受性差。隨著人們對(duì)結(jié)核分枝桿菌耐藥性認(rèn)識(shí)的不斷加深,人們?cè)絹?lái)越認(rèn)識(shí)到重新利用藥物[如利奈唑胺(Lzd)和氯法齊明]和新藥[如貝達(dá)喹啉(Bdq)和德拉馬尼]有著重要的作用。

    近年來(lái),出現(xiàn)了許多旨在解決耐多藥結(jié)核病的新療法。2016年,WHO通過(guò)的一項(xiàng)為期9~11個(gè)月的Bangladesh方案[38][強(qiáng)化期為4~6個(gè)月的卡那霉素、加替沙星、丙硫異煙胺、氯法齊明、吡嗪酰胺(PZA)、高劑量異煙肼和乙胺丁醇,鞏固期為5個(gè)月的加替沙星、氯法齊明、吡嗪酰胺和乙胺丁醇]被證明對(duì)耐多藥結(jié)核病患者有效。在小鼠結(jié)核病模型研究中發(fā)現(xiàn)含普瑞瑪尼(PA-824)、莫西沙星(Mfx)和吡嗪酰胺的新方案(Pa-M-Z)具有優(yōu)于當(dāng)前一線(xiàn)R-H-Z方案(R:利福平,H:異煙肼,Z:吡嗪酰胺)的殺菌活性[39-40],隨后的一項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照Ⅱ期臨床研究NC-002試驗(yàn)(NCT01498419)證實(shí)了Pa-M-Z方案的有效性,表明這種新方案的EBA不亞于標(biāo)準(zhǔn)抗結(jié)核藥品[41],之后在小鼠結(jié)核病模型中發(fā)現(xiàn),將貝達(dá)喹啉和普瑞瑪尼與利奈唑胺(B-Pa-L方案)或莫西沙星和吡嗪酰胺(B-Pa-M-Z方案)聯(lián)合的新方案可明顯縮短抗結(jié)核療程,并在初步臨床試驗(yàn)中取得了盡如所期的結(jié)果;且與標(biāo)準(zhǔn)方案相比,B-Pa-M-Z方案具有更好的殺菌活性,可將預(yù)防復(fù)發(fā)所需的治療持續(xù)時(shí)間縮短2.5~3.5個(gè)月[42]。在隨后的第2階段NC-005試驗(yàn)(NCT02193776)中,接受B-Pa-M-Z方案治療的吡嗪酰胺易感的耐多藥結(jié)核病患者的痰培養(yǎng)陰轉(zhuǎn)率明顯快于接受標(biāo)準(zhǔn)方案治療的藥物敏感結(jié)核病患者[43];同樣,與小鼠結(jié)核病模型研究中的標(biāo)準(zhǔn)方案相比,B-Pa-L方案也具有較好的殺菌活性[44],雖然B-Pa-L方案不能如B-Pa-M-Z方案那樣快速治愈小鼠,但其具有更廣的活性范圍。在隨后的NiX-TB試驗(yàn)(NCT02333799)中評(píng)估了為期6個(gè)月的貝達(dá)喹啉聯(lián)合普瑞瑪尼和利奈唑胺(600 mg/次,2次/d)的方案,發(fā)現(xiàn)無(wú)復(fù)發(fā)患者的比例達(dá)到了87%[45]。最近,一項(xiàng)針對(duì)耐藥結(jié)核病的end TB試驗(yàn)(NCT03259269)評(píng)估了含貝達(dá)喹啉和德拉馬尼新方案的安全性和有效性[46]。

    四、總結(jié)與展望

    新藥物組合方案需經(jīng)過(guò)體外和體內(nèi)篩選才能應(yīng)用于臨床,而評(píng)價(jià)藥物組合抗結(jié)核活性的實(shí)驗(yàn)方法是將其應(yīng)用于臨床前的前期藥效篩選的一個(gè)重要手段,它不僅能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模組合活性篩選的測(cè)定,還能節(jié)約大量的實(shí)驗(yàn)時(shí)間和成本。目前,體外抗結(jié)核藥物組合藥效篩選方法多種多樣,但尚缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),仍需進(jìn)一步完善。幸運(yùn)的是,隨著一些新技術(shù)的發(fā)展,尤其是計(jì)算機(jī)技術(shù)與數(shù)學(xué)模型的引入,為抗結(jié)核藥物的藥效篩選提供了新的方向。

    猜你喜歡
    動(dòng)物模型小鼠模型
    一半模型
    肥胖中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    胃癌前病變動(dòng)物模型復(fù)制實(shí)驗(yàn)進(jìn)展
    重要模型『一線(xiàn)三等角』
    小鼠大腦中的“冬眠開(kāi)關(guān)”
    潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    重尾非線(xiàn)性自回歸模型自加權(quán)M-估計(jì)的漸近分布
    米小鼠和它的伙伴們
    3D打印中的模型分割與打包
    糖尿病性視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    精品无人区乱码1区二区| 日日夜夜操网爽| 一区在线观看完整版| 亚洲九九香蕉| 亚洲第一青青草原| 国产真人三级小视频在线观看| 午夜福利18| 91成人精品电影| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一本久久中文字幕| 我的亚洲天堂| 午夜视频精品福利| 国产一区二区激情短视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久影院123| 亚洲av五月六月丁香网| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲熟妇熟女久久| 免费av毛片视频| 国产高清有码在线观看视频 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久热在线av| 婷婷丁香在线五月| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久久国产a免费观看| 天堂动漫精品| АⅤ资源中文在线天堂| 精品乱码久久久久久99久播| 他把我摸到了高潮在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 18禁观看日本| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久精品91无色码中文字幕| www.www免费av| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久99久视频精品免费| 成年人黄色毛片网站| 亚洲,欧美精品.| 丁香欧美五月| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲国产精品成人综合色| 91成年电影在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 一二三四社区在线视频社区8| av视频免费观看在线观看| 国产xxxxx性猛交| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 叶爱在线成人免费视频播放| 狂野欧美激情性xxxx| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 婷婷六月久久综合丁香| 国产色视频综合| 两个人看的免费小视频| 18禁观看日本| 99国产精品99久久久久| 国产精品影院久久| 天天添夜夜摸| 国产亚洲欧美98| 午夜日韩欧美国产| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 伦理电影免费视频| 丝袜在线中文字幕| 国产精品日韩av在线免费观看 | 国产一区在线观看成人免费| а√天堂www在线а√下载| 性欧美人与动物交配| 国产亚洲精品一区二区www| 村上凉子中文字幕在线| 国产成人精品无人区| 人妻久久中文字幕网| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| av片东京热男人的天堂| 一边摸一边抽搐一进一出视频| av在线播放免费不卡| 亚洲av熟女| 国产亚洲欧美精品永久| 久久香蕉精品热| 午夜福利,免费看| 波多野结衣一区麻豆| 欧美最黄视频在线播放免费| 日韩成人在线观看一区二区三区| 99riav亚洲国产免费| 黄色a级毛片大全视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久久久久国产a免费观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 9热在线视频观看99| 国产免费av片在线观看野外av| 黄片大片在线免费观看| 人人澡人人妻人| 欧美亚洲日本最大视频资源| 91成年电影在线观看| 在线av久久热| 欧美不卡视频在线免费观看 | 男人舔女人下体高潮全视频| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲黑人精品在线| 9191精品国产免费久久| 女警被强在线播放| 免费不卡黄色视频| 热re99久久国产66热| 一级毛片精品| 欧美激情久久久久久爽电影 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲成人国产一区在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 成人免费观看视频高清| 亚洲黑人精品在线| 久久久国产成人免费| aaaaa片日本免费| 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美一级a爱片免费观看看 | 99riav亚洲国产免费| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| av天堂久久9| 亚洲午夜理论影院| 日韩欧美一区视频在线观看| 天天添夜夜摸| 亚洲精品久久国产高清桃花| 一本大道久久a久久精品| 自线自在国产av| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 99riav亚洲国产免费| 国产熟女午夜一区二区三区| 99久久综合精品五月天人人| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲国产欧美网| 免费无遮挡裸体视频| 波多野结衣高清无吗| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲男人天堂网一区| 两个人视频免费观看高清| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 日韩三级视频一区二区三区| a级毛片在线看网站| 狂野欧美激情性xxxx| 国产精品免费视频内射| 国产一区二区在线av高清观看| 极品人妻少妇av视频| 不卡av一区二区三区| 亚洲美女黄片视频| 久热这里只有精品99| 日本在线视频免费播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美成人免费av一区二区三区| 国内精品久久久久精免费| 中文字幕av电影在线播放| 色综合婷婷激情| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| av超薄肉色丝袜交足视频| x7x7x7水蜜桃| 精品第一国产精品| 99国产精品一区二区三区| 久久国产精品影院| 亚洲精品一区av在线观看| 黄片小视频在线播放| av视频在线观看入口| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 黄色视频,在线免费观看| 国产国语露脸激情在线看| 国产免费男女视频| 亚洲精品美女久久av网站| 女人精品久久久久毛片| 黄色 视频免费看| 极品教师在线免费播放| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 老司机靠b影院| 国产精品久久久久久精品电影 | 亚洲av电影在线进入| 制服诱惑二区| 久久伊人香网站| 国内精品久久久久精免费| 天天一区二区日本电影三级 | 一区二区三区精品91| 正在播放国产对白刺激| 脱女人内裤的视频| 国产精品 国内视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 午夜久久久久精精品| 亚洲三区欧美一区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 叶爱在线成人免费视频播放| av片东京热男人的天堂| 少妇熟女aⅴ在线视频| 美女大奶头视频| av网站免费在线观看视频| 亚洲第一电影网av| 激情视频va一区二区三区| 国产高清激情床上av| 日韩高清综合在线| 天堂影院成人在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲国产精品999在线| 两个人视频免费观看高清| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 天天添夜夜摸| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产精品,欧美在线| 天天添夜夜摸| 99久久精品国产亚洲精品| 黄色丝袜av网址大全| 欧美精品亚洲一区二区| 99国产精品一区二区三区| 看免费av毛片| 黄色 视频免费看| 免费高清在线观看日韩| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 色尼玛亚洲综合影院| 人成视频在线观看免费观看| 国产国语露脸激情在线看| 在线观看舔阴道视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产高清视频在线播放一区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产精品九九99| 黄色视频,在线免费观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 首页视频小说图片口味搜索| 中文字幕久久专区| 亚洲中文字幕日韩| 在线视频色国产色| 国产精品精品国产色婷婷| 极品人妻少妇av视频| 91精品国产国语对白视频| 在线观看66精品国产| 精品一品国产午夜福利视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲人成电影免费在线| 久久精品影院6| 夜夜爽天天搞| 天堂影院成人在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 99国产精品免费福利视频| 精品国产一区二区久久| 男男h啪啪无遮挡| 成人特级黄色片久久久久久久| 精品一品国产午夜福利视频| 大陆偷拍与自拍| 欧美日韩一级在线毛片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产亚洲精品久久久久5区| 国内精品久久久久精免费| 久久亚洲精品不卡| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 91字幕亚洲| 最近最新免费中文字幕在线| 一本大道久久a久久精品| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产国语露脸激情在线看| 国产伦一二天堂av在线观看| 露出奶头的视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲中文日韩欧美视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久伊人香网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| www.自偷自拍.com| 女警被强在线播放| 欧美一区二区精品小视频在线| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 色av中文字幕| 一级a爱片免费观看的视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 少妇粗大呻吟视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 麻豆av在线久日| 色婷婷久久久亚洲欧美| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲欧美激情综合另类| 波多野结衣高清无吗| 麻豆国产av国片精品| 国产精品1区2区在线观看.| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 美国免费a级毛片| 久久久久久国产a免费观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 丝袜美足系列| 国产三级黄色录像| 久久国产亚洲av麻豆专区| 十八禁网站免费在线| 日韩欧美国产在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 久久伊人香网站| 99re在线观看精品视频| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 女警被强在线播放| 好男人电影高清在线观看| 男人操女人黄网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 男人操女人黄网站| 悠悠久久av| 男人的好看免费观看在线视频 | 中文字幕精品免费在线观看视频| 免费观看人在逋| 黄色毛片三级朝国网站| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成熟少妇高潮喷水视频| 一区福利在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲欧美日韩无卡精品| 操美女的视频在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 黄色 视频免费看| 成人手机av| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲午夜理论影院| 叶爱在线成人免费视频播放| 搞女人的毛片| 欧美激情高清一区二区三区| 国产精品亚洲美女久久久| 免费高清视频大片| 亚洲免费av在线视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 波多野结衣一区麻豆| 无限看片的www在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 最新美女视频免费是黄的| 国产欧美日韩一区二区三| 国产精品永久免费网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久热在线av| 老汉色av国产亚洲站长工具| 91精品国产国语对白视频| 国产一区二区激情短视频| 窝窝影院91人妻| 99精品欧美一区二区三区四区| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产精品久久久av美女十八| 欧美另类亚洲清纯唯美| 在线永久观看黄色视频| 9色porny在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 久久青草综合色| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产成人av激情在线播放| 深夜精品福利| 丁香六月欧美| 久久久国产精品麻豆| 丝袜美足系列| 日本免费a在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲九九香蕉| 日韩精品中文字幕看吧| 1024视频免费在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产午夜福利久久久久久| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲成人久久性| 日韩大码丰满熟妇| 黄色 视频免费看| 欧美色视频一区免费| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 欧美日韩福利视频一区二区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 女警被强在线播放| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 一级毛片女人18水好多| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产乱人伦免费视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩高清综合在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久热这里只有精品99| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲午夜理论影院| av视频在线观看入口| 国产精品99久久99久久久不卡| 1024视频免费在线观看| 黄色 视频免费看| 一进一出抽搐动态| 色在线成人网| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 午夜免费观看网址| 我的亚洲天堂| 精品久久久久久久毛片微露脸| 午夜福利影视在线免费观看| 人成视频在线观看免费观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 好男人在线观看高清免费视频 | 成在线人永久免费视频| 亚洲国产精品合色在线| 午夜免费激情av| 亚洲成人久久性| 精品无人区乱码1区二区| 午夜福利18| 成人亚洲精品av一区二区| 在线永久观看黄色视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲九九香蕉| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 在线观看免费日韩欧美大片| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 欧美丝袜亚洲另类 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 美女免费视频网站| 制服人妻中文乱码| 国产精品日韩av在线免费观看 | 丝袜人妻中文字幕| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久久国产精品麻豆| 丁香欧美五月| 禁无遮挡网站| 色播在线永久视频| 免费av毛片视频| 国内精品久久久久久久电影| 妹子高潮喷水视频| 麻豆av在线久日| 欧美不卡视频在线免费观看 | 欧美国产精品va在线观看不卡| or卡值多少钱| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品二区激情视频| 日韩欧美在线二视频| 免费少妇av软件| 女人被狂操c到高潮| 久久久久亚洲av毛片大全| 一区在线观看完整版| 一级毛片精品| 成在线人永久免费视频| 国产乱人伦免费视频| 亚洲成av人片免费观看| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 一二三四社区在线视频社区8| 在线国产一区二区在线| 日本黄色视频三级网站网址| 制服诱惑二区| 午夜免费成人在线视频| 成人亚洲精品av一区二区| 日韩欧美三级三区| 久久精品国产综合久久久| 大型av网站在线播放| 激情视频va一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲美女黄片视频| 中文字幕最新亚洲高清| videosex国产| 欧美日韩精品网址| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日韩精品青青久久久久久| 成人三级做爰电影| 日韩欧美三级三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| a级毛片在线看网站| 成人av一区二区三区在线看| 大码成人一级视频| 亚洲男人天堂网一区| 精品国产国语对白av| 电影成人av| 国产精品综合久久久久久久免费 | 少妇粗大呻吟视频| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产伦一二天堂av在线观看| 十八禁人妻一区二区| 好男人电影高清在线观看| 成人三级做爰电影| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美中文综合在线视频| 国产三级黄色录像| 成年版毛片免费区| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲中文av在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 精品欧美国产一区二区三| 午夜视频精品福利| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲国产精品sss在线观看| 一进一出抽搐动态| 老熟妇仑乱视频hdxx| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产成人欧美| 午夜精品久久久久久毛片777| 午夜福利高清视频| 黄色片一级片一级黄色片| 一二三四在线观看免费中文在| 免费人成视频x8x8入口观看| 精品久久久精品久久久| 天天添夜夜摸| 午夜免费鲁丝| 99在线人妻在线中文字幕| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产一卡二卡三卡精品| 国产片内射在线| 国产主播在线观看一区二区| 欧美丝袜亚洲另类 | 精品午夜福利视频在线观看一区| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 亚洲少妇的诱惑av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 午夜老司机福利片| 国产男靠女视频免费网站| av片东京热男人的天堂| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲欧美精品综合久久99| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲欧美激情在线| tocl精华| 国产成人欧美| 国产麻豆69| 国产亚洲精品第一综合不卡| 女人被狂操c到高潮| 午夜福利欧美成人| www.熟女人妻精品国产| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲色图综合在线观看| 久久久久久大精品| 一本综合久久免费| 国产成人精品无人区| 一级a爱视频在线免费观看| 久久九九热精品免费| 欧美一区二区精品小视频在线| 99久久精品国产亚洲精品| 午夜福利18| 亚洲avbb在线观看| av视频免费观看在线观看| 色av中文字幕| 宅男免费午夜| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美日韩乱码在线| 国产乱人伦免费视频| 十八禁人妻一区二区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 热99re8久久精品国产| 免费看a级黄色片| 日韩欧美在线二视频| 国产高清激情床上av| 久久人妻av系列| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品一区二区免费欧美| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 免费观看精品视频网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲专区中文字幕在线| 操出白浆在线播放| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产成人免费无遮挡视频| 男女之事视频高清在线观看| 国产乱人伦免费视频| 禁无遮挡网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产av又大| 最好的美女福利视频网| 国产激情久久老熟女| 亚洲av美国av| 中文字幕高清在线视频| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲美女黄片视频| 黄色丝袜av网址大全| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 日韩高清综合在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 色综合欧美亚洲国产小说| 99热只有精品国产| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 嫩草影视91久久| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产成年人精品一区二区| 久久青草综合色|