趙于華
(江蘇省射陽(yáng)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,江蘇 射陽(yáng) 224300)
弓形蟲(chóng)病世界范圍內(nèi)均有分布,多種動(dòng)物均會(huì)感染,但豬會(huì)大批發(fā)病,各年齡、性別的豬都易感,死亡率高,給生豬養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本病無(wú)明顯的季節(jié)性,但夏、秋季節(jié)較為多發(fā)[1]。人、畜禽和其他野生動(dòng)物為弓形蟲(chóng)的中間宿主,貓科動(dòng)物是弓形蟲(chóng)的終末宿主。在我國(guó),弓形蟲(chóng)病被列為二類(lèi)動(dòng)物疫??;臨床上,豬弓形蟲(chóng)還經(jīng)常與附紅細(xì)胞體病、巴氏桿菌屬病、豬偽狂犬病等多種細(xì)菌病或病毒病混合感染,必須加以重視。
不同發(fā)育階段的弓形蟲(chóng)有不同的形態(tài),主要有滋養(yǎng)體、包囊、裂殖體、配子體和卵囊5種。滋養(yǎng)體和包囊主要存在于中間宿主和終末宿主腸道外的組織細(xì)胞內(nèi);裂殖體、配子體和卵囊只存在于終末宿主的腸道上皮細(xì)胞內(nèi),滋養(yǎng)體、包囊以及卵囊對(duì)中間宿主和終末宿主都具有感染性[2]。
多種動(dòng)物均可感染,但多數(shù)表現(xiàn)出隱性感染。草食動(dòng)物大多由于進(jìn)食被蟲(chóng)卵污染的飼料、飲水及含有弓形蟲(chóng)的肉屑導(dǎo)致感染;食肉的哺乳動(dòng)物主要由于進(jìn)食其他動(dòng)物體內(nèi)的蟲(chóng)體誘發(fā)感染;人類(lèi)和牛、羊、豬等哺乳動(dòng)物可通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)行垂直傳播。
豬和羊是家畜中較為易感的動(dòng)物,豬群最為易感,不同年齡、品種、性別的豬都能感染發(fā)病,2~4月齡的仔豬發(fā)病率和病死率比成年豬高,妊娠母豬感染后,會(huì)發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、產(chǎn)畸形胎,造成后代仔豬存活率下降。
1.4.1 地理氣候條件
豬弓形蟲(chóng)病多發(fā)生于夏、秋氣候溫暖潮濕的季節(jié),我國(guó)多數(shù)地區(qū)5-10月發(fā)病率較高。
1.4.2 生活習(xí)慣
某些地區(qū)的人有吃生肉的習(xí)慣,食入未經(jīng)高溫或其他方法處理的生肉,極易感染弓形蟲(chóng)病;其次,部分偏遠(yuǎn)地區(qū)的人,由于衛(wèi)生條件和基礎(chǔ)設(shè)施不達(dá)標(biāo),會(huì)隨意堆放人和畜禽的糞便,若其他動(dòng)物誤食含有包囊或卵囊的糞便或被糞便污染的飼料或飲水,也會(huì)誘發(fā)弓形蟲(chóng)病。
豬弓形蟲(chóng)病的臨床癥狀與豬流感、豬瘟類(lèi)似。發(fā)病初期病豬體溫升高,呈稽留熱,可達(dá)41℃左右,持續(xù)7 d左右。鼻鏡干燥,精神沉郁,食欲減退或廢絕。喘氣咳嗽,呼吸急促,有時(shí)伴有漿液性或膿性鼻液。有時(shí)會(huì)出現(xiàn)便秘,后期由便秘變?yōu)楦篂a。隨著病情的發(fā)展,病豬的頭部、耳尖和體表會(huì)發(fā)紺,部分病豬耳部出現(xiàn)痂皮,甚至干性壞死。有的病豬會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)癥狀,如行動(dòng)遲緩、不喜運(yùn)動(dòng)、后肢癱軟。病情嚴(yán)重時(shí)呼吸困難,口流泡沫,呈腹式呼吸,出現(xiàn)犬坐姿勢(shì),甚至窒息死亡。
發(fā)病豬無(wú)明顯臨床癥狀,即使發(fā)病也可自行康復(fù),但營(yíng)養(yǎng)不良、生長(zhǎng)緩慢,變成僵豬。
剖檢病豬可見(jiàn)肝臟腫大,呈紅灰色,表面有散在的出血點(diǎn)和針尖大小的米黃色壞死灶。肺臟水腫、充血、出血,肺間質(zhì)水腫增寬,切面有泡沫樣液體流出,有時(shí)可看見(jiàn)蟲(chóng)體。腹腔和腸腔有淡黃色膠凍樣液體滲出;腸系膜淋巴結(jié)腫大呈索狀,切面外翻呈花斑狀;盲腸和結(jié)腸有散在的米粒大灰白色壞死灶,腸黏膜充血,并伴有卡他性炎癥[3]。腎臟腫脹,呈黃褐色,漿膜上有散在的出血點(diǎn)。脾臟腫大,呈棕紅色,剝離較難。胃黏膜發(fā)生腫脹、充血,并存在針尖大小的出血點(diǎn)。
4.1.1 直接涂片法
可以取患急性弓形蟲(chóng)病的病豬的肺臟、肝臟、淋巴結(jié)、腹腔積液或腦脊液制成涂片,用姬姆薩或瑞氏染色后鏡檢;也可將淋巴組織研碎,加生理鹽水過(guò)濾,取沉淀物染色鏡檢,若見(jiàn)到數(shù)量不等,有半月形、香蕉形、梨形或梭形,一端鈍、一端尖的滋養(yǎng)體,可初步判斷為弓形蟲(chóng)。這種方法操作簡(jiǎn)單,對(duì)操作人員要求低,但敏感性較低,耗時(shí)長(zhǎng),存在假陰性,容易漏診[4]。
4.1.2 動(dòng)物接種試驗(yàn)
工作人員可采集病死豬的淋巴結(jié)、肺臟、肝臟等組織,加入病料10倍體積的滅菌PBS研磨,并加入適量的青鏈霉素,于室溫條件下放置1 h,取0.5~1 mL上清液腹腔接種給小鼠,觀察小鼠是否會(huì)出現(xiàn)癥狀,隔離飼養(yǎng)1~3周后抽取小鼠的腹腔積液進(jìn)行姬姆薩染色、鏡檢,弓形蟲(chóng)的胞漿被染成淡藍(lán)色,核被染成深藍(lán)色,且核處于中央或偏向較鈍的一端。若每個(gè)視野可見(jiàn)到1~5個(gè)蟲(chóng)體即可確診為豬弓形蟲(chóng)病。此法耗時(shí)長(zhǎng),容易漏診,不適宜大面積診斷。
主要有凝集試驗(yàn)、ELISA試驗(yàn)和斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)。凝集試驗(yàn)包括直接凝集試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)和改良凝集試驗(yàn)。
4.2.1 凝集試驗(yàn)
間接血凝試驗(yàn)適用于大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查;改良凝集試驗(yàn)適用于畜群血清學(xué)檢測(cè),且可作為檢測(cè)組織液的候選方法,但此法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力,不宜在基層推廣。
4.2.2 ELISA試驗(yàn)
ELISA試驗(yàn)靈敏度高、特異性強(qiáng)、出結(jié)果快,可在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)上千份樣本,可作為養(yǎng)豬場(chǎng)大規(guī)模篩查弓形蟲(chóng)抗體的首選方法。
4.2.3 斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)
斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)是將NC膜、尼龍膜作為載體,利用微孔膜的過(guò)濾性和毛細(xì)管的作用,使陽(yáng)性樣本在膜上出現(xiàn)有色斑點(diǎn),以此來(lái)判定是否存在弓形蟲(chóng),此法可在幾分鐘之內(nèi)出現(xiàn)結(jié)果,但普及還不算廣泛。
此外,免疫學(xué)診斷方法還有免疫磁性微球技術(shù)、碳粒凝集試驗(yàn)、色素試驗(yàn)等,但這些技術(shù)要么靈敏度不高,要么操作復(fù)雜,在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用范圍較窄。
比如PCR擴(kuò)增、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增等。
4.3.1 PCR擴(kuò)增
根據(jù)弓形蟲(chóng)毒株的保守基因設(shè)計(jì)特異性引物,以提取的發(fā)病豬的肝臟、肺臟、腸道等病變組織DNA為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將PCR產(chǎn)物于合適濃度的瓊脂糖凝膠電泳中檢測(cè),根據(jù)是否出現(xiàn)與預(yù)期擴(kuò)增片段大小相符的條帶來(lái)判斷是否存在弓形蟲(chóng)感染,但必須設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照。此法敏感性高、特異性強(qiáng),任何生長(zhǎng)發(fā)育階段的蟲(chóng)體都能夠檢測(cè)出來(lái),適合大批量樣品檢測(cè)。
4.3.2 環(huán)介導(dǎo)等擴(kuò)增
該技術(shù)于2000年由日本學(xué)者建立,靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)周期短、操作簡(jiǎn)便、不需要特殊儀器設(shè)備,只要將模板和反應(yīng)液混合后放在水浴鍋中幾十分鐘就能肉眼觀察到結(jié)果,適宜在基層推廣應(yīng)用。
用于治療豬弓形蟲(chóng)病的藥物有很多,除螺旋霉素和氯林可霉素類(lèi)藥物外,還有磺胺類(lèi)藥物。使用磺胺六甲氧嘧啶治療病豬時(shí),按30~70 mg/(kg體重)肌肉注射,1次/d,連續(xù)注射3~5 d;使用復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶注射液治療時(shí),按10~20 mg/(kg體重)肌肉注射,1次/d,連用3 d,同時(shí)配合VA、VB12及其他礦物質(zhì)使用,增強(qiáng)機(jī)體免疫抵抗力;使用磺胺間甲氧嘧啶和三甲氧芐氨嘧啶,前者用70 mg/(kg體重),后者14 mg/(kg體重),口服1次/d,連續(xù)口服4 d;使用磺胺嘧啶和二甲氧芐氨嘧啶治療時(shí),前者用70 mg/(kg體重),后者用6 mg/(kg體重),口服2次/d,連用3~5 d。磺胺類(lèi)藥物和抗菌增效藥同時(shí)使用雖然有一定的療效,但復(fù)發(fā)率比較高,且存在副作用,因此,要嚴(yán)格控制用量。
由于弓形蟲(chóng)生活史比較復(fù)雜,感染途徑眾多,還能夠形成包囊逃避宿主的免疫攻擊,目前市面上還沒(méi)有能夠有效針對(duì)該病的疫苗,養(yǎng)殖場(chǎng)或養(yǎng)殖戶只能通過(guò)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理來(lái)防控該病。
養(yǎng)殖場(chǎng)或養(yǎng)殖戶應(yīng)增強(qiáng)生物安全意識(shí),加強(qiáng)豬群的飼養(yǎng)管理工作,定期對(duì)豬舍及周?chē)h(huán)境進(jìn)行消毒,但需要不定期更換消毒劑,以免產(chǎn)生耐藥性;定期通風(fēng)換氣,降低圈舍內(nèi)氨氣的濃度,以免影響豬群的日常生活;冬季要做好保暖措施,避免感染風(fēng)寒,導(dǎo)致豬群機(jī)體抵抗力降低;飼養(yǎng)員要及時(shí)清理排泄物,定期更換墊草,保持圈舍干燥、衛(wèi)生,防止因圈舍潮濕給弓形蟲(chóng)提供繁殖的溫床。
養(yǎng)殖場(chǎng)周?chē)蛏顓^(qū)禁止養(yǎng)貓,防止貓進(jìn)入豬舍接觸豬群,避免豬群誤食貓糞便的卵囊造成感染;場(chǎng)區(qū)周?chē)仓貌妒笃?、鋪撒滅鼠藥或給老鼠誘食有毒食物以減少或消滅鼠群,防止污染飼料和飲水;定期對(duì)豬群進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng),預(yù)防弓形蟲(chóng)病和其他寄生蟲(chóng)病的發(fā)生;禁用養(yǎng)殖場(chǎng)或養(yǎng)殖戶把生的肉屑直接投喂豬群,所有泔水應(yīng)當(dāng)加熱后再投喂。
一旦發(fā)現(xiàn)豬弓形蟲(chóng)疫情,要及時(shí)隔離發(fā)病豬群,避免健康豬群誤食排泄物造成感染;同時(shí),可選擇螺旋霉素、磺胺甲基異噁唑、阿奇霉素等藥物根據(jù)聯(lián)合用藥、穿梭用藥、輪換用藥的原則治療病豬;若出現(xiàn)病死豬、流產(chǎn)胎兒及排泄物,應(yīng)當(dāng)對(duì)其進(jìn)行無(wú)害化處理,徹底對(duì)病死豬生前使用過(guò)的水槽、料槽和圈舍進(jìn)行消毒,消滅病原。
豬弓形蟲(chóng)病的發(fā)生與飼養(yǎng)方式和環(huán)境條件密切相關(guān),只要養(yǎng)殖場(chǎng)或養(yǎng)殖戶增強(qiáng)生物安全意識(shí)、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、改善豬群生活環(huán)境、定期驅(qū)蟲(chóng)、實(shí)行全進(jìn)全出的養(yǎng)殖模式,即可最大程度地防控弓形蟲(chóng)病,保證生豬養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。